分子的紫外可見吸收光譜是由于分子中的某些基團吸收了紫外可見輻射光后，發(fā)生了電子能級躍遷而產(chǎn)生的吸收光譜。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu)，其吸收光能量的情況也就不會相同，因此，每種物質(zhì)就有其特有的、固定的吸收光譜曲線，可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測定該物質(zhì)的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎(chǔ)。
分光光度分析就是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。它是帶狀光譜，反映了分子中某些基團的信息?？梢杂脴藴使鈭D譜再結(jié)合其它手段進行定性分析。
根據(jù)Lambert-Beer定律說明光的吸收與吸收層厚度成正比，比耳定律說明光的吸收與溶液濃度成正比;如果同時考慮吸收層厚度和溶液濃度對光吸收率的影響，即得朗伯-比耳定律。即A=εbc，(A為吸光度，ε為摩爾吸光系數(shù)，b為液池厚度，c為溶液濃度)就可以對溶液進行定量分析。
將分析樣品和標準樣品以相同濃度配制在同一溶劑中，在同一條件下分別測定紫外可見吸收光譜。若兩者是同一物質(zhì)，則兩者的光譜圖應(yīng)完全一致。如果沒有標樣，也可以和現(xiàn)成的標準譜圖對照進行比較。這種方法要求儀器準確，精密度高，且測定條件要相同。
實驗證明，不同的極性溶劑產(chǎn)生氫鍵的強度也不同，這可以利用紫外光譜來判斷化合物在不同溶劑中氫鍵強度，以確定選擇哪一種溶劑。
在水和廢水監(jiān)測中的應(yīng)用，對于一個水系的監(jiān)測分析和綜合評價，一般包括水相(溶液本身)、固相(懸浮物、底質(zhì))、生物相(水生生物)。在水質(zhì)的常規(guī)監(jiān)測中，紫外可見分光光度法占有較大的比重。由于水和廢水的成分復(fù)雜多變，待測物的濃度和干擾物的濃度差別很大，在具體分析時必須選擇好分析方法。
在農(nóng)產(chǎn)品和食品分析中可用于檢測的組分或成分有蛋白質(zhì)、賴氨酸、葡萄糖、維生素C、硝酸鹽、亞硝酸鹽、砷、汞等;
在植物生化分析中可用于檢測葉綠素、全氮和酶的活力等;
在飼料分析中可用于檢測煙酸、棉酚、磷化氫和甲酯等。
關(guān)于可見分光光度計的使用環(huán)境也有很多說法，當然了除了使用環(huán)境之外還有使用時的注意事項。
那么具體都有哪些呢?下面我們就來一起看看吧。
可見分光光度計的工作環(huán)境
1、儀器應(yīng)該安放在干燥的房間內(nèi)，環(huán)境溫度為5°C~35C， 相對濕度不超過85%.
2、使用時放置在堅固平穩(wěn)的工作臺上，且避免強烈的震動或持續(xù)的震動。
3、室內(nèi)照明不易太強，且避免直射日光的照射。
4、電扇不易直接向儀器吹風，以免因氣流影響儀器的正常使用。
5、盡量遠離高強度的磁場、電廠及發(fā)生高頻波的電器設(shè)備。
6、工作電壓為AC220V土22V,頻率為50Hz土1Hz
7、避免在有硫化氫、亞硫酸氟登腐蝕氣體的場所使用。
可見分光光度計使用注意事項
1、當儀器停止工作時，應(yīng)關(guān)閉儀器電源開關(guān)，在切斷電源。
2、為了避免儀器積灰和沾污，在停止工作的時間里，用防塵罩罩住儀器，同時在罩子內(nèi)放置數(shù)袋防潮劑，以免燈室受潮、反射鏡鏡面發(fā)霉或沾污，影響儀器日后的工作。
3、儀器工作數(shù)月或搬動后，要檢查波長準確度，以確保儀器的使用和測定精度。
4、每次使用儀器后應(yīng)對比色架進行清潔，防止樣品對比色皿架的腐蝕。
紫外可見分光光度計使用環(huán)境溫度盡可能保持在15-30攝氏度，這樣才能保持電器元件穩(wěn)定工作，且不易老化，從而使分光光度計不易損壞，燈源的使用壽命更久。
如果不具備這樣的室溫條件，即在高溫的情況下，也要盡量縮短分光光度計開機時間，從而高效使用分光光度計，避免電器元件長期在高溫下運轉(zhuǎn)。如在低溫下，使預(yù)熱時間比常溫下的預(yù)熱時間要長，這樣才能保證在儀器穩(wěn)定的情況下進行測試使用；
分光光度計是利用物質(zhì)對光的選擇性吸收的特性，以較純的單色光作為入射光，測定物質(zhì)對光的吸收，從而對物質(zhì)進行定性或定量分析的儀器。在使用過程中常常會出現(xiàn)測量誤差，這些誤差又是如何產(chǎn)生的呢？下面小編為大家介紹分光光度計測量誤差產(chǎn)生原因。 1、復(fù)色光對比耳定律的偏離 比耳定律成立的前提條件是人射光是單色光，但是精度再高的儀器，即使是雙單色器的分光光度計，也只能獲得近乎單色的光，無法獲得純單色光，它仍然含有狹窄光通帶，具有復(fù)色光的性質(zhì)。而復(fù)色光會導(dǎo)致比耳定律的正或負偏離?！ 」潭íM縫的紫外分光光度計光譜帶寬一般為1nm或2nm，可調(diào)狹縫的可以做到0、1nm；可見分光光度計帶寬6nm、snm，甚至十幾納米?！ 」庾V帶寬應(yīng)該是越小越好，但是，隨著光譜分辨率的提高，儀器的靈敏度降低，所以，選擇儀器時要綜合考慮各種條件的影響。當溶液濃度較小且單色光較純時，可近似認為符合比耳定律?！ ?、雜散光的影響 雜散光是指進人檢測器的處于待測波長光譜帶寬范圍外的其他波長組分，它是光譜測量中誤差的主要來源?！ ‘a(chǎn)生原因有： 分光光度計的色散元件、反射鏡、透鏡及單色器內(nèi)壁灰塵等。在分光光度計工作波段邊緣波長處，由于單色器透光率、光源輻射強度、檢測器靈敏度都較低，雜散光的影響更為顯著?！ ‰s散光限制儀器的分析上限可引起嚴重的測量誤差，實際工作中，在定量分析時，一般在吸收峰或其附近處測量樣品吸光度，如果在分析波長處含有雜散光，這時樣品的透光率較小，而雜散光大部分透過，使測量吸光度低于真實吸光度。 3、儀器噪聲對測t的影響 儀器噪聲也是儀器的一個重要指標，它表征儀器做稀溶液的能力。是疊加在待測量的分析信號中的不需要的信號，掃描100%T和0%T線，可觀察到分光光度計的絕對噪聲水平，如果儀器噪聲較大，會掩蓋較小的測量信號，一般用噪音的二倍來表示儀器的靈敏度?！ ?、波長和吸光度準確度 樣品的每一個值都是在一定的波長下測得的，如果，波長誤差很大，測出的值肯定不準。吸光度準確度也是用戶對儀器的直接要求，更應(yīng)引起足夠的重視。 國家計量檢定規(guī)程規(guī)定雙光束紫外可見分光光度計透射比準確度為A級士0、6%，B級土1、0%。
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