紫外可見分光光度計在生物學(xué)的應(yīng)用分析中, 常見的有蛋白質(zhì)含量檢測;一般是在蛋白質(zhì)的吸收峰上作吸光度測定。因為蛋白質(zhì)對紫外光的主要吸收波長為280nm, 所以, 采用光度測量模式, 將儀器的波長GOTO 到蛋白質(zhì)的最大吸收峰波長280nm 上, 測試其吸光度大小, 就可完成對蛋白質(zhì)的定量檢測。
目前, 紫外可見分光光度計的應(yīng)用主要是在定量分析方面。先從生命科學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用來介紹。紫外可見分光光度計在生命科學(xué)中應(yīng)用非常廣泛。最主要的是以下5 個方面。
1. 蛋白質(zhì)分析工作中的應(yīng)用
紫外可見分光光度計在蛋白質(zhì)的分析中, 最主要的是作蛋白質(zhì)含量檢測;一般是在蛋白質(zhì)的吸收峰上作吸光度測定。因為蛋白質(zhì)對紫外光的主要吸收波長為280nm, 所以, 采用光度測量模式, 將儀器的波長GOTO 到蛋白質(zhì)的最大吸收峰波長280nm 上, 測試其吸光度大小, 就可完成對蛋白質(zhì)的定量檢測。
2. 核酸分析工作中的應(yīng)用
紫外可見分光光度計在核酸分析中的應(yīng)用, 主要是用來對核酸的定量檢測; 因為核酸的吸收峰在260nm。我們只要采用光度測量模式, 將紫外可見分光光度計的波長GOTO 到核酸的最大吸收峰260nm 上, 測試其吸光度大小就是了。
3. 氨基酸分析工作中的應(yīng)用
紫外可見分光光度計在氨基酸分析中的應(yīng)用, 主要是用來對氨基酸的定量檢測。因為氨基酸對紫外光的主要吸收波長為230nm, 所以, 我們只要采用光度測量模式, 將紫外可見分光光度計儀器的波長GOTO 到氨基酸的最大吸收峰230nm 上, 就可測試其吸光度大小, 從而計算出氨基酸的含量。但是, 因為氨基酸分析時, 一般是將它溶解在水中, 而水在230 nm 附近有很多干擾吸收線, 所以, 在用紫外可見分光光度計對氨基酸分析檢測時, 要注意防止干擾的問題。此外, 還需注意: 只有少數(shù)氨基酸有紫外吸收, 多數(shù)氨基酸無紫外吸收或很弱, 測定時要衍生化后再測。
4. 糖類分析測試工作中的應(yīng)用
紫外可見分光光度計在糖的分析中, 主要是作定量檢測。因為糖對紫外光的主要吸收波長為218nm, 所以, 對糖類進(jìn)行分析時, 只要采用光度測量模式, 將紫外可見分光光度計儀器的波長GOTO 到氨基酸的最大吸收峰218 nm上, 就可測試其吸光度大小, 從而計算出糖的含量。
5. 多糖分析測試工作中的應(yīng)用
紫外可見分光光度計在多糖的分析中, 主要也是作定量檢測。因為多糖對紫外光的主要吸收波長為206nm, 所以, 我們只要采用光度測量模式, 將紫外可見分光光度計儀器的波長GOTO 到多糖的最大吸收峰206 nm 上, 就可測試其吸光度大小, 從而計算出多糖的含量。
但是多糖的分析難度很大。因為, 在206 nm 處的時候, 光源(氘燈) 的能量已經(jīng)很弱, 儀器光學(xué)系統(tǒng)的能量輸出也很低, 光電倍增管的靈敏度也很低, 206nm 左右的干擾也很大。所以, 用紫外可見分光光度計作多糖的分析是很難的事, 目前許多科學(xué)家正在研究中。
關(guān)于可見分光光度計的使用環(huán)境也有很多說法，當(dāng)然了除了使用環(huán)境之外還有使用時的注意事項。
那么具體都有哪些呢?下面我們就來一起看看吧。
可見分光光度計的工作環(huán)境
1、儀器應(yīng)該安放在干燥的房間內(nèi)，環(huán)境溫度為5°C~35C， 相對濕度不超過85%.
2、使用時放置在堅固平穩(wěn)的工作臺上，且避免強(qiáng)烈的震動或持續(xù)的震動。
3、室內(nèi)照明不易太強(qiáng)，且避免直射日光的照射。
4、電扇不易直接向儀器吹風(fēng)，以免因氣流影響儀器的正常使用。
5、盡量遠(yuǎn)離高強(qiáng)度的磁場、電廠及發(fā)生高頻波的電器設(shè)備。
6、工作電壓為AC220V土22V,頻率為50Hz土1Hz
7、避免在有硫化氫、亞硫酸氟登腐蝕氣體的場所使用。
可見分光光度計使用注意事項
1、當(dāng)儀器停止工作時，應(yīng)關(guān)閉儀器電源開關(guān)，在切斷電源。
2、為了避免儀器積灰和沾污，在停止工作的時間里，用防塵罩罩住儀器，同時在罩子內(nèi)放置數(shù)袋防潮劑，以免燈室受潮、反射鏡鏡面發(fā)霉或沾污，影響儀器日后的工作。
3、儀器工作數(shù)月或搬動后，要檢查波長準(zhǔn)確度，以確保儀器的使用和測定精度。
4、每次使用儀器后應(yīng)對比色架進(jìn)行清潔，防止樣品對比色皿架的腐蝕。
紫外可見分光光度計使用環(huán)境溫度盡可能保持在15-30攝氏度，這樣才能保持電器元件穩(wěn)定工作，且不易老化，從而使分光光度計不易損壞，燈源的使用壽命更久。
如果不具備這樣的室溫條件，即在高溫的情況下，也要盡量縮短分光光度計開機(jī)時間，從而高效使用分光光度計，避免電器元件長期在高溫下運(yùn)轉(zhuǎn)。如在低溫下，使預(yù)熱時間比常溫下的預(yù)熱時間要長，這樣才能保證在儀器穩(wěn)定的情況下進(jìn)行測試使用；
熒光分光光度計與紫外分光光度計屬一類產(chǎn)品，結(jié)構(gòu)均由激發(fā)光源、單色器、樣品室、光電倍 增管和讀出（記錄）裝置所組成。但是它們光源是不同的，熒光分光光度計多采用高壓汞燈、氙燈和激光光源。同時，熒光測量多采用激發(fā)光和發(fā)射光成直角的光路，儀器組件的布置有所不同。 下圖為某型號熒光分光光度計的光學(xué)系統(tǒng)圖，其主要工作原理是：當(dāng)光源光束經(jīng)入射單色器色散，提取所需波長單色光照射于樣品上，由樣品發(fā)出的熒光經(jīng)發(fā) 射單色器色散后照射于光電倍增管，光電倍增管把熒光強(qiáng)度信號轉(zhuǎn)化成電信號并經(jīng)放器放大后記錄或讀出信號。
熒光分光光度計的光學(xué)系統(tǒng)圖
1.氙燈（150W）；2.透鏡；3.光束分裂器；4.水平狹縫；5.激發(fā)單色器光柵；6.參考放電管；7.關(guān)閘；8.樣品室關(guān)閘；10.發(fā)射單色器光柵；12.光電倍增管 (1)激發(fā)光源：要比吸收法中光源強(qiáng)度大。 汞燈：發(fā)射強(qiáng)度大、穩(wěn)定，不需復(fù)雜電源，但譜線不連續(xù)，數(shù)目少，主要用于濾片熒光計。 碘鎢燈：提供連續(xù)光譜300~700mn。 氙燈：發(fā)出射線的強(qiáng)度大，譜線連續(xù)，分布于200~700 nm光域內(nèi)，且在300~400nm 波段內(nèi)射線強(qiáng)度幾乎相等，但該燈的電源功率要求大，且電源穩(wěn)定，因此電源結(jié)構(gòu)復(fù)雜。 激光：發(fā)光強(qiáng)度大，能極大地提高熒光分析的靈敏度。 (2)樣品池：通常由石英池（液體樣品用）或固體樣品架（粉末或片狀樣品）組成。測量液體時，光源與檢測器成直角安排；測量固體時，光源與檢測器成銳角安排。低溫?zé)晒鉁y定時在一樣品池外套一個液氮的透明石英真空瓶。 (3)單色器：熒光分光計通常具有兩個濾光片：第一濾光片在光源與樣品池之間，濾去不需要的光，讓需要的激發(fā)光通過。第二濾光片在樣品池與檢測器之間，濾去溶劑散射 光、容器表面散射光、雜質(zhì)發(fā)出的光等，讓待測物質(zhì)發(fā)射的熒光通過。 熒光分光光度計通常具有兩個光柵，位置同濾光片，單色性好。 (4)檢測器：因熒光通常較弱，采用光電倍增管作檢測器，靈敏度高。選擇光電倍增管要考慮：響應(yīng)波長、靈敏度和嗓聲水平。 藍(lán)敏管對蛋白質(zhì)、核酸的測量適用，而紅敏管則適用于熒光染料檢測。 (5)顯示系統(tǒng)：光度表、計算機(jī)操作系統(tǒng)等。 補(bǔ)充說明：與紫外分光光度計的結(jié)構(gòu)區(qū)別： 1.熒光分光光度計采用的是垂直的測量方式，以消除透射光的影響。 2.檢測器前面有無單色器，熒光分光光度計有兩個單色器又上圖可以看出，能夠獲得單色性較好的激發(fā)光并消除其他雜散光干擾。
正確了解熒光分光光度計的結(jié)構(gòu)，也是能夠幫助我們更好使用和操作，一定要仔細(xì)閱讀哈~
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