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使用色譜柱溫箱的有益之處 色譜柱操作規(guī)程

時間:2020-06-20    來源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     
【導(dǎo)讀】在實際分析過程中,液相色譜儀流動相與色譜柱的溫度,影響著組分的分離平衡,對于使用色譜柱溫箱的有益之處有以下幾點:1.可以使保留時間相對恒定,對需要進行的



    在實際分析過程中,液相色譜儀流動相與色譜柱的溫度,影響著組分的分離平衡,對于使用色譜柱溫箱的有益之處有以下幾點:

    1.可以使保留時間相對恒定,對需要進行的定性鑒別可提高其可信度;

    2.保留時間的重復(fù)性是色譜分析進行定量的基礎(chǔ),這一點在色譜儀檢定規(guī)程中有嚴(yán)格的要求。不同的保留時間不僅不能判斷其成份的一致性,同時,由于保留時間不同峰面積也必將發(fā)生變化,其檢測結(jié)果的可信度將受質(zhì)疑。

    3.溫差較大時,因保留時間不穩(wěn)將增加檢測工作的復(fù)雜性。

    4.溫度低的時候,因流動相黏度增加而使檢測時間延長,同時增加泵的磨損,影響設(shè)備的使用壽命。

    5.如果溫度過低也可能出現(xiàn)堵塞高壓恒流泵、管路、進樣閥、色譜柱的現(xiàn)象。其原因就是溫度低溶解度相對下降而出現(xiàn)緩沖鹽結(jié)晶。

    6.溫度低時還因溶解度下降使雜質(zhì)吸附在填料上而難于洗脫,從而影響色譜柱的使用壽命。






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相關(guān)熱詞:

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【導(dǎo)讀】色譜柱由柱管、壓帽、卡套(密封環(huán))、篩板(濾片)、接頭、螺絲等組成。 構(gòu)造 色譜柱由柱管、壓帽、卡套(密封環(huán))、篩板(濾片)、接頭、螺絲等組成。 柱管



    色譜柱由柱管、壓帽、卡套(密封環(huán))、篩板(濾片)、接頭、螺絲等組成。


    構(gòu)造


    色譜柱由柱管、壓帽、卡套(密封環(huán))、篩板(濾片)、接頭、螺絲等組成。


    柱管多用不銹鋼制成,壓力不高于70 kg/cm2 時,也可采用厚壁玻璃或石英管,管內(nèi)壁要求有很高的光潔度。


    為提高柱效,減小管壁效應(yīng),不銹鋼柱內(nèi)壁多經(jīng)過拋光。


    也有人在不銹鋼柱內(nèi)壁涂敷氟塑料以提高內(nèi)壁的光潔度,其效果與拋光相同。還有使用熔融硅或玻璃襯里的,用于細管柱。


    色譜柱兩端的柱接頭內(nèi)裝有篩板,是燒結(jié)不銹鋼或鈦合金,孔徑0.2~20μm(5~10&μm),取決于填料粒度,目的是防止填料漏出。


    色譜柱按用途可分為分析型和制備型兩類,尺寸規(guī)格也不同:


    ①常規(guī)分析柱(常量柱),內(nèi)徑2~5mm(常用4.6mm,國內(nèi)有4mm和5mm),柱長10~30cm;


    ②窄徑柱(narrow bore,又稱細管徑柱、半微柱semi-microcolumn),內(nèi)徑1~2mm,柱長10~20cm;


    ③毛細管柱(又稱微柱microcolumn),內(nèi)徑0.2~0.5mm;


    ④半制備柱,內(nèi)徑>5mm;


    ⑤實驗室制備柱,內(nèi)徑20~40mm,柱長10~30cm;


    ⑥生產(chǎn)制備柱內(nèi)徑可達幾十厘米。柱內(nèi)徑一般是根據(jù)柱長、填料粒徑和折合流速來確定,目的是為了避免管壁效應(yīng)。


    性能評價


    色譜柱的性能除了與固定相性能有關(guān)外,還與填充技術(shù)有關(guān)。


    在正常條件下,填料粒度>20μm時,干法填充制備柱較為合適;顆粒<20μm時,濕法填充較為理想。


    填充方法一般有4種:


    ①高壓勻漿法,多用于分析柱和小規(guī)模制備柱的填充;


    ②徑向加壓法;③軸向加壓法,主要用于裝填大直徑柱;


    ④干法。柱填充的技術(shù)性很強,大多數(shù)實驗室使用已填充好的商品柱。


    必須指出,高效液相色譜柱的獲得,裝填技術(shù)是重要環(huán)節(jié),但根本問題還在于填料本身性能的優(yōu)劣,以及配套的色譜儀系統(tǒng)的的結(jié)構(gòu)是否合理。


    無論是自己裝填的還是購買的色譜柱,使用前都要對其性能進行考察,使用期間或放置一段時間后也要重新檢查。


    柱性能指標(biāo)包括在一定實驗條件下(樣品、流動相、流速、溫度)下的柱壓、理論塔板高度和塔板數(shù)、對稱因子、容量因子和選擇性因子的重復(fù)性,或分離度。


    一般說來容量因子和選擇性因子的重復(fù)性在±5%或±10%以內(nèi)。


    進行柱效比較時,還要注意柱外效應(yīng)是否有變化。


    一份合格的色譜柱評價報告應(yīng)給出柱的基本參數(shù),如柱長、內(nèi)徑、填料的種類、粒度、色譜柱的柱效、不對稱度和柱壓降等。





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  【中國儀器網(wǎng) 使用手冊】氣相色譜操作條件的選擇,常常決定是否能夠達到分離的目的,而選擇試驗條件的主要依據(jù)是范氏方程和分離度與各種色譜參數(shù)的關(guān)系式。氣相色譜柱分析條件的選擇主要包括柱溫、載氣種類和流速等的選擇。適當(dāng)?shù)姆治鰲l件,可以在較短的時間內(nèi)完成分析工作,并達到良好的定性定量目的。在日常工作中,如何進行色譜柱分析條件的選擇呢?
 
  柱溫的選擇
 
  柱溫是影響分析時間和分離度的重要因素。選擇柱溫的依據(jù)是樣品的沸點范圍,固定液的配比,允許使用溫度,以及檢測器的靈敏度。
 
  柱溫主要影響分配系數(shù)、容量因子以及組分在流動相和固定相中的擴散系數(shù),從而影響分離度和分析時間。選擇溫柱的原則,一般是在使難分離物質(zhì)對達到要求的分離度條件下,盡可能采用低溫柱,其優(yōu)點是可以增加固定相的選擇性,降低組分在流動相中的縱向擴散,提高柱效,減少固定液的流失、延長柱壽命和降低檢測器的本底。
 
  提高柱溫可以使保留時間減少,加快分析速度,使樣品中組分完全流出,但是分離效果不好。降低柱溫,樣品有較大的分配系數(shù),選擇性高,有利于分離。但溫度過低,容易引起峰形拖尾或前伸,并且分析時間長。可根據(jù)固定液的使用溫度極限和樣品組分沸點調(diào)節(jié)柱溫。
 
  對于高沸點混合物,在保證分離完全的前提下,盡量降低柱溫。可在低于分析物沸點180℃~200℃的柱溫下進行分析;對沸點不太高(200~300℃)的樣品,柱溫可選100℃以下;對于氣體、氣態(tài)烴等低沸點混合物,一般選擇室溫或50℃以下進行分析。對于寬沸程樣品,需采用程序升溫法進行分離,即柱溫按預(yù)先設(shè)定的程序隨時間成線性或非線性增加,從而獲得分離效果。
 
  載氣的選擇
 
  一般說來,痕量分析或毛細管色譜的載氣純化程度,要高于常規(guī)分析。特別是電子捕獲、熱導(dǎo)池檢測器,載氣純度直接影響靈敏度和穩(wěn)定性,一定要嚴(yán)格凈化。
 
  根據(jù)分析對象,對于色譜柱的類型,操作儀器的檔次和具體檢測器,若使用不合要求的低純度氣體,不良影響有以下幾種可能:
 
  a.樣品失真或消失:如H2O氣使氯硅樣品水解;
 
  b.色譜柱失效:H2O,CO2使分子篩柱失去活性,H2O氣使聚脂類固定液分解,O2使PEG固定液斷鏈;
 
  c.有時某些氣體雜質(zhì)和固定液相互作用而產(chǎn)生假峰;
 
  d.對柱保留特性的影響:如H2O 對聚乙二醇等親水性固定液的保留指數(shù)會有所增加,載氣中氧含量過高時,無論是極性或是非極性固定液柱的保留特性,都會產(chǎn)生變化,使用時間越長影響越大;
 
  e.檢測器:TCD:信噪比減小,無法調(diào)零,線性變窄,文獻中的校正因子不能使用,氧含量過大,使元件在高溫時加速老化,減少壽命;FID:特別是在Dt≤1×10-11/S下操作時,CH4等有機雜質(zhì)會使基流激增,噪聲加大不能進行微量分析;
 
  f.在做程序升溫操作時,載氣中的某些雜質(zhì),在低溫時保留在色譜柱中,當(dāng)柱溫升高時不但引起基線漂移,還可能在譜圖上出現(xiàn)比較寬的“假峰”;
 
  g.儀器影響:各類過濾器加速失效;調(diào)節(jié)閥(穩(wěn)壓閥,穩(wěn)流閥,針形閥) 被污染,氣阻堵塞,調(diào)節(jié)精度降低或失靈;氣路系統(tǒng)被污染,若要恢復(fù)儀器在高靈敏度情況下操作,有時要吹洗很長時間(可能一周以上), 污染嚴(yán)重時有時再也無法恢復(fù);對于FID,水蒸氣會影響分析結(jié)果,直至影響檢測器的壽命;對ECD和TCD的壽命明顯,這點應(yīng)引起用戶特別注意。
 
  載氣的壓力和流速
 
  載氣壓力對柱效率有直接的影響。如提高柱內(nèi)壓力,有助于提高柱效率。但只提高入口壓力,使流速加大且壓降太大時,反而會降低柱效率,因此也必須提高出口壓力。一般采用在柱后加裝適當(dāng)氣阻的方法來解決這一問題。
 
  載氣流速主要影響分離效率和分析時間。為獲得高柱效,應(yīng)選用佳流速,但所需分析時間較長。為縮短分析時間,一般選擇載氣速度要高于佳流速,此時柱效雖稍有下降,卻節(jié)省了很多分析的時間。常用的載氣速度流速為20~80mL/min。
 
  對于FID 或FPD 檢測器,氫氣和空氣的比例是影響分離度和靈敏度的重要因素,只有反復(fù)試驗,才能確定適合的比例。對于填充柱色譜柱,載氣流入方向要盡量與色譜柱內(nèi)固定相裝填方向一致,以減小壓差,提率。
 
  進樣量的選擇
 
  進樣量的多少直接影響譜帶的初始寬度。因此,只要檢測器的靈敏度足夠高,進樣量越少,越有利于得到良好的分離。一般情況下,柱越長,管徑越粗,組分的容量因子越大,則允許的進樣量越多。一般氣體進樣量在1~10mL,液體進樣量在0.5~10μL 之間,可取得較好的分析效果。此外,進樣速度要快,進樣時間要短,以減少縱向擴散,有利于提高柱效。
 
  氣化溫度的選擇
 
  氣化溫度取決于樣品的揮發(fā)性、沸點范圍及進樣量等因素。氣化溫度選擇不當(dāng),會使柱效下降。通常氣化室的溫度選擇為樣品沸點或高于沸點,以保證樣品能瞬間氣化;但不要超過沸點50℃以上,以防止樣品分解。
 
  對于一般的氣相色譜分析,氣化溫度比柱溫高10~50℃即可。但對于某些高沸點組分或熱穩(wěn)定性差的組分,在其沸點左右分析會產(chǎn)生分解現(xiàn)象。此時應(yīng)采取的措施是減少進樣量,采用高靈敏度檢測器,氣化室溫度的選擇應(yīng)低于其沸點100~200℃。
 
  從以上介紹的選擇原則可以看出,各種條件往往同時影響色譜柱的選擇性和效率,它們之間既密切聯(lián)系又互相制約。因此在實際分析中,要作綜合考慮,靈活地運用這些原則,既要保證良好的選擇性,又要保證分離效率,合理地選擇佳色譜分析條件。


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