高效毛細(xì)管電泳色譜儀對進樣技術(shù)要求很高,進樣時應(yīng)注意以下事項:
一、毛細(xì)管插入樣品溶液后,應(yīng)立即開始進樣操作,完成后迅速移至緩沖液中開始電泳。否則會產(chǎn)生毛細(xì)作用和虹吸現(xiàn)象,引起誤差并使譜帶展寬。
二、電極不要和毛細(xì)管接觸,樣品貯器和緩沖液貯器液面的高度應(yīng)保持平衡。
三、進樣區(qū)帶越小越好,否則會使柱效和分離度降低。故進樣時間以短為宜。
四、溫度會影響進樣量的恒定,因溫度直接影響粘度。
五、樣品溶液中的溶劑必須與緩沖液互溶,前者的離子強度應(yīng)低于后者。
六、防止溶液和緩沖液的蒸發(fā)、損耗。
根據(jù)分析對象,色譜柱的類型,操作儀器的擋次和具體檢測器,若使用不合要求的低純度氣體,不良影響有以下幾種可能: 1)樣品失真或消失:如H2O氣使氯硅樣品水解; 2)色譜柱失效:H2O,CO2使分子篩柱失去活性,H2O氣使聚脂類固定液分解,O2使PEG斷鏈。 3)有時某些氣體雜質(zhì)和固定液相互作用而產(chǎn)生假峰; 4)對柱保留特性的影響:如:H2O對聚乙二醇等親水性固定液的保留指數(shù)會有所增加,載氣中氧含量過高時,無論是極性或是非極性固定液柱的保留特性,都會產(chǎn)生變化,使用時間越長影響越大?! ?)檢測器: TCD:信噪比減小,無法調(diào)零,線性變窄,文獻中的校正因子不能使用,氧含量過大,使元件在高溫時加速老化,減少壽命?! ID:特別是在Dt≤1Ⅹ10ˉ⒒/秒下操做時,CH4等有機雜質(zhì),會使基流激增,噪聲加大不能進行微量分析。 ECD:載氣中的氧和水對檢測器的正常工作影響最大,在不同的供電工作方式中,脈沖供電比直流電壓供電影響大,固定基流脈沖調(diào)制式供電比脈沖供電影響大。這就是為什么目前諸多在操作固定基流脈沖調(diào)制式ECD時,在載氣純度低時必須把載氣純度選擇開關(guān)從“標(biāo)準(zhǔn)氮”撥到“一般氮”位置的原因。大家會發(fā)現(xiàn)在此情況下操作,不但靈敏度變低,而且線性亦變窄了。實踐證明:在操作ECD時,載氣中的水含量低于0.02ppm,氧低于1ppm時可達到較理想的性能。值得指出的是,我們多次發(fā)現(xiàn)由于儀器的調(diào)節(jié)氣路系統(tǒng)被污染而造成的對載氣的二次污染至使ECD基頻大幅度增加使信燥比減小?! PD和NPD等常用檢測器,由于他們屬于選擇性檢測器,操做時要根據(jù)分析要求,特別注意被測敏感物質(zhì)中雜質(zhì)的去除?! ?)在做程序升溫操作時,載氣中的某些雜質(zhì),在低溫時保留在色譜柱中,當(dāng)拄溫升高時不但引起基線漂移還可能在譜圖上出現(xiàn)比較寬的"假峰"。 7)儀器影響 a.各類過濾器加速失效; b.調(diào)節(jié)閥(穩(wěn)壓閥,穩(wěn)流閥,針形閥)被污染,氣阻堵塞,調(diào)節(jié)精度降低或失靈; c.氣路系統(tǒng)被污染,若要恢復(fù)儀器在高靈敏度情況下操做,有時要吹洗很長時間(可能一周以上)污染嚴(yán)重時有時再也無法恢復(fù)?! .檢測器的壽命,實踐表明,對ECD和TCD的壽命影響最明顯,應(yīng)引起用戶特別注意 一、衍生化分類: 1、柱前衍生:在分析物經(jīng)過色譜柱前與衍生劑反應(yīng),反應(yīng)產(chǎn)物在色譜柱上實現(xiàn)分離,實際分離的是衍生產(chǎn)物,檢測的也是衍生產(chǎn)物。 2、柱后衍生:分析物在色譜柱中實現(xiàn)分離后,在衍生池內(nèi)與衍生劑反應(yīng),檢測的是衍生產(chǎn)物。 二、適用的化合物: 生物酸、生物堿、胺類、抗生素和氨基酸類等。 三、衍生化要求: 1、衍生劑必須過量且穩(wěn)定。衍生劑不過量,反應(yīng)不完全,檢測不充分。衍生劑不穩(wěn)定,重現(xiàn)性差。 2、衍生劑、衍生產(chǎn)物和衍生副產(chǎn)物容易分離。只能檢測到衍生產(chǎn)物可以。 3、衍生反應(yīng)快速、完全。 四、柱前衍生特點: 1、優(yōu)點: (1)相對自由地選擇反應(yīng)條件。 ?。?)不存在反應(yīng)動力學(xué)的限制。 ?。?)衍生副產(chǎn)物可進行預(yù)處理。 ?。?)容易允許多步反應(yīng)的進行。 ?。?)有較多的衍生劑可選擇。 ?。?)不需要復(fù)雜的儀器設(shè)備。 2、缺點: ?。?)形成的衍生副產(chǎn)物可能對色譜分離造成較大困難。 ?。?)在衍生化過程中,容易引入雜質(zhì),或損失樣品。 五、柱后衍生特點: 1、優(yōu)點: ?。?)重現(xiàn)性好,影響因素少,引入物質(zhì)比較少。 ?。?)分析物可以在其原有的形式下進行分離,容易選用已有的分析方法。 2、缺點: ?。?)對于一定的溶劑和有限的反應(yīng)時間來說,目前只有有限的反應(yīng)可供選擇。 ?。?)可能有擴散問題。 (3)需要額外的儀器設(shè)備。氣體純度低對色譜儀的不良影響
色譜儀的柱前衍生和柱后衍生