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看東看西還不如看液相色譜儀的這篇內(nèi)容 液相色譜工作原理

時間:2020-05-26    來源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     
    液相色譜儀的應(yīng)用,可用于高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差以及具有生理活性物質(zhì)的分析。一般來說,沸點(diǎn)在450℃以下,相對分子質(zhì)量小于450的有機(jī)物可用液相色譜儀分析,但這些物質(zhì)只占有機(jī)物的15%~20%,其余的80%~85%有機(jī)物原則上都可采用液相色譜儀分析。
    色譜柱的使用和維護(hù),色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要,稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中,需要注意下列問題,以維護(hù)色譜柱。調(diào)節(jié)流速太快,避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料,因此在調(diào)節(jié)流速時應(yīng)該緩慢進(jìn)行,在閥進(jìn)樣時閥的轉(zhuǎn)動不能過緩。
    反沖色譜柱,一般說來色譜柱不能反沖,只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時,才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會迅速降低柱效,預(yù)柱和保護(hù)柱,選擇使用適宜的流動相(尤其是pH),以避免固定相被破壞。有時可以在進(jìn)樣器前面連接一預(yù)柱,分析柱是鍵合硅膠時,預(yù)柱為硅膠,可使流動相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”,避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi),需要對樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。
    液相色譜儀的基本結(jié)構(gòu),由輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等組成。工作原理,利用混合物各組分在固定相和流動相中溶解、分配或吸附等化學(xué)作用性能的差異,使各組分在作相對運(yùn)動的兩相中反復(fù)多次受到上述各作用力而達(dá)到相互分離。
    從液相色譜儀工作流程中看到,色譜柱是實(shí)現(xiàn)分離的核心部件,要求柱效高、柱容量大和性能穩(wěn)定。柱性能與柱結(jié)構(gòu)、填料特性、填充質(zhì)量和使用條件有關(guān)。色譜填料:經(jīng)過制備處理后,用于填充色譜柱的物質(zhì)顆粒,通常是5-10粒徑的球形顆粒。色譜柱管:內(nèi)部拋光的不銹鋼管。典型的液相色譜分析柱尺寸是內(nèi)徑4.6mm,長250mm。色譜柱:也稱固定相,是將色譜填料填充到色譜柱管中所構(gòu)成的,色譜柱的填充,干法填充:在硬臺面上鋪上軟墊,將空柱管上端打開垂直放在軟墊上,用漏斗每次灌入50-100mg填料,然后垂直臺面墩10-20次。濕法填充:又稱淤漿填充法,使用專門的填充裝置。

高效液相色譜儀的原理特點(diǎn)

    高效液相色譜儀可以完成二元高壓梯度洗脫,也可以拓展為制備系統(tǒng),采用高壓混合器連接兩個高壓恒流泵,利用RS232通訊,即可實(shí)現(xiàn)梯度分析;

    便于用戶自由選擇與搭配,混合器材主要由不銹鋼、生物惰性PEEK等構(gòu)成,用途廣泛;

    可廣泛應(yīng)用于研究開發(fā)、醫(yī)藥檢驗(yàn)、食品檢測、化工分析、環(huán)境監(jiān)測等眾多分析領(lǐng)域。

    高效液相色譜儀分離原理:液-液分配(Liquid-liquid Partition Chromatography)及化學(xué)鍵合相色譜(Chemically Bonded Phase Chromatography) 流動相和固定相都是液體。

    流動相與固定相之間應(yīng)互不相溶(極性不同,避免固定液流失),有一個明顯的分界面。

    當(dāng)試樣進(jìn)入色譜柱,溶質(zhì)在兩相間進(jìn)行分配。達(dá)到平衡時,高效液相色譜儀報價,服從于高效液相色譜計(jì)算公式;

    6種定量計(jì)算方法:歸一法、修正歸一法、帶比例因子的修正歸一法、內(nèi)標(biāo)法、外標(biāo)法,高效液相色譜儀適用范圍,以及指數(shù)計(jì)算法。

    高效液相色譜儀特點(diǎn):

    1、梯度洗脫內(nèi)部軟件可自控制,編輯、存貯60個梯度方法,運(yùn)行復(fù)雜的梯度程序;

    2、泵形式:串聯(lián)雙柱塞 浮動式密封圈;泵頭自沖洗功能,泵無須手動排空即可輸液“自吸式單向閥”技術(shù),可延長密封圈使用壽命;

    3、光路系統(tǒng)采用精密定位結(jié)構(gòu)和獨(dú)特的散熱技術(shù),高效的光學(xué)系統(tǒng)和數(shù)字過濾;

    4、程序化的溶劑類和壓縮因子,可自動補(bǔ)償;完整的預(yù)清洗功能,更于快速溶劑更換;

    5、波長調(diào)節(jié)功能:既可由鍵盤面板控制也可由程序軟件設(shè)定,全封閉集成型光電檢測元件,無需任何機(jī)械部分調(diào)整即可選擇或改變波長;

    6、光源運(yùn)行時間在線監(jiān)測并顯示,方便用戶確定光源壽命;

    7、三條流量校正曲線以及特有的多點(diǎn)參數(shù)校正,保障了極高的流量準(zhǔn)確性;

    8、梯度:高壓2-3元;梯度方式:高壓,梯度洗脫內(nèi)部軟件可自控制,可通過PC機(jī)及泵控制;

    9、實(shí)時顯示樣品池和參比池能量,方便判斷光源和流通池狀態(tài);

    10、紫外檢測器具有自動波長定位調(diào)整,自動調(diào)零,多量程輸出選擇;

    11、智能化高,可實(shí)現(xiàn)網(wǎng)絡(luò)化平臺監(jiān)控,提高了你的QC效益;

    12、自動化,讓你從繁鎖的分析操作中解放出更多的時間。

標(biāo)簽: 高效液相色譜儀
高效液相色譜儀 高效液相色譜儀的原理特點(diǎn)_高效液相色譜儀

液相色譜儀分離的目的必須十分明確的幾點(diǎn)

  液相色譜儀分離的目的必須十分明確,下面的問題在建立方法之初就應(yīng)確定: ?。?)主要目的是什么?定量或定性,還是定性、定量同時做?; ?。?)是否有必要解析出樣品的所有成分?譬如可能有必要分離出產(chǎn)品中的所有降解物或雜質(zhì),以使含量測定結(jié)果更加可靠,但卻沒必要將它們彼此完全分開?! 。?)如要求定量分析,準(zhǔn)確度與精密度需多大?樣品主要成分的精密度通常能達(dá)到±1—2%,特別是不需樣品預(yù)處理的情況?! 。?)特殊化合物可能會以不同的樣品形式出現(xiàn)(如:原料藥,一種或多種形態(tài),環(huán)保樣品等)。是否需要一種以上的HPLC方法?單一方法分離不同形態(tài)樣品是否理想? ?。?)一次將分析多少樣品?當(dāng)必須同時處理大量樣品時,運(yùn)行時間將變得非常重要?! ∮袝r甚至為了縮短運(yùn)行時間而以犧牲樣品分離度作代價,如縮短柱長或加快流速。當(dāng)一次分析的樣品數(shù)目超過10個,運(yùn)行時間一般應(yīng)控制在20min以內(nèi)?! 。?)將要使用該方法的實(shí)驗(yàn)室中,有哪些HPLC設(shè)備?色譜柱能否恒溫系統(tǒng)能否做梯度洗脫?該方法是否可在不同設(shè)計(jì)與生產(chǎn)的設(shè)備上運(yùn)行?  方法建立實(shí)驗(yàn)開始之前,應(yīng)明確對方法的這些要求。

標(biāo)簽: 液相色譜儀
液相色譜儀 液相色譜儀分離的目的必須十分明確的幾點(diǎn)_液相色譜儀

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