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固定相色譜柱斷裂預防的方法 色譜柱操作規(guī)程

時間:2020-06-20    來源:儀多多儀器網    作者:儀多多商城     
【導讀】氣相色譜固定相就是在管壁表面粘合很薄一層的小顆粒物質,通常叫做多孔層開口管(PLOT)柱。樣品是通過在氣—固固定相上產生吸附/脫附作用來分離的。它們常用



    氣相色譜固定相就是在管壁表面粘合很薄一層的小顆粒物質,通常叫做多孔層開口管(PLOT)柱。樣品是通過在氣—固固定相上產生吸附/脫附作用來分離的。它們常用來分離各種氣體及低沸點溶劑。較為常用的PLOT柱固定相有苯乙烯衍生物、氧化鋁和分子篩等

    如何避免色譜柱的破損、固定相的損傷、色譜柱的污染以及如何解決一些不能避免發(fā)生的問題,是色譜工作者極為關注的焦點。因為這對更加有效地延長毛細管柱的使用壽命,減少不必要的誤工時間。改進氣相色譜柱的重現(xiàn)性和分析結果的可靠性等方面都是極為重要的。

    氣相色譜固定相色譜柱斷裂預防的方法

    氣相色譜固定相預防氣相色譜柱斷裂的方法十分簡單,避免粗糙的柱表面,生硬的柱處理和將柱子彎曲成繃緊的狀態(tài)。內徑0.53mm的柱子不能耐受<2cm半徑范圍的彎曲,0.ZSmm內徑的柱子不能耐受

    另外,如果氣相色譜柱末端發(fā)生斷裂.可以將其破損面切除,重新使用。






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【導讀】色譜柱的使用壽命,除了與所分析的樣品和流動相及使用頻率有關系外,最主要的是與日常的委會密切相關。為延長色譜柱的使用壽命,維護您的利益,請仔細閱讀此部分。色譜柱的使用壽命主要是分局柱效和柱壓兩個指標來衡

色譜柱的使用壽命,除了與所分析的樣品和流動相及使用頻率有關系外,最主要的是與日常的委會密切相關。為延長色譜柱的使用壽命,維護您的利益,請仔細閱讀此部分。
色譜柱的使用壽命主要是分局柱效和柱壓兩個指標來衡量,如果一支色譜柱柱效太低或柱壓太高,通常被認為該色譜柱已經結束。因此,延長色譜柱使用壽命的關鍵是,消除引起柱效下降和柱壓升高的因素。以下是色譜柱的日常維護方法:
一、流動相的PH應在使用的范圍內
Welch公司的色譜柱除反相氰基柱PH1.5-9.0外,其反相色譜柱的PH范圍均為1.5-10,由于填料中存在Si-C和Si-O鍵,流動相超過其PH范圍將會導致硅膠基質流失和鍵合相碳鏈斷裂,使柱效下降,使用壽命變短。由于流動相的PH 控制不當而對色譜柱造成的損害,通常很難是色譜柱恢復,因此必須認真對待,嚴格控制流動相的PH值。
二、去除樣品和流動相中的固體顆粒
樣品和流動相中含有的固體顆粒物質會堵塞色譜柱篩板,篩板被堵住不僅會引起柱壓的升高,而且也會引起柱效下降,因為篩板的堵塞會引起液流不均,導致色譜峰型拖尾、變寬,從而使柱效下降。因此,建議使用超純水和色譜純試劑,在分析樣品前對樣品進行針筒過濾,流動相過0.45μm濾膜。
三、使用保護柱或在線過濾器
樣品和流動相經過濾后并不能完全消除固體顆粒物質,因為泵的磨損、密封圈和管路的老化也會產生固體顆粒物質,這些固體顆粒被流動相帶入色譜柱,堵塞篩板,導致柱壓升高、柱效下降。保護柱和在線過濾器上都有篩板,其孔徑與色譜柱孔徑相同,因此可以阻止固體顆粒物質到達色譜柱,有效防止色譜柱篩板的堵塞。由于柱壓升高在分析故障中占很大 比例,因此,除對樣品和流動相進行過濾外,建議您在色譜柱進樣端加上保護柱或在線過濾器。
如果去人色譜柱柱壓升高是由于進樣端篩板被堵引起的,科選擇一下方式進行補救:
1、先在色譜柱前加上保護柱或在線過濾器,然后用甲醇、水=20/80ml/min反向沖色譜柱180min。
2、先在色譜柱進樣端加上保護柱或在線過濾器,然后反向使用。
四、正確使用緩沖鹽
緩沖鹽通常易溶于水,難溶于有機溶劑,因此緩沖鹽使用不當會使其析出,堵塞填料基質上的微孔和顆粒間的空隙,使填料板結,柱壓上升;同時阻礙了基質上鍵合的碳鏈自由舒展,使色譜柱的保留能力下降,柱效降低。緩沖鹽析出后,去除非常困難,因此,正確的使用緩沖鹽對延長色譜柱使用壽命非常重要。
正確使用緩沖鹽的目的是防止緩沖鹽析出,因此正確使用緩沖鹽的方法可歸結為一句話:使用前要過濾,使用后要沖洗。具體方法如下:
1、等度條件:使用緩沖鹽前和使用后需用過渡流動相以1.0ml/min流速沖洗60min;使用后去除緩沖鹽的另一個方法是用過渡流動相以0.2ml/min流速沖洗色譜柱過夜。
2、梯度條件:用含有緩沖鹽的流動相跑梯度之前,用與初始流動相組成相同的過渡流動相以1.0ml/min流速沖洗60min,再用該過渡流動相以1.0ml/min沖洗色譜柱120min。含緩沖鹽流動相的梯度設定應盡量平緩,以避免梯度過程中緩沖鹽析出。
注意:過渡流動相是指有機相和水相的組成與分析流動相相同,區(qū)別只是過渡流動相不含緩沖鹽。
3、緩沖鹽析出的補救方法:
1)方案1:用甲醇/20/80以1.0ml/min流速35攝氏度條件下反向沖洗色譜柱120min
2)方案2:用甲醇/水=20/80以0.2ml/min流速反向沖洗色譜柱過夜。
五、防止強保留物質在色譜柱上存留
強保留物質和大分子化合物在色譜柱中累積,對樣品中的化合物產生額外的保留行為,不僅引起峰型變寬、拖尾,使柱效下降,同時也會引起保留時間的變化,累積到一定程度時還會導致柱壓升高。由于強保留物質和大分子化合物對色譜分離的影響是一個累積效應,需要一定的時間才會體現(xiàn)出來,但對許多藥品特別是復雜樣品而言,很難判斷其是否是含有強保留物質,因此要防止強保留物質的累積,需要在每天的日常維護中用純甲醇或乙氰清洗色譜柱。
清洗方法:
1、未使用緩沖鹽:每天分析完成后,先用上述方法除去緩沖鹽,然后再用甲醇或乙氰反向沖洗色譜柱60min。
2、使用過緩沖鹽:分析完成后,先用上述方法除去緩沖鹽,然后在用純甲醇或乙氰反向沖洗色譜柱60min
3、補救方法:
水——乙氰——氯仿(或異丙醇)——乙氰——水
每一步以1.0ml/min流速反向沖洗色譜柱60min。

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柱壓與硅膠基質的形態(tài)(如無定形或球形硅膠)、顆粒大小、填料合成條件、裝柱條件、所用流動相和分析時的溫度有關。
? 不同廠家的色譜柱柱壓會有所差別,相同流動相和溫度的條件下,不同廠家的新色譜柱有的柱壓可能相差4、5 個MPa,特別是低端和高端色譜柱之間,這一區(qū)別比較明顯。這是由色譜柱廠家所選用的硅膠基質及其生產條件決定的,這種差異的存在是正常的。同時需要說明的一點是,柱壓與柱效有一定的關系,通常柱效高的色譜柱柱壓相對而言會高一點,但柱壓高的色譜柱并不一定就具有高柱效。
? 在色譜柱的使用過程中柱壓通常會出現(xiàn)兩種升高的形式:第一種是,隨著使用時間的延長色譜柱柱壓慢慢上升,這是正常的;第二種是,使用過程中(流動相和溫度沒有改變的條件下)色譜柱壓力突然升高很多。這種壓力突然升高的現(xiàn)象,通常是由工作人員操作不當引起的,原因:
1)樣品太臟,使用前沒有過濾,導致柱篩板堵塞。
2)樣品含有的雜質在流動相中的溶解性不是很好,與流動相混合后析出,導致柱塞板堵塞。



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