膳食纖維與人體健康的關(guān)系十分緊密也越來越受到人們的重視,于是對于食物中膳食纖維成分的數(shù)據(jù)的需求就越來越大,這對測定食物中膳食纖維的方法就有了一定的要求。總結(jié)膳食纖維分析方法,其原理主要是依據(jù)膳食纖維可進行的化學反應(yīng)和酶反應(yīng),歷史上膳食纖維分析的重要方法包括非酶重量法如粗纖維、中性洗滌劑纖維和酸性洗滌劑纖維的分析方法;酶重量方法主要有AOAC提供的總纖維、可溶纖維和不溶纖維的測定方法;酶化學方法主要有酶顯色法、酶氣相色譜法、酶高壓液相色譜法,以及歐洲相應(yīng)機構(gòu)對于膳食纖維測定的各種研究和應(yīng)用方法。纖維測定儀是對纖維測定在重要儀器,是現(xiàn)代科學研究的不二選擇。
我國的不同部門根據(jù)不同時期膳食纖維分析方法的改進,發(fā)布了系列國家標準方法。早的標準是我國衛(wèi)生部1985發(fā)布GB5009.10-85(食品中粗纖維的測方法),該方法原理是在硫酸作用下,樣品中的糖、淀粉、果膠質(zhì)和半纖維素經(jīng)水解除去后,再用堿處理,除去蛋白質(zhì)及脂肪酸,的殘渣為粗纖維。如其中含有不溶于酸堿的雜質(zhì),可灰化后除去。該標準用于植物類食品中粗纖維含的測定。以該分析方法為基礎(chǔ),國家標準局1985年發(fā)布了GB5515-85糧食、油料檢驗一粗纖維素測定法,用于指導商品糧食中粗纖維素的測定。商業(yè)部1987年出臺了GB8310-87茶粗纖維測定,用于茶葉中粗纖維含的測定。1989年出臺GB10469-89水果、蔬菜粗纖維的測定方法,用于水果、蔬菜產(chǎn)品粗纖維含量的測定。
GB9822-88(谷物不溶性膳食纖維測定法)是商業(yè)部1988年批準的用于谷物不溶性膳食纖維的測定,該方法原理是谷物樣品經(jīng)中性洗滌劑溶液浸煮,殘渣用熱水充分洗滌后,加入a一淀粉酶溶液以分解殘留的結(jié)合態(tài)淀粉,再用水、丙酮洗滌,烘干即得不溶性膳食纖維。GB12394-90(食品中不溶性膳食纖維的測定方法),衛(wèi)生部1990年發(fā)布,是我國目前普遍使用的方法。該標準規(guī)定了食物中不溶性膳食纖維的中性洗滌劑測定方法,適用于各類植物性食物和含有植物性食物的混合食物中不溶性膳食纖維的測定,其小檢出限為O.lmg.該方法原理是在中性洗滌劑(主要成分通常是十二烷基硫酸鈉)的消化作用,樣品中的糖、淀粉、蛋白質(zhì)、果膠等物質(zhì)被溶解除去,不能消化的殘渣為不溶性膳食纖維,主要包括纖維素、半纖維素、木質(zhì)素、角質(zhì)和二氧化硅等,并包括不溶性灰分。該法測得的纖維稱為中性洗滌劑纖維。若采用酸性洗滌劑(主要成分是十六烷三甲基澳化按)對樣品進行消化,則測得的纖維稱為酸性洗滌劑纖維。中性洗滌纖維素是對總的植物細胞壁含量的估計,主要包括纖維素、半纖維素和木質(zhì)素。酸性洗滌纖維是對纖維素和木質(zhì)素含量的估計,根據(jù)二者的差值可估測飼料中半纖維素含。粗纖維中纖維素、半纖維素和木質(zhì)素的比例常用于指導豬飼料原料的配制。
通過纖維測定儀的測定與粗纖維測定法相比,洗滌劑測定法可以回收全部的纖維素、不可溶性半纖維素、木質(zhì)素。但洗滌劑法只能測定不可溶性膳食纖維,不能測定可溶性膳食纖維。隨著對膳食纖維研究的升級,以及越來越多的膳食纖維品種的出現(xiàn),以上傳統(tǒng)的非酶一重量法已表現(xiàn)出明顯的不足。
1. 將坩堝烘干至恒重,記錄其重量至小數(shù)點后四位;
2. 將烘干至恒重的樣品放入上述坩堝,記錄其重量至小數(shù)點后四位;
3. 上述兩項相減,計算樣品重量;
4. 將儀器下方的三通閥(即單元控制旋鈕)旋至CLOSED;
5. 將裝有樣品的坩堝水平準確放入儀器內(nèi),對齊(用坩堝夾取/放坩堝時,先把虎口張至足夠大,且一定要夾在其中部靠上位置,否則極易把坩堝帶翻或打破,要耐心緩慢操作);
6. 緩慢下壓手柄,使消解管壓緊坩堝(下壓桿下壓并外拔來固定,內(nèi)推放開;下壓時一定要先看坩堝有沒放直,上抬時動作一定要慢,否則極易把坩堝帶翻);
7. 接通電源及冷凝水(打開水龍頭);
8. 通過時間按鈕設(shè)定酸解(或堿解)時間;
9. 將配好的酸液(或堿液)(此處剛開始,由于設(shè)備為冷的,故為保持溫度一致,以防反應(yīng)管因溫差而破裂,故不用預(yù)熱,以后再行進換液,則都需提前預(yù)熱)從儀器頂部加入消解管內(nèi);
10. 設(shè)定加熱擋位(一般選擇加熱至液體沸騰即可);
11. 酸解(或堿解)完成后,即時間用完后,關(guān)閉紅外加熱;
12. 等液體冷至不再沸騰,將三通閥旋至VACUUM檔,打開蠕動泵,進行排液(若液體排空非常緩慢,可關(guān)閉蠕動泵,將三通閥旋至PRESSURE檔,打開反吹泵,進行反吹,然后再將三通閥旋至VACUUM檔,打開蠕動泵進行排液,反復操作,直至液體排空);
13. 液體排空后,將三通閥旋至CLOSED檔,此時按實驗方案加入已經(jīng)預(yù)熱好的水溶液進行清洗,而后排空,反復操作此步驟,直至PH值為中性;
14. 液體排空后,將三通閥旋至CLOSED檔,此時按實驗方案加入已經(jīng)預(yù)熱的堿液(或酸液)進行堿解(或酸解)(此處與前方酸解相呼應(yīng),即若前面先進行酸解,此處則進行堿解,反之亦然),重復步驟8-13;
15. 按實驗方案進行后續(xù)處理,最后用熱水清洗儀器,清洗完畢后,關(guān)好冷卻水,關(guān)閉電源;
16. 最后按實驗方案處理數(shù)據(jù),計算結(jié)果。
纖維測定儀是依據(jù)目前常用的酸堿消煮法消煮樣品,并進行重量測定來得到試樣的纖維含量的儀器。
技術(shù)指標
1、測定對象:各種飼料、糧食、谷物、食品及其他需測定纖維含量的農(nóng)副產(chǎn)品;
2、測試樣品數(shù):6個/次;
3、重復性誤差:
纖維含量在10%以下,絕對值誤差≤0.4;
纖維含量在10%以上,相對誤差≤4%;
4、測定時間:在儀器上所需約90min(包括酸30分、堿30分,抽濾和洗滌約30分);
5、電源:AC220V/50HZ;
6、功率:3.3KVA;
7、體積:540×450×670mm3;
8、重量:28kg。
纖維測定儀安全規(guī)則
1.工作中,使用的容器和樣品必須和儀器的溫度(約100度)相一致;
2.維護及清洗前請拔掉電源插座,且紅外加熱管和坩堝等容器都必須是冷卻的,可用濕布和難燃非腐蝕性的清洗劑來清洗。
纖維測定儀樣品處理
1.將需要測定的樣品磨粉碎至40-60目,過篩,烘干至恒重;
2.若樣品必須在新鮮狀態(tài)下測量(即在含水狀態(tài)下),則必須在同樣條件下測量一個不含水的干樣,以確定里面的水含量;
3.如果樣品脂肪含量超過5-10%,則以25ml每克樣品的量,用石油醚進行脫脂處理(蒸發(fā)殘留物不超過1g/100ml)。
纖維測定儀儀器操作總則
1.將坩堝烘干至恒重,記錄其重量至小數(shù)點后四位;
2.將烘干至恒重的樣品放入上述坩堝,記錄其重量至小數(shù)點后四位;
3.上述兩項相減,計算樣品重量;
4.將儀器下方的三通閥(即單元控制旋鈕)旋至CLOSED;
5.將裝有樣品的坩堝水平準確放入儀器內(nèi),對齊(用坩堝夾取/放坩堝時,先把虎口張至足夠大,且一定要夾在其中部靠上位置,否則極易把坩堝帶翻或打破,要耐心緩慢操作);
6.緩慢下壓手柄,使消解管壓緊坩堝(下壓桿下壓并外拔來固定,內(nèi)推放開;下壓時一定要先看坩堝有沒放直,上抬時動作一定要慢,否則極易把坩堝帶翻);
7.接通電源及冷凝水(打開水龍頭);
8.通過時間按鈕設(shè)定酸解(或堿解)時間;
9.將配好的酸液(或堿液)(此處剛開始,由于設(shè)備為冷的,故為保持溫度一致,以防反應(yīng)管因溫差而破裂,故不用預(yù)熱,以后再行進換液,則都需提前預(yù)熱)從儀器頂部加入消解管內(nèi);
10.設(shè)定加熱擋位(一般選擇加熱至液體沸騰即可);
11.酸解(或堿解)完成后,即時間用完后,關(guān)閉紅外加熱;
12.等液體冷至不再沸騰,將三通閥旋至VACUUM檔,打開蠕動泵,進行排液(若液體排空非常緩慢,可關(guān)閉蠕動泵,將三通閥旋至PRESSURE檔,打開反吹泵,進行反吹
然后再將三通閥旋至VACUUM檔,打開蠕動泵進行排液,反復操作,直至液體排空);
13.液體排空后,將三通閥旋至CLOSED檔,此時按實驗方案加入已經(jīng)預(yù)熱好的水溶液進行清洗,而后排空,反復操作此步驟,直至PH值為中性;
14.液體排空后,將三通閥旋至CLOSED檔,此時按實驗方案加入已經(jīng)預(yù)熱的堿液(或酸液)進行堿解(或酸解)(此處與前方酸解相呼應(yīng),即若前面先進行酸解,此處則進行堿解,反之亦然),重復步驟8-13;
15.按實驗方案進行后續(xù)處理,最后用熱水清洗儀器,清洗完畢后,關(guān)好冷卻水,關(guān)閉電源;
16.最后按實驗方案處理數(shù)據(jù),計算結(jié)果。
17.備注:使用該設(shè)備測定不同組分,請查閱具體的方法,目前該設(shè)備已備有以下方法,如有需要可向設(shè)備管理員處尋求幫助:
a)粗纖維檢測法(Weende法,AOAC);
b)氧化硅的測定;
c)酸性洗滌木質(zhì)素的測定;
d)酸性洗滌纖維的測定;
e)高錳酸鉀法測定木質(zhì)素和植物纖維素;
f)中性洗滌纖維的測定等。