高效液相色譜系統(tǒng)主要由貯液瓶、泵、進(jìn)樣器、柱子、柱溫箱、檢測(cè)器、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成。對(duì)于整個(gè)系統(tǒng)而言,柱子、泵和檢測(cè)器是核心部件同時(shí)也是易出問(wèn)題的主要部位。
高效液相色譜柱常見(jiàn)故障排除方法:
1、若操作過(guò)程發(fā)現(xiàn)壓力很小,則可能管件連接有漏,注意檢查。當(dāng)出現(xiàn)錯(cuò)誤警告(各組件指示燈均為紅色),一般為漏液,其中一個(gè)感應(yīng)器中已有溶劑,漏液故障排除后,擦干,點(diǎn)擊Online操作界面中的Instrument/SystemOff,然后再點(diǎn)擊操作界面中的Instrument/SystemOn即可。
2、連接柱子與管線(xiàn)時(shí),應(yīng)注意擰緊螺絲的力度,過(guò)度用力可導(dǎo)致連接螺絲斷裂。柱接頭處易發(fā)生漏液,可能情況為接頭Fittings中間的管子未和接口處貼緊。不同廠家的管線(xiàn)及色譜柱頭結(jié)構(gòu)有差異,可以不要混用,必要時(shí)可使用PEEK管及活動(dòng)接頭;
3、操作過(guò)程若發(fā)現(xiàn)壓力非常高,則可能管路已堵,應(yīng)先卸下色譜柱,然后用分段排除法檢查,確定何處堵塞后解決。若是保護(hù)柱或色譜柱堵塞,可用小流量流動(dòng)相或以小流量異丙醇沖洗,還可采用小流量反沖的辦法(新柱不提倡),若還是無(wú)法通暢,則需換柱;
4、運(yùn)行過(guò)程中自動(dòng)停泵,可能為壓力超過(guò)上限或流動(dòng)相用完;
5、樣品瓶中樣品較少,自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣針無(wú)法到達(dá)液面,可采用調(diào)低進(jìn)樣針進(jìn)樣高度的辦法,注意設(shè)置時(shí)不要使進(jìn)樣針碰到瓶底,微量樣品分析應(yīng)使用微量樣品瓶;
6、自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣針未與樣品瓶瓶口對(duì)準(zhǔn)時(shí),需重新定位。
7、泵壓不穩(wěn)或流量不準(zhǔn),可能為柱塞桿密封圈問(wèn)題或sealwash墊圈問(wèn)題,需更換;
8、基線(xiàn)產(chǎn)生不規(guī)則噪聲,可能原因?yàn)橄到y(tǒng)不穩(wěn)定或沒(méi)達(dá)到化學(xué)平衡(使其平衡,若用離子對(duì)試劑,在首次使用使需要足夠的時(shí)間和溶劑體積,色譜柱才能達(dá)到足夠的平衡),流動(dòng)相被污染(更換流動(dòng)相,清洗儲(chǔ)液器、過(guò)濾器,沖洗并重新平衡系統(tǒng)),色譜柱被污染(為證明可能的原因更換系統(tǒng)的色譜柱或使用一根同類(lèi)的被證明性能好的色譜柱),檢測(cè)器不穩(wěn)定;
9、短期有規(guī)則的噪聲,可能原因?yàn)楸脡翰环€(wěn)或泵脈沖,調(diào)節(jié)溶劑不適當(dāng)(如兩種溶劑的互溶性問(wèn)題),泵入口管路松或堵塞,泵太臟,泵柱塞磨損,檢測(cè)器不穩(wěn)定;
10、長(zhǎng)期有規(guī)則噪聲,可能原因?yàn)槭覝夭环€(wěn)(未使用柱溫箱)或使用柱溫箱不當(dāng);
11、基線(xiàn)漂移,可能原因?yàn)橄到y(tǒng)不穩(wěn)或沒(méi)有達(dá)到化學(xué)平衡,室溫不穩(wěn)(未使用柱溫箱),流動(dòng)相污染或分解,柱污染,檢測(cè)池泄漏,系統(tǒng)泄漏,固定相流失(另選流動(dòng)相,另選色譜柱),測(cè)定的波長(zhǎng)選擇錯(cuò)誤(對(duì)溶劑有吸收),樣品組分保留太長(zhǎng)(用強(qiáng)度合適的溶劑清洗色譜柱),檢測(cè)器不穩(wěn)定;
12、每次進(jìn)樣時(shí)的保留時(shí)間不重復(fù),可能原因?yàn)橄到y(tǒng)不穩(wěn)或未達(dá)到化學(xué)平衡,由于氣泡、各部件磨損等原因引起的泵壓或泵脈沖輸液不穩(wěn)定,進(jìn)樣體積太大或樣品濃度太高平衡被破壞,溶劑配比不合適,柱被污染;
13、無(wú)峰,可能原因?yàn)闄z測(cè)器選擇錯(cuò)誤,使用錯(cuò)誤的流動(dòng)相,樣品降解;
14、色譜峰比預(yù)計(jì)的小,可能原因?yàn)檫M(jìn)樣體積錯(cuò)誤,檢測(cè)器燈故障,進(jìn)樣問(wèn)題(瓶號(hào)錯(cuò)、進(jìn)樣體積不合適、進(jìn)樣錯(cuò)誤、針頭堵塞);
15、峰變寬,可能原因?yàn)檫M(jìn)樣體積太大或樣品濃度太高,過(guò)濾器、保護(hù)柱入口、柱入口或連接管路有部分堵塞,檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)設(shè)置錯(cuò)誤,進(jìn)樣器問(wèn)題(如閥漏、針頭堵塞或損壞),柱或保護(hù)柱被污染,對(duì)流動(dòng)相來(lái)說(shuō)樣品溶劑太強(qiáng),使用錯(cuò)誤的色譜柱,溫度變化;
16、出現(xiàn)雙峰/肩峰,可能原因?yàn)楸Wo(hù)柱或柱入口部分阻塞,柱或保護(hù)柱被污染,柱性能下降,保護(hù)柱失效,進(jìn)樣體積太大或樣品濃度太高(樣品過(guò)載),平衡破壞;
17、前沿峰,可能原因?yàn)檫M(jìn)樣體積太大或樣品濃度太高(樣品過(guò)載),平衡破壞,對(duì)于流動(dòng)相來(lái)說(shuō)樣品溶劑非極性太強(qiáng)(對(duì)于反相柱),柱或保護(hù)柱被污染,柱性能下降,保護(hù)柱失效;
18、脫尾峰,可能原因?yàn)橹虮Wo(hù)柱被污染,柱性能下降,保護(hù)柱失效,進(jìn)樣器問(wèn)題(如閥漏等),檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)設(shè)置錯(cuò)誤;
19、出現(xiàn)鬼峰,可能原因?yàn)榱鲃?dòng)相被污染,樣品預(yù)處理時(shí)產(chǎn)生降解或混入雜質(zhì),先前進(jìn)樣的流出物,樣品定量管清洗不當(dāng),注射器臟,柱被污染,進(jìn)樣裝置被污染,流動(dòng)相中含有穩(wěn)定劑/穩(wěn)定劑變化。水膜和油膜的外殼有標(biāo)示的。油膜外有寫(xiě)F型。
液相色譜法是分析化學(xué)中發(fā)展較快、應(yīng)用廣泛的一種分析方法,特別是高效液相色譜儀已經(jīng)成為生命科學(xué)、材料科學(xué)、環(huán)境科學(xué)等方面必不可少的重要檢測(cè)方法?,F(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的發(fā)展使得分析對(duì)象越來(lái)越復(fù)雜,分析要求越來(lái)越高,液相色譜的強(qiáng)大功能使其成為新世紀(jì)中解決生命科學(xué)、材料科學(xué)、環(huán)境科學(xué)等復(fù)雜體系發(fā)現(xiàn)難題的比較有力的技術(shù)和方法。 高效液相色譜儀是在經(jīng)典液相色譜的基礎(chǔ)上,引入氣相色譜的理論和技術(shù)而發(fā)展起來(lái)的。在高效液相色譜中,流動(dòng)相與組分之間有一定的親和力,分離過(guò)程的實(shí)現(xiàn)是組分、流動(dòng)相和固定相三者間相互作用的結(jié)果,分離不但取決于組分和固定相的性質(zhì),還與流動(dòng)相的性質(zhì)密切相關(guān),一般情況下,高效液相色譜儀的分析可在室溫下進(jìn)行,由于采用顆粒極細(xì)的固定相,柱內(nèi)壓降很大,加上流動(dòng)相黏度高,因此必須采用高入口壓,以此來(lái)維持一定的流動(dòng)相線(xiàn)速。高效液相色譜儀對(duì)于揮發(fā)性低、熱穩(wěn)定性差、分子量大的物質(zhì)特別有利,它在醫(yī)藥、生化等方面具有非常重要的作用。 色譜柱的常見(jiàn)問(wèn)題: 1.色譜柱污染: 目前,基層實(shí)驗(yàn)室多采用反相色譜柱,要減少色譜柱的污染比較有效的辦法是要純化樣品。凡是樣品純化得越干凈,色譜柱的壽命就越長(zhǎng);反之,只有提取沒(méi)有純化的樣品,色譜柱柱效就會(huì)大幅下降。一般來(lái)說(shuō),要提取純化好的樣品,可以的方法是用流動(dòng)相溶解樣品,這樣,一方面能減少色譜圖中的溶劑峰干擾,另一方面也能檢查樣品在流動(dòng)相中的溶解性。如果樣品進(jìn)樣后在流動(dòng)相中沉淀,會(huì)堵塞進(jìn)樣器和柱頭,甚至樣品分解,出現(xiàn)鬼峰。如果出現(xiàn)樣品與流動(dòng)相不溶要設(shè)法改變?nèi)芙鈼l件,可更換樣品溶劑,或改進(jìn)樣品純化處理的方法,或?yàn)V過(guò)去除不溶性物質(zhì)。 2.色譜柱阻塞與對(duì)策 如果配有保護(hù)柱,應(yīng)先去掉保護(hù)柱進(jìn)行分析。如果色譜柱阻塞,可進(jìn)行反沖洗。如果問(wèn)題仍然存在,色譜柱可能被強(qiáng)保留的污染物損壞,建議使用恰當(dāng)?shù)脑偕绦?。如果?wèn)題仍然存在,可能是進(jìn)口阻塞,更換入口處的篩板或更換色譜柱。如果必要,亦可更換色譜柱。 3.嚴(yán)格清場(chǎng) 清洗的過(guò)程是延長(zhǎng)色譜柱壽命的關(guān)鍵,每次分析工作結(jié)束時(shí),要做好清場(chǎng)工作。如果流動(dòng)相是緩沖鹽,先用5%甲醇水沖洗30 min以上;如果流動(dòng)相是離子對(duì),先用50%甲醇水沖洗30 min以上;如果流動(dòng)相是酸性溶劑,先用純水沖洗30 min以上,流速0.5 mL#min-1,最后過(guò)度到用色譜甲醇沖洗色譜柱,目的是沖去吸附在柱上的強(qiáng)保留組分。如果用甲醇-水為流動(dòng)相也應(yīng)這樣沖洗色譜柱,在一定程度上可恢復(fù)柱效。液相色譜儀相關(guān)知識(shí)