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高效液相色譜紫外檢測器需要信噪比指標(biāo) 液相色譜操作規(guī)程

時間:2020-06-20    來源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     
【導(dǎo)讀】紫外檢測器是高效液相色譜中常用的檢測器,目前市場上生產(chǎn)廠家及型號很多,廠家通常采用檢測器的噪音,基線漂移等技術(shù)參數(shù)作為產(chǎn)品的靈敏度性能評價指標(biāo)。考慮到樣品的紫外吸收響應(yīng)值主要與樣品有關(guān),與儀器的

紫外檢測器是高效液相色譜中常用的檢測器,目前市場上生產(chǎn)廠家及型號很多,廠家通常采用檢測器的噪音,基線漂移等技術(shù)參數(shù)作為產(chǎn)品的靈敏度性能評價指標(biāo)??紤]到樣品的紫外吸收響應(yīng)值主要與樣品有關(guān),與儀器的關(guān)系不大,一般認(rèn)為這可以基本反映儀器在靈敏度方面的性能。

本文在實驗的基礎(chǔ)上證明對同一樣品各檢測器的響應(yīng)值實際上也存在不同程序的差異,說明僅使用噪音和基線漂移的指標(biāo)不能準(zhǔn)確顯示儀器在靈敏度方面的性能差異,因此,提出用信噪比來評價儀器的靈敏度性能。
2 靈敏度評價指標(biāo)設(shè)置的目的和依據(jù)
高效液相色譜及其紫外檢測器主要用于化學(xué)樣品的分析測試。其評價指標(biāo)必然與其用途相關(guān)聯(lián)。一個分析方法對檢測器的要求主要在靈敏度、選擇性、精確度和準(zhǔn)確性方面。在色譜分析中靈敏度是非常重要的指標(biāo)。對于靈敏度,在分析測試方法研究中主要使用信噪比、最低檢測限,或最低定量限來評價。其中信噪比是評價的核心,因為最低檢測限和最低定量限通常用信噪比在2~3和10的量來定義。
但目前廠家通常采用檢測器的噪音,基線漂移等技術(shù)參數(shù)作為產(chǎn)品的靈敏度性能評價指標(biāo)。這實際上是基于樣品的紫外吸收響應(yīng)值主要與樣品有關(guān),與儀器關(guān)系不大的假設(shè)。根據(jù)朗伯比爾定律,對于同樣長度的檢測池,同樣濃度的樣品溶液應(yīng)該具有相同的吸光度。這樣,對同樣濃度的樣品溶液,檢測器的響應(yīng)值應(yīng)該是相同的,所以上述噪音,基線漂移的參數(shù)應(yīng)該可以用來評價檢測器的靈敏度性能。
但是,實驗中發(fā)現(xiàn),同一樣品溶液在不同檢測器中響應(yīng)實際上存在明顯差異,表1顯示對于同一種樣品溶液,不同廠家和型號檢測器的響應(yīng)值可能相差3倍以上。這時,由于色譜分析主要使用相對比較的間接測定方法,其使用實際上并沒有受到多少影響。難以簡單認(rèn)定儀器存在問題。但因為信噪比發(fā)生了變化,上述噪音、基線漂移的參數(shù)就不能用來評價檢測器的靈敏度性能了。

此時,直接使用信噪比來評價檢測器的靈敏度性能才是可靠和準(zhǔn)確的方法。
3 信噪比指標(biāo)評價方法
評價信噪比需要測定響應(yīng)值,需要選定樣品,推薦萘和L-苯丙氨酸等在254nm附近有吸收的樣品,前者常用于色譜柱性能評價;后者無毒,且對儀器可能存在的偏振現(xiàn)象敏感。當(dāng)然,即使使用不同的評價樣品,只要固定濃度和溶劑,也可以用分光光度計來校正和比較。
根據(jù)現(xiàn)有信噪比測定方法,在選定特定濃度的樣品后,先在選定波長平衡檢測器(此時檢測器中的溶液為溶解評價樣品的溶劑),待基線穩(wěn)定后,將配制好的樣品溶液直接灌注到儀器的流路并充滿其中,注意不要灌入氣泡,信號穩(wěn)定后再用溶劑將樣品溶液沖出來。測定基線上下波動的幅度為噪音值(N),測定基線中值與樣品信號中值的差為信號值(S)。則信噪比為兩者的比值(SN)。

4 結(jié)
使用信噪比(SN)指標(biāo)評價檢測器,可以更準(zhǔn)確全面地評價各種檢測器的靈敏度性能。評價時可以參考現(xiàn)有的信噪比測定方法,建議用254nm作為檢測波長,選擇簡單易得的樣品,濃度值的選定應(yīng)使信噪比SN的值在10以內(nèi),以方便測量。配制特定濃度的評價溶液后,以灌注法測定此時相對溶劑的響應(yīng)值S,測定和計算出信噪比SN的值,作為該檢測器對特定評價樣品溶液的信噪比評價指標(biāo)的值。

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  【儀器網(wǎng) 維修保養(yǎng)】液相色譜柱是消耗品,隨著使用時間的增長與使用次數(shù)的增加,色譜柱的效果會下降。此時需要對色譜柱進(jìn)行清潔與再生,保證檢測的效果。同樣,色譜柱的保存也會影響使用壽命與使用效果。在使用完成之后須特別注意。
 
  色譜柱的再生
 
  反相柱
 
  1.準(zhǔn)備95:5的濃甲醇水溶液、純甲醇、異丙醇與二氯甲烷作為流動相;
 
  2.按順序沖洗色譜柱,每種流動相流經(jīng)色譜柱的量應(yīng)不少于20~30倍色譜柱體積;
 
  3.按相反的順序沖洗。
 
  正相柱
 
  1.準(zhǔn)備正己烷、異丙醇、二氯甲烷與甲醇作為流動相,所有流動相必須嚴(yán)格脫水;
 
  2.按順序沖洗色譜柱,每種流動相流經(jīng)色譜柱的量應(yīng)不少于20~30倍色譜柱體積,異丙醇粘度大,沖洗時應(yīng)注意放慢流速;
 
  3.按相反的順序沖洗。
 
  離子交換柱
 
  1.陽離子柱的再生可采用稀酸緩沖溶液沖洗;
 
  2.陰離子柱的再生可采用稀堿緩沖溶液沖洗。
 
  注意:以上的再生方法不是不可變通的,實際操作中,使用者可按照自身情況選擇合適的溶劑作流動相溶解色譜柱內(nèi)的污染物。但無論用什么方法再生,色譜柱都不能恢復(fù)原來的效果。
 
  色譜柱的保存
 
  反相柱:儲存于純甲醇或乙腈中;
 
  正相柱:儲存于純正己烷中,注意須嚴(yán)格脫水;
 
  離子交換柱:儲存于含防腐劑疊氮化鈉或柳硫汞的水中,并用塑料堵頭堵上。
 
  注意:若色譜柱使用過含鹽濃度較高的流動相,則須用超純水替換原來的流動相再選擇合適的溶液儲存。

液相色譜儀液相泵如何預(yù)防發(fā)生故障

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要保持泵的良好操作性能,必須持續(xù)保持系統(tǒng)的清潔,確保使用的溶劑和試劑的質(zhì)量,流動相進(jìn)入流路前必須進(jìn)行過濾和脫氣。
    
    
預(yù)防泵故障需要持久不間斷的努力:
     1)使用試劑和HPLC級溶劑,對泵對色譜柱都有好處;
     2)流動相和溶劑在使用前使用材料過濾;
     3)對流動相和溶劑進(jìn)處理脫氣;
     4)每次開始使用時要排氣放空,工作結(jié)束后從泵及色譜柱中洗去緩沖液或有害物;不讓水及腐蝕性溶劑等有害物質(zhì)滯留泵及色譜柱中;
     5)定期更換在線過濾圈等墊圈;
     6)嚴(yán)格遵從泵操作手冊中的建議。
    
    
處于良好操作狀態(tài)的泵,應(yīng)該能使色譜圖上的基線平穩(wěn);保留時間的重復(fù)性好。在等度洗脫時壓力波動小于2%。梯度洗脫時壓力變化應(yīng)是緩慢和平穩(wěn)的。
    
    
為了使故障發(fā)生后盡快排除,平時應(yīng)常備密封、單向閥(入口與出口)、泵頭裝置、各式接頭、保險絲等部件,以及更換工具。

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