薄層色譜法又簡(jiǎn)寫為TLC,常用于中藥成方制劑中有效成分的定性鑒別。由于該方法鑒別專屬性強(qiáng),使用設(shè)備簡(jiǎn)單,易于操作,故應(yīng)用廣泛,在目前的藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)定性鑒別中(如中國(guó)藥典和國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)),已大大地超過了顯微鑒別、理化鑒別和光譜鑒別。
下面對(duì)薄層色譜法在中藥復(fù)方制劑中的應(yīng)用做一些分析:
一、醫(yī)院制劑由于其自身的特殊性,如只能在本院銷售,生產(chǎn)和檢驗(yàn)設(shè)備簡(jiǎn)陋,生產(chǎn)量小,劑型和品種相對(duì)較多,生產(chǎn)中常以水煎煮為主。故在選擇處方中的薄層定性藥材時(shí),應(yīng)以選擇水溶性成分為先。如芍藥苷、梔子苷、黃芪甲苷、龍膽苦苷、人參皂苷等苷類或綠原酸、阿魏酸等易溶于水的有機(jī)酸類成分。
二、仔細(xì)分析處方。選擇方中薄層定性的藥材,應(yīng)先選取以粉碎入藥的藥材。因?yàn)檫@部分藥材中的有效成分一般沒被破壞,特別是一些含有揮發(fā)性成分的藥材,如薄荷、香附、荊芥等,在薄層層析中以藥材作為對(duì)照品,很容易鑒別出來。
三、對(duì)處方中含有多糖類或淀粉質(zhì)較多的藥材,如麥冬、北沙參、黨參等,可采取先酸解后用有機(jī)溶劑提取的方法。經(jīng)這樣處理后,薄層層析斑點(diǎn)一般都比較清晰,藥檢所復(fù)核時(shí)往往容易通過。
四、在使用展開劑時(shí),在同等條件下,應(yīng)選擇無毒或毒性較小的有機(jī)溶劑。如選用環(huán)己烷而不選用正己烷,選用甲苯而不選用苯。以減少有機(jī)溶劑毒性對(duì)人體的侵害。
五、對(duì)樣品的取樣量不宜太大。如果取樣量太大,點(diǎn)樣時(shí)往往因樣品的濃度太高而造成點(diǎn)樣困難,展開時(shí)斑點(diǎn)又不易分離而使薄層圖譜不清晰。
六、對(duì)中藥復(fù)方制劑的液體劑型,提取分離方法應(yīng)溶劑法,用適宜的有機(jī)溶劑提取。如是提取水溶性成分,應(yīng)考慮對(duì)樣品進(jìn)行脫脂處理。對(duì)酒劑、酊劑或搽劑中含有的樣品,應(yīng)先在水浴上蒸去后再作下一步的處理。如液體劑型不宜用有機(jī)溶劑提取,也可采用先將藥液置水浴上蒸干(或加入適量硅藻土分散),再用有機(jī)溶劑提取的方法。
七、對(duì)中藥復(fù)方制劑的固體劑型,提取分離方法可選用超聲提取法、回流提取法或溶劑提取法(應(yīng)先將樣品加定量水溶解)等。超聲提取方法簡(jiǎn)單,所需時(shí)間短,目前使用較多,應(yīng),但在使用過程中應(yīng)注意一個(gè)問題,如提取時(shí)使用的有機(jī)溶劑是,超聲處理時(shí)間應(yīng)控制在10~20min以內(nèi),超聲時(shí)容器不能密閉太緊,以免瓶塞沖出或全部揮發(fā),特別是在氣溫較高的夏天,尤其要注意。
八、對(duì)中藥復(fù)方制劑的外用劑型,如軟膏劑、黑膏藥、貼膏一類,在樣品處理時(shí),應(yīng)首先考慮去掉賦形劑后再對(duì)樣品進(jìn)行處理。如用凡士林制成的軟膏,可用有機(jī)溶劑除去凡士林。
九、樣品經(jīng)薄層展開后,觀察層析情況,筆者認(rèn)為應(yīng)多選擇在日光下觀察為主。原因?yàn)榇蠖鄶?shù)醫(yī)院制劑室未建立暗室,在紫外光燈下拍照有困難。
十、對(duì)樣品中某些成分的提取分離,可先采取相類似的方法,然后再選用不同的定容溶液和展開劑,即可達(dá)到目的。如同時(shí)提取某些皂苷類、苷類、有機(jī)酸類等。
十一、在中藥復(fù)方制劑中,往往藥味較多,化學(xué)成分較為復(fù)雜,給單一成分的分離造成一定困難。為了達(dá)到分離的目的,在具體操作中,可以考慮使用高速離心,柱層析、氧化鎂凈化、水或氨試液洗滌等多種操作方法。但在使用這些方法時(shí),必須注意不能把應(yīng)提取的有效成分棄掉了。
十二、在用碘蒸氣或氨蒸氣對(duì)薄層板顯時(shí),所加的量不宜過多,使用的容器必須密閉,操作人不得離開,必須等到薄層斑點(diǎn)顯度適宜時(shí),才可取出。
摘要:采用薄屠色譜法對(duì)復(fù)方桔梗止咳片中的桔梗、遠(yuǎn)志及甘草等進(jìn)行了定性鑒別。該法可用
于對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量的控制。
關(guān)鍵詞:復(fù)方桔梗止咳片;TLC;鑒別
復(fù)方桔梗止咳片是由桔梗、遠(yuǎn)志(蜜炙)、款冬花(蜜炙)和甘草等四味中藥組成,具有鎮(zhèn)咳、祛痰之功效,用于治療傷風(fēng)咳嗽、咽喉腫痛、急慢性氣管炎等?,F(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中只有性狀一項(xiàng)。為了控制產(chǎn)品質(zhì)量.本文對(duì)桔梗、遠(yuǎn)志及甘草進(jìn)行了薄層色譜鑒別研究。
1 儀器與試藥
YH140電熱恒溫干燥箱(廣州東方紅醫(yī)療器械廠);硅膠G(青島海洋化工廠);桔梗、遠(yuǎn)志、甘草對(duì)照藥材、甘草次酸對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所);復(fù)方桔梗止咳片(我所抽驗(yàn)樣品);陰性樣品(按處方工藝制得缺味樣品);所用化學(xué)試劑均為分析純。
2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果
2.1 桔梗與甘草的鑒別
2.1.1 樣品溶液的制備 取本品10粒.去糖衣.研碎,取細(xì)粉1.5g,加鹽酸1ml與氯仿20m1.加熱回流1h.放冷,分取氯仿層,濾過.蒸干.殘?jiān)右掖糽ml溶解,即得。
2.1.2 對(duì)照藥材溶液的制備 分別取桔梗、甘草對(duì)照藥材各0.1g,按樣品溶液制備方法制成對(duì)照藥材溶液。
2.1.3 甘草次酸對(duì)照品溶液的制備 取甘草次酸對(duì)照品加乙醇制成2mg/ml的溶液。
2.1.4 陰性對(duì)照溶液的制備 分別取桔梗、甘草外的處方其它藥材,按處方工藝分別制備成缺桔梗、缺甘草的陰性樣品,再按樣品溶液制備方法制成陰性對(duì)照溶液:
2.1.5 薄層色譜鑒別結(jié)果吸取上述溶液各5μl,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以石油醚(30~60℃) 醋酸乙酯-冰醋酸(25:7:0.5)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以8%香草醛乙醇溶液與硫酸溶液(7~10)的混合液(0.5:5),在105℃ 加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。樣品溶液色譜中,在與對(duì)照藥材溶液、對(duì)照品溶液相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn),陰性對(duì)照溶液則無。
2 2 遠(yuǎn)志的鑒別
2 2.1 樣品溶液的制備取本品10片,去糖衣,研碎,取細(xì)粉1.5g,加乙醇20ml,加熱回流20min,濾過,濾液濃縮至約10ml,放冷,加入3倍量的乙醚,放置使沉淀完全,傾去上清液,加10%鹽酸溶液10ml,加熱回流30min,放冷,濾過,沉淀物用甲醇5ml溶解,即得。
2.2.2 對(duì)照藥材溶液的制備 取遠(yuǎn)志對(duì)照藥材0.5g,按樣品溶液制備方法制成對(duì)照藥材溶液。
2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備 取遠(yuǎn)志外的處方其它藥材,按處方工藝制備成陰性樣品,再按樣品溶液制備方法制成缺遠(yuǎn)志的陰性對(duì)照溶液。
2.2.4 薄層色譜鑒別結(jié)果吸取上述溶液各10μl,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以氯仿-丙酮-正己烷-醋酸(8:4:0.2:0.5)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以10%香草醛硫酸溶液,在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。樣品溶液色譜中,在與對(duì)照藥材溶液相應(yīng)的位置上顯相同的紫色斑點(diǎn),陰性對(duì)照溶液則無。
3 討論
為了加強(qiáng)薄層鑒別的專屬性,曾考慮采用藥材及其化學(xué)成分單體,但目前尚未找到桔梗、遠(yuǎn)志藥材成分的單體,所以以藥材作對(duì)照。本文建立的色譜條件,可在同一薄層板上鑒別桔梗和甘草,結(jié)果令人滿意。
參考文獻(xiàn)
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2衛(wèi)生部部頒標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑(第十四冊(cè)).1997:140~141
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4.簡(jiǎn)述薄層色譜工作原理