中低壓液相色譜柱系統(tǒng)由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進樣器進入流動相,被流動相載入中低壓液相色譜柱內(nèi),由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù),在兩相中作相對運動時,經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過程,各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別,被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出,通過檢測器時,樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來中低壓液相色譜柱主要有進樣系統(tǒng)、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。
中低壓液相色譜柱的保護:
1、流動相和樣液都需用0.45um孔徑的濾膜過濾。
2、加3~5cm保護柱。
3、進樣閥進樣。
4、用純甲醇保存色譜柱,防止細菌生長。
5、防止過酸或過堿。
6、防止振動和逆向流動。
7、對硅膠基鍵合相,水溶液流動相的ph值不得超出2~8.5的范圍,使用溫度不宜過高。
8、中低壓液相色譜柱在酸性或堿性條件下使用后,應(yīng)依次用水和甲醇清洗。對暫時不用而需要較長時間保存的色譜柱,要用純甲醇清洗。
9、中低壓液相色譜柱兩端用金屬螺帽封閉,保存在干凈的有機溶劑中。
中低壓液相色譜柱的再生:
一般情況下,硅膠和ods等化學(xué)鍵合固定相再生是困難的。有時采用下述方法可能提高柱效。
1、由于雜質(zhì)微粒等因素,使色譜柱上端固定相變色,柱效下降。這時,可仔細地將變色部分除去約3mm左右,再補充新的固定相。
2、當(dāng)色譜柱吸附未被洗脫的成分時,柱效將明顯下降,可選擇合適的溶劑洗凈。
3、當(dāng)采用梯度洗脫時,色譜柱在重復(fù)使用前,用泵把幾倍于柱體積的起始溶劑壓經(jīng)色譜柱,以重新建立起始的平衡來得到再生。
1、短期停機 在完成一天工作以后,都要停機等第二天再繼續(xù)工作,則可按以下步驟停機。 A)關(guān)閉二次儀表(記錄儀、積分儀或色譜工作站)。 B)關(guān)閉檢測器電源(同時切斷柱箱溫度檢測器的電源)。 C)停止恒流泵工作,然后切斷其電源。 D)用二次蒸餾水沖洗進樣閥的進樣孔(在“LOAD”和“INJECT”兩個位置)。 E)切斷實驗室工作電源,加滿盛液瓶中的流動相,待第二天使用。 F)將儀器罩上防塵罩。 液相色譜儀數(shù)周或數(shù)月暫不使用,這時除按《短期停機》的A)~D)步驟處理外,還須完成以下步驟: A)拆下恒流泵的流動相盛液瓶,換上色譜柱指定的保護試劑(例:甲醇、去離子水等),開啟泵數(shù)分鐘(流速0.5mL/min~1.5mL/min)后停泵。 B)從系統(tǒng)中拆下色譜柱,用專用的密封螺帽將柱管兩端密封后保存。 C)用普通φ1.6導(dǎo)管替代分離柱聯(lián)結(jié)。 D)用二次蒸餾水或去離子水輸入輸液泵,開啟泵,流量1mL/min~2mL/min,沖洗泵體、進樣閥、檢測器流通池數(shù)分鐘,在沖洗過程切換六通閥數(shù)次,使定量管得到清洗。 E)拆除替代柱的導(dǎo)管、泵輸入端和出口的導(dǎo)管和流通池輸入、輸出口導(dǎo)管,分別用螺帽密封輸液泵出口和流通池輸入、輸出口。 F)撥下總電源接線板的插頭,貯存好專用的流動相和樣品,用干布擦洗儀器,罩上防塵罩。 G)檢測器存放地點應(yīng)干燥。
2、長期停機
日常中經(jīng)常會遇到液相色譜儀使用過程中冒出氣泡,一般是由于溫度上升,壓力下降造成的。
溫度上升或柱溫上升,當(dāng)接近試劑沸點時,試劑汽化產(chǎn)生氣泡,試劑中已含微小氣泡,因加熱變大而產(chǎn)生氣泡。壓力下降產(chǎn)生氣泡,流動相中一直包含微小氣泡,無論超聲過濾,均不能池底去掉它,那么當(dāng)壓力下降時,微小氣泡將長大,且多個小氣泡易聚集成大氣泡,而影響正常實驗。
氣泡產(chǎn)生原因分析處理:
1、泵頭:泵頭是壓力變化最劇烈的地方,也是最易產(chǎn)生氣泡的地方,泵頭靠負壓而吸液,而負壓必然使流動相中的小氣泡長大,當(dāng)泵腔變正壓時,已長大的氣泡未必能全部變小流入后續(xù)液路,則泵腔內(nèi)將積存氣泡,從而影響吸液精度,鑒于此,泵頭上專門設(shè)計了排氣閥,便于泵頭排氣,觀察柱壓穩(wěn)定了說明泵頭排氣成功。
2、吸液白管長氣泡。
a、吸液白管接觸空氣部位漏氣,產(chǎn)生可見氣泡,吸液白管是常壓和負壓交臂變化部位,其漏表現(xiàn)為大氣進入白管內(nèi),而不易見到管內(nèi)液體漏出。
處理方法:更換白管。
b、濾頭堵:濾頭堵使得液體流入濾頭的速度下降,泵強制吸液而產(chǎn)生真空氣泡。
判斷:拔掉濾頭不再長氣泡則是濾頭堵。
處理:A、30%硝酸水液超洗濾頭,20分鐘左右。
B、水超洗濾頭,注意換水多超幾次。
c、流動相汽化產(chǎn)生氣泡。
尤其是夏天室溫高,沸點低的試劑易汽化,比如:乙酸,乙mi,氨水,石油醚等易于汽化。
處理:超聲,降室溫。