酶標(biāo)儀實際上就是一臺變相光電比色計或分光光度計，其基本工作原理與主要結(jié)構(gòu)和光電比色計基本相同。
圖示是一種單通道自動進(jìn)樣的酶標(biāo)儀工作原理圖。
光源燈發(fā)出的光波經(jīng)過濾光片或單色器變成一束單色光，進(jìn)入塑料微孔極中的待測標(biāo)本。
該單色光一部分被標(biāo)本吸收，另一部分則透過標(biāo)本照射到光電檢測器上，光電檢測器將這一待測標(biāo)本不同而強(qiáng)弱不同的光信號轉(zhuǎn)換成相應(yīng)的電信號.電信號經(jīng)前置放大，對數(shù)放大，模數(shù)轉(zhuǎn)換等信號處理后送入微處理器進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和計算，最后由顯示器和打印機(jī)顯示結(jié)果.。
微處理機(jī)還通過控制電路控制機(jī)械驅(qū)動機(jī)構(gòu)X方向和Y方向的運動來移動微孔板，從而實現(xiàn)自動進(jìn)樣檢測過程。而另一些酶標(biāo)儀則是采用手工移動微孔板進(jìn)行檢測，因此省去了X,Y方向的機(jī)械驅(qū)動機(jī)構(gòu)和控制電路，從而使儀器更小巧，結(jié)構(gòu)也更簡單。
第一步，酶標(biāo)儀后部的電源開關(guān)打開，儀器將顯示自檢，基礎(chǔ)酶聯(lián)，軟件版本號
第二步，等待數(shù)秒后，熒屏顯示“基礎(chǔ)酶聯(lián)，準(zhǔn)備和時間”,工作人員心須詳細(xì)閱讀儀器操作使用說明書,將被測樣品板放入酶標(biāo)盤中，同時打開與酶標(biāo)儀相連的打印機(jī)開關(guān)
第三步，“測量模式”鍵：進(jìn)入選擇波長程序,屏幕顯示":基礎(chǔ)酶聯(lián)",""1單長波檢測"",通過上下鍵選擇單長波和雙長波檢測
第四步，按開始開始鍵,啟動閱讀功能,酶標(biāo)儀開始對樣品板進(jìn)行檢測
第五步，讀數(shù)完畢,打印機(jī)開始打印結(jié)果
酶標(biāo)儀（MicroplateReader）是對酶聯(lián)免疫檢測（EIA）實驗結(jié)果進(jìn)行讀取和分析的專業(yè)儀器。酶聯(lián)免疫反應(yīng)通過偶聯(lián)在抗原或抗體上的酶催化顯色底物進(jìn)行的，反應(yīng)結(jié)果以顏色顯示，通過顯色的深淺即吸光度值的大小就可以判斷標(biāo)本中待測抗體或抗原的濃度。
酶標(biāo)儀廣泛地應(yīng)用在臨床檢驗、生物學(xué)研究、農(nóng)業(yè)科學(xué)、食品和環(huán)境科學(xué)中，特別在近幾年中，由于大量的酶聯(lián)免疫檢測試劑盒的應(yīng)用，使得酶標(biāo)儀在生殖保健領(lǐng)域中應(yīng)用越來越廣泛，同時促進(jìn)了生殖健康技術(shù)水平提高。
目前國內(nèi)許多計生站系統(tǒng)開展了酶免檢測項目，如：乙肝五項、艾滋病檢測、優(yōu)生優(yōu)育系列檢測、激素檢測等。過去多數(shù)采用目測方法，報出的結(jié)果缺乏科學(xué)的依據(jù)。例如：某弓形蟲檢測試劑盒中，臨界值規(guī)定為：陰性對照品的OD值×2.5，通過目測無法判斷標(biāo)本孔的反應(yīng)顏色是否超過臨界值。肉眼進(jìn)行兩孔之間的顏色比較可能還行，但比較一孔的顏色是否超過另一孔顏色的2.5倍就不可能。
國內(nèi)多家權(quán)威機(jī)構(gòu)，如衛(wèi)生部臨床檢驗中心和計劃生育系統(tǒng)等多次強(qiáng)調(diào)酶標(biāo)儀的重要性，并要求酶聯(lián)免疫檢測試劑應(yīng)使用酶標(biāo)儀判讀，酶免試劑的質(zhì)控也應(yīng)使用酶標(biāo)儀，并提供酶標(biāo)儀測定的原始數(shù)據(jù)，而各廠家的試劑盒說明書沒有是讓用目測的。同時酶免檢測的項目往往是一些實質(zhì)性的感染和病變（如：肝炎、艾滋病、優(yōu)生優(yōu)育等），判讀更要求嚴(yán)謹(jǐn)，由誤診引起的糾紛很難處理。另外，住院手術(shù)病人術(shù)前的丙肝、艾滋等EIA試劑檢測是避免因輸血引起感染引發(fā)的醫(yī)療事故糾紛的必要手段，正逐漸被許多單位所采用。
酶標(biāo)儀在臨床實驗方面應(yīng)用廣泛，用于鑒別乙肝兩對半，HIV，鑒定DNA等許多方面，可以說它是臨床及醫(yī)學(xué)實驗不可或缺的基礎(chǔ)設(shè)備。
故障一：測量的結(jié)果重現(xiàn)性不好，即使用空板測量誤差也在允許的范圍之外。
故障分析：檢查試劑發(fā)現(xiàn)沒有問題，檢查判定公式也沒有問題，檢查光路也沒有污染。幾經(jīng)周折終于發(fā)現(xiàn)卡微板的卡簧在伸縮后沒有卡到位，造成微板在測量時在機(jī)內(nèi)晃動影響測量結(jié)果不準(zhǔn)。
故障二：測量結(jié)果OD值偏低。
故障分析：排除完燈的能量值偏低后，檢查發(fā)現(xiàn)濾光片上有灰塵，用蒸餾水和擦鏡紙擦洗干凈晾干后故障排除。
測試方法：酶標(biāo)儀的儀器指標(biāo)在蕞佳狀態(tài)，就儀器的精度測試和儀器的線性度介紹幾種測試方法。
精度測試：該過程可被用于檢測不同微板之間的測量精度。
使用新制備的在0.1％ TWEEN20中的橘黃色甲基填充微孔，在每個微孔中使用不同稀釋度的溶劑以便獲得一個光密度范圍，首先確保每孔注入200mL液體，使用492nm慮光片測量至少3次，對每一微孔進(jìn)行下列計算：
(1)平均OD值；(2)蕞高和蕞低值；(3)平均值。蕞高和蕞低值之間的差值和百分比。讀數(shù)范圍在0．000到2．000Abs。同一孔平均值，蕞高值和蕞低值之間的差值應(yīng)該在+／一1．0％和+／一0．010OD范圍內(nèi)。
讀數(shù)范圍在2．000到3．000Abs同一孔平均值，蕞高和蕞低值之間的差值應(yīng)在+／一1．0％ 和+／一0．005OD值范圍內(nèi)。讀數(shù)范圍在3．000Abs以上時準(zhǔn)確度不符合要求。
酶標(biāo)儀儀器線性度：儀器的線性度可使用一種溶劑的稀釋系列得到。如可在492 nIn處測量在0．1％TWEEN20中的橘黃色甲基的稀釋系列。
具體方法如下：在參考光密度計上測量被稀釋的溶劑，畫出OD值對已知濃度的點圖，并畫出通過這些點的蕞好的直線。將從系列稀釋中測得的吸光度值與該圖比較從而計算出各稀釋度的濃度。微板中每種稀釋度加入250t,-L，對每種稀釋至少使用兩個樣本，以便降低因加樣引起的誤差。 測量微板使用精確測量模式，利用測量得到的平均OD值和每個樣本的已知濃度畫一條OD濃度的曲線，從系列稀釋中測得的吸光值與該曲線比較從而計算出各稀釋度的濃度。
對光度記和本儀器，比較計算的濃度，不準(zhǔn)確度不應(yīng)大于以下，使用標(biāo)準(zhǔn)濾光片492nm時吸光度在0．000～2．000Abs+／一1％、2．000～3．000Abs+／一1．5％。使用梯度濾光片492nm時，吸光度在0．000～2．500Abs+／一2％。
下一篇：恒溫水浴的操作使用及注意事項
449717568
