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高效液相色譜柱故障排除 液相色譜解決方案

時間:2020-06-03    來源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     

    高效液相色譜柱的系統(tǒng)由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進樣器進入流動相,被流動相載入色譜柱(固定相)內(nèi),由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù),在兩相中作相對運動時,經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過程,各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別,被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出,通過檢測器時,樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。

    高效液相色譜柱故障排除

    1、柱壓過高

    可能是微粒堵塞,柱床膨脹不可逆吸附,細(xì)菌生長等造成的。也有可能是系統(tǒng)反壓問題,例如阻尼器堵塞,進樣器堵塞,管路或連接口堵塞.在線過濾器不干凈,壓力傳感器不準(zhǔn)確等。

    2、重復(fù)性差、不出峰、回收率低可能是色譜柱被污染,流動相pH值或者組成不合適造成固定相損失,樣品溶劑不同或樣品本身不穩(wěn)定,固定相極性過強或者流動相極性過弱.或者發(fā)生非特異性吸附。也可能梯度實驗時平衡時間不足,溫度波動,流動相組成改變,樣品溶劑不同,樣品穩(wěn)定性不好,方法的開發(fā)不好,緩沖液的酸堿度不合適或者緩沖能力不足。

    3、柱效低

    可能是色譜柱被污染、過濾片部分堵塞、色譜柱內(nèi)的死體積造成,例如流動相pH值或者組成不合適造成固定相損失。流動相急劇變化造成固定相物理損壞,機械振動造成固定相產(chǎn)生裂縫,柱床收縮或干枯。也有可能是儀器連接的問題,認(rèn)真檢查進樣器、檢測器、管路、保護柱和在線過濾器等是否連接好,也可能是色譜柱沒有平衡好,進樣量過大等問題。

  【儀器網(wǎng) 使用手冊】制備型液相色譜儀目的是對產(chǎn)品的單體進行提取和純化,與蒸餾、萃取等純化方法相比制備型液相色譜法更有效,但對操作的要求也更高。為保證制備型液相色譜儀可以達(dá)到理想的實驗效果,需要謹(jǐn)慎選擇操作條件,減少影響分離效果的因素。
 
  色譜柱的選擇
 
  色譜柱的容量有一定限制,每種色譜柱都有自己的負(fù)載能力,因此樣品的導(dǎo)入值上限需要根據(jù)所用的色譜柱確定。色譜柱與大樣品量的關(guān)系如下:
 
  1.色譜柱內(nèi)半徑越大,柱子的負(fù)載能力越高。
 
  2.分配系數(shù)K增加,柱子的負(fù)載能力也會增加。同時,溶質(zhì)的保留體積同樣也會增加。
 
  3.色譜柱的填充方法影響著填充密度,用良好方法填充的柱子密度趨近它的大值,柱子的樣品量和分辨率同樣也會趨近大值。
 
  4.采用表面積大的吸附劑雖然會減弱色譜系統(tǒng)的速度和適用范圍,但可以增加柱子的負(fù)載能力。
 
  5.柱子的負(fù)載能力還隨著柱子的長度增加而增長,但柱子過長會損失柱效。
 
  6.填料顆粒的大小與柱子負(fù)載量也呈正相關(guān)關(guān)系。
 
  樣品的溶解
 
  樣品在溶劑里的溶解度會影響注入的大樣品量。在流動相里難溶解的物質(zhì)通常不能充分分離或分辨率比較低,因此需要先將樣品溶解在另一種溶劑中,再將這種溶液送人色譜分離系統(tǒng)。中間溶劑的選擇很重要,并且需要經(jīng)驗。
 
  流動相的純度
 
  流動相的純度與樣品中的純度息息相關(guān)。在分離組分特性相近或痕量組分時,流動相里的雜質(zhì)還可能污染色譜柱,影響分離效能。因此流動相須保證純凈。
 
  流動相的流速
 
  流動相的流速與分離速度、分離效率相關(guān),流速越快分離速度越快,但分離效率越低,因此需要選擇合適的速度保證速度與效率并重。
 
  固定相的選擇
 
  為了分辨效果,應(yīng)盡量選擇吸附色譜。從填料的容量看,全多孔型比表面多空型好;從固定相微粒的大小看,30~50μ較常用。
  【儀器網(wǎng) 維修保養(yǎng)】液相色譜柱在使用過程中常見的問題有柱壓升高、峰拖尾變寬、分離效果下降等。一般情況下這些都是色譜柱使用時間過長引起的正?,F(xiàn)象,只需對色譜柱進行清洗與再生便可解決。但是如果柱壓突然升高,則需要檢查色譜柱是否出現(xiàn)問題??赡艿脑蛴幸韵聨c:
 
  1.柱頭的過濾篩板被污染
 
  解決方法:卸下柱頭螺絲,將過濾篩板取下,放置在30%左右的稀硝酸中,然后用超聲波清洗10分鐘。再將過濾篩板放入超純水,超聲清洗約10分鐘,之后將過濾篩板重新裝回色譜柱。
 
  2.填料被污染
 
  解決方法:
 
 ?、傩断轮^螺絲,將前端被污染的填料用專用小匙挖出,然后重新填入相同的填料。
 
 ?、谶x擇合適的流動相,按色譜柱使用的方向沖洗,沖洗量須大于色譜柱體積的20倍,將污染物溶解并沖出色譜柱,然后,按照色譜柱標(biāo)明的箭頭方向使用。
 
  3.緩沖鹽溶液遇到純有機相析出鹽結(jié)晶,堵塞色譜柱
 
  解決方法:先用沖洗色譜柱,將鹽晶體溶解并沖出色譜柱,然后換高濃度甲醇水溶液或其他有機溶劑作為流動相。
 
  4.流動相的PH值偏差過大,造成固定相溶解或結(jié)構(gòu)被破壞
 
  解決方法:此時很難將色譜柱修復(fù)通常需要直接更換色譜柱。
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