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液相色譜儀管路阻塞的原因與解決辦法 液相色譜解決方案

時間:2020-06-03    來源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     

液相色譜管路阻塞的原因:

1.沒有很好過濾流動相; 2.樣品中有微粒; 3.泵或進樣器墊圈產(chǎn)生碎片; 4.預(yù)柱、護柱和分析柱中漏出填料; 5,毛刺和銼屑進入; 6.流動相中的結(jié)晶鹽; 7.微生物 8.系統(tǒng)中進入了其它顆粒性物質(zhì)。

液相色譜管路阻塞解決方法:

系統(tǒng)中管路阻塞的現(xiàn)象很少見,常見的是燒結(jié)過濾片(玻璃砂芯)阻塞。用燒結(jié)過濾器或過濾片(孔徑2-10um)能去掉阻塞管路的微粒(如0.25mm管徑)。用系統(tǒng)分段法檢查阻塞的管路,從后向前分別松開接頭檢查,找到阻塞管路后,應(yīng)立即拆下來疏導(dǎo)或換新。

如果是非剛性物質(zhì)阻塞,如生物樣品中的生化物質(zhì)(蛋白質(zhì))、微生物等,可用極細的金屬絲導(dǎo)通,也可以在火頭上燒一燒,使有機物炭化,而后再導(dǎo)通。

如果是剛性物質(zhì)阻塞,要導(dǎo)通則十分困難,采用反沖的辦法有時能成功。就是將管子調(diào)頭用泵沖洗。操作時要注意保護眼睛和裸露的皮膚,因阻塞物會以很高的速度沖出來。無法導(dǎo)通的管路要換上同樣規(guī)格的管子。如果換上新管后又被阻塞,則應(yīng)該停機檢查上面提到的引起阻塞的幾種原因。

色譜柱是化學實驗中zui常見、常用的化工儀器之一,正確而有效的使用方法,不僅能夠延長色譜柱的使用壽命,也能確保試驗的準確性。

1.”保護柱”的使用能延長色譜柱的使用壽命。”保護柱”是很短的色譜柱,填裝和液相色譜柱相同的填料。正確使用”保護柱”,可以起到阻攔一些容易損壞液相色譜柱的物質(zhì)的作用。從而達到延長柱子壽命的效果。相反,如果使用”保護柱”不當,可能會縮短色譜柱的使用壽命。例如,在保護柱使用過程中,如果污染達到一定程度而沒有及時更換,累積的雜物很可能會沖入色譜柱中,反而會造成色譜柱損壞。因此,在使用”保護柱”時,zui重要的是要知道什幺時候該換保護柱。該換的時候就必須要立即更換。

                          

2.選擇高品質(zhì)的色譜柱,并正確使用,這樣可以延長色譜柱的使用壽命。一般認為同一廠牌、同一型號的色譜柱之間的品質(zhì)都相同,對品質(zhì)管理很嚴格的廠家而言,這說 法是成立的。但如果廠家品質(zhì)管理不夠嚴格,即使是同一批號的新色譜柱之間的品質(zhì)也有差異。所以,選用色譜柱時必須選擇管理嚴格的高品質(zhì)色譜柱,我們知道,任何色譜柱使用過后都會產(chǎn)生變化。尤其如在強酸或強堿條件下使用,色譜柱更易產(chǎn)生變化。因此,應(yīng)盡量選用pH適用范圍大的色譜柱。在開發(fā)新分析方法時,許多專家建議不 要使用舊色譜柱。因色譜柱一經(jīng)使用。柱性會改變;如此一來,使用舊色譜柱開發(fā)出來的新分析方法,很可能在再使用同廠牌的新色譜柱分析時。發(fā)生無法達到預(yù)定效果的情 況。總的說。開發(fā)新分析方法時要使用品質(zhì)好的新色譜柱;并且一支色譜柱使用在一種分析方法上;則色譜柱壽命可以延長。

3.定期沖洗色譜柱。一般柱子使用一段時間后總會有一些雜質(zhì)累積在柱內(nèi),而且這些雜質(zhì)不會隨著流動相出來,會逐漸影響柱子的品質(zhì)。 這些雜質(zhì)在后來的分析譜圖上出現(xiàn)。從而造成出現(xiàn)怪峰、基線不平等現(xiàn)象。簡單的解決方法是用較強的流動相沖洗。而且每次分析某一產(chǎn)品完成后沖洗。如果分析時使用緩沖劑﹐可以用水來取代緩沖劑。先使用有機和水的混合溶液為流動相沖洗緩沖劑。接著再用100%有機溶劑沖洗。如果直接用100%有機溶劑沖洗的話,緩沖劑很可能會沉淀出來,而損壞色譜柱的品質(zhì)。使用10-20倍柱體積的量來沖洗基本就足夠了??梢詫?nbsp;100%有機溶劑沖洗的條件加在分析實驗程序完畢后,如此一來每天在開機前都會用100%機溶劑沖洗。一般硅膠柱可以反沖洗處理﹐即是在將沖洗前將色譜柱倒反接后再沖洗。打算使用反沖洗處理前,先參考色譜柱的保養(yǎng)說明書。所以要真正保護色譜柱,使柱子的壽命延長,是使用”保護柱”和定期沖洗色譜柱

   色譜柱可分為填充柱和開管柱兩大類。多為金屬或玻璃制作。有直管形、盤管形、U形管等形狀。液相色譜通常均采用填充柱。
  色譜柱的分離效果取決于所選擇的固定相,以及色譜柱的制備和操作條件。
  色譜是一種分離分析手段,分離是核心,因此擔負分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。對色譜柱的要求是柱效高、選擇性好,分析速度快等。市售的用于HPLC的各種微粒填料如多孔硅膠以及以硅膠為基質(zhì)的鍵合相、氧化鋁、有機聚合物微球(包括離子交換樹脂)、多孔碳等,其粒度一般為3,5,7,10μm等,柱效理論值可達5~16萬/米。對于一般的分析只需5000塔板數(shù)的柱效;對于同系物分析,只要500即可;對于較難分離物質(zhì)對則可采用高達2萬的柱子,因此一般10~30cm左右的柱長就能滿足復(fù)雜混合物分析的需要。
  柱效受柱內(nèi)外因素影響,為使色譜柱達到較佳效率,除柱外死體積要小外,還要有合理的柱結(jié)構(gòu)(盡可能減少填充床以外的死體積)及裝填技術(shù)。即使可以的裝填技術(shù),在柱中心部位和沿管壁部位的填充情況總是不一樣的,靠近管壁的部位比較疏松,易產(chǎn)生溝流,流速較快,影響沖洗劑的流形,使譜帶加寬,這就是管壁效應(yīng)。這種管壁區(qū)大約是從管壁向內(nèi)算起30倍粒徑的厚度。在一般的液相色譜系統(tǒng)中,柱外效應(yīng)對柱效的影響遠遠大于管壁效應(yīng)。
  在選擇液相色譜柱之前,先多了解自己的樣品和雜質(zhì),他們的類型結(jié)構(gòu)、極性、酸堿性、分子量大小等等。
  1、樣品是極性的且弱酸性的;就可以選擇C18在100%酸性水溶液條件下檢測,即要選擇承受100%純水且對極性化合物保留很好的色譜柱。
  2、如果樣品極性太強,或酸性太強;可以選擇CN,NH2,或硅膠柱,HILIC(親水色譜),也有使用C18+強陰離子對試劑或強陰離子交換色譜柱(缺點是離子對試劑平衡時間長,對流動相pH要求比較精密,否則很難重復(fù)實驗,另外離子對試劑很難洗下來,基本上用了離子對的色譜柱就不能再用于其它實驗)
  3、若樣品是堿性的;可選擇高純硅膠柱(高純硅膠缺少金屬雜質(zhì),且硅膠端基封尾)或一些經(jīng)過修飾的C18柱(如極性嵌入技術(shù)或堿去活技術(shù)等),他們都會減少堿性化合物的拖尾,一般會選擇中性或偏堿的條件下做,因為這樣可增加堿性樣品的保留。
  4、如果堿性化合物的極性太強,或堿性太強;可以選擇寬pH的C18色譜柱在高pH值檢測(優(yōu)點是方法開發(fā)簡單,缺點是目前實現(xiàn)這一技術(shù)的色譜柱品牌比較少,價格也高)或者選用HILIC色譜柱(硅膠柱在反相條件下使用,這也是很經(jīng)典的檢測堿性樣品的方法)選擇強離子交換柱(缺點是不能用來分析其它樣品,對流動相pH要求比較精密,否則很難重復(fù)實驗)也有使用C18+強陰離子對試劑或強陰離子交換色譜柱。



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