色譜柱是高效液相的心臟,在液相色譜儀的使用中,保持色譜柱的柱效、容量和滲透性,延長(zhǎng)柱子的使用壽命是非常重要。色譜柱壓力過高、過低都屬于柱壓?jiǎn)栴}。色譜柱壓升高一般是由于柱床內(nèi)產(chǎn)生了雜質(zhì),造成流體阻力加大所致。以下是專業(yè)技術(shù)人員總結(jié)的幾個(gè)方面: 1、流動(dòng)相的前處理:流動(dòng)相或楊平中雜質(zhì)堵塞色譜柱進(jìn)口濾片,導(dǎo)致壓力升高。這是由于流動(dòng)相可能沒有過濾,或過濾不徹底,使固體雜質(zhì)滯留于濾板上所致。另一個(gè)方面也可能沒有使用預(yù)保護(hù)柱所致。 2、樣品的沉淀:當(dāng)流動(dòng)相與溶解樣品的溶劑不一致時(shí),樣品進(jìn)入色譜柱時(shí),可能因溶解度降低而沉淀出來吸附于柱內(nèi),造成壓力升高。 3、晶體的析出:使用含有緩沖液的流動(dòng)相時(shí),緩沖液中的無機(jī)鹽可能會(huì)殘留在體系之中,它們會(huì)因在新流動(dòng)相中的溶解度降低而析出阻塞而壓力升高。 4、細(xì)菌或霉菌孳生:流動(dòng)相中、管路中或柱子進(jìn)口處繁殖、生長(zhǎng)霉菌堵塞濾板,導(dǎo)致壓力升高。所以在使用磷酸鹽緩沖液時(shí)一般要現(xiàn)配現(xiàn)用。 5、溶質(zhì)吸附:一些溶質(zhì)在色譜柱上有較強(qiáng)大的吸附力,洗脫時(shí)流動(dòng)相也難以清除掉,累積的未洗脫溶質(zhì)也會(huì)造成阻力增大從而造成壓力升高。 6、流動(dòng)相更換過度較快:當(dāng)改變流動(dòng)相體系時(shí),不徹底的更換使不同性質(zhì)、互不混溶的流動(dòng)相存在于同一個(gè)體系之中,也會(huì)造成壓力升高。 7、壓力脈沖:運(yùn)行過程中,有時(shí)會(huì)產(chǎn)生整個(gè)液相色譜儀系統(tǒng)內(nèi)壓力的突然升降。如泵壓力變化,此所形成的壓力脈沖會(huì)造成多孔填料的崩壞和柱床結(jié)構(gòu)的微小變化,填料微屑的長(zhǎng)期積累也可能會(huì)使柱床阻力增大,造成壓力升高。 以上幾種色譜儀柱壓升高的原因,希望能給您一定的幫助。
一、衍生化分類: 1、柱前衍生:在分析物經(jīng)過色譜柱前與衍生劑反應(yīng),反應(yīng)產(chǎn)物在色譜柱上實(shí)現(xiàn)分離,實(shí)際分離的是衍生產(chǎn)物,檢測(cè)的也是衍生產(chǎn)物。 2、柱后衍生:分析物在色譜柱中實(shí)現(xiàn)分離后,在衍生池內(nèi)與衍生劑反應(yīng),檢測(cè)的是衍生產(chǎn)物。 二、適用的化合物: 生物酸、生物堿、胺類、抗生素和氨基酸類等。 三、衍生化要求: 1、衍生劑必須過量且穩(wěn)定。衍生劑不過量,反應(yīng)不完全,檢測(cè)不充分。衍生劑不穩(wěn)定,重現(xiàn)性差。 2、衍生劑、衍生產(chǎn)物和衍生副產(chǎn)物容易分離。只能檢測(cè)到衍生產(chǎn)物可以。 3、衍生反應(yīng)快速、完全。 四、柱前衍生特點(diǎn): 1、優(yōu)點(diǎn): ?。?)相對(duì)自由地選擇反應(yīng)條件。 ?。?)不存在反應(yīng)動(dòng)力學(xué)的限制。 ?。?)衍生副產(chǎn)物可進(jìn)行預(yù)處理。 ?。?)容易允許多步反應(yīng)的進(jìn)行。 ?。?)有較多的衍生劑可選擇。 ?。?)不需要復(fù)雜的儀器設(shè)備。 2、缺點(diǎn): (1)形成的衍生副產(chǎn)物可能對(duì)色譜分離造成較大困難。 (2)在衍生化過程中,容易引入雜質(zhì),或損失樣品。 五、柱后衍生特點(diǎn): 1、優(yōu)點(diǎn): ?。?)重現(xiàn)性好,影響因素少,引入物質(zhì)比較少。 ?。?)分析物可以在其原有的形式下進(jìn)行分離,容易選用已有的分析方法。 2、缺點(diǎn): (1)對(duì)于一定的溶劑和有限的反應(yīng)時(shí)間來說,目前只有有限的反應(yīng)可供選擇。 ?。?)可能有擴(kuò)散問題。 (3)需要額外的儀器設(shè)備。色譜儀的柱前衍生和柱后衍生