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高效液相色譜儀---山東魯南瑞虹液相色譜操作規(guī)程

時(shí)間：2020-06-20 來源：儀多多儀器網(wǎng) 作者：儀多多商城

【導(dǎo)讀】高效液相經(jīng)常使用粒徑5um?的色譜柱，用過一段時(shí)間后，柱壓會略有升高，尤其是做中藥。常用來洗色譜柱的溶劑為甲醇，當(dāng)色譜柱用甲醇洗過之后，再用含乙腈的流動相平衡，會使柱壓迅速升高，色譜柱滴漏，這是由于

高效液相經(jīng)常使用粒徑5um?的色譜柱，用過一段時(shí)間后，柱壓會略有升高，尤其是做中藥。常用來洗色譜柱的溶劑為甲醇，當(dāng)色譜柱用甲醇洗過之后，再用含乙腈的流動相平衡，會使柱壓迅速升高，色譜柱滴漏，這是由于甲醇和乙腈匯合產(chǎn)生局部高壓。因此，這種情況下，應(yīng)慢慢升高流速，可以從0.6ml/min開始，一步步的平穩(wěn)柱壓，防止色譜柱漏液?？赡苁且?yàn)椋篛DS柱上有未完全硅烷化的羥基，與甲醇結(jié)合性好，當(dāng)遇到乙腈時(shí)，乙腈慢慢取代甲醇的位點(diǎn)，但是乙腈沒有羥基，結(jié)合性比甲醇差，所以產(chǎn)生了局部高壓.《br》
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【導(dǎo)讀】陸英草中烏索酸的高效液相色譜分析劉軍?? 本法用甲醇-水為流動相，在C18反相柱上建立了陸英中具有烏索酸含量測定的高效液相色譜法，以95%乙醇為溶劑處理樣品具有提取率高、色譜干擾小、物質(zhì)分離效果好的

陸英草中烏索酸的高效液相色譜分析
劉軍??
本法用甲醇-水為流動相，在C18反相柱上建立了陸英中具有烏索酸含量測定的高效液相色譜法，以95%乙醇為溶劑處理樣品具有提取率高、色譜干擾小、物質(zhì)分離效果好的優(yōu)點(diǎn)，本法簡便易行、快速準(zhǔn)確，其最小檢出限為0.2ug。不同濃度水平檢測結(jié)果日間、日內(nèi)相對誤差小于4.0%。
關(guān)鍵詞：陸英草烏索酸高效

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液相色譜柱的組成、安裝及使用注意事項(xiàng)

一、液相色譜柱的安裝

? ? ? 1. 液相色譜柱的結(jié)構(gòu)

　　a、空柱由柱接頭、柱管及濾片組裝而成。

　　柱接頭采用低死體積結(jié)構(gòu)，柱接頭是兩端螺紋組件，一端是為7/16英寸外螺紋，另一端是3／16英寸的內(nèi)螺紋(國內(nèi)外已規(guī)范化)。7／16英寸外螺紋與1／4英寸柱管(Φ6.35mm)連接，中間放置壓壞用于密封。3／16英寸的內(nèi)螺紋與1／16英寸(Φ1.57mm)的連接管連接，中間也放置壓環(huán)用于柱接頭的密封。為了盡量減少柱外死體積，在安裝色譜柱時(shí)，用Φ1.57mm連接管通過空心螺釘壓環(huán)后要盡量插到底，然后再擰緊空心螺釘。壓環(huán)被空心螺釘擠壓變形后緊箍在連接管上(連接管通過壓環(huán)后露出的管長度應(yīng)嚴(yán)格控制在2．5mm長或其他固定尺寸)。

　　在兩端柱接頭內(nèi)，柱管兩端各放置一片不銹鋼濾片(或?yàn)V網(wǎng))，用于封堵柱填料不被流動相沖出柱外而流失?？罩鹘M件均為316#不銹鋼材質(zhì)，能耐受一般的溶劑作用。但由于含氯化物的溶劑對其有一定的腐蝕性，故使用時(shí)要注意，柱及連接管內(nèi)不能長時(shí)間存留此類溶劑，以避免腐蝕。

　　b、柱填料：

　　液相色譜柱的分離作用是在填料與流動相之間進(jìn)行的，柱子的分類是依據(jù)填料類型而定。

　　正相柱：多以硅膠為柱填料。根據(jù)外型可分為無定型和球型兩種，其顆粒直徑在3—10μm的范圍內(nèi)。另一類正相填料是硅膠表面鍵合—CN，-NH2等官能團(tuán)即所謂的鍵合相硅膠。

　　反相柱：主要是以硅膠為基質(zhì)，在其表面鍵合十八烷基官能團(tuán)(ODS)的非極性填料。也有無定型和球型之分。

　　常用的其他的反相填料還有鍵合C8、C4、C2、苯基等，其顆粒粒徑在3—10μm之間。

? ? ? 2. 色譜柱的安裝

　　a、拆開柱包裝盒，確認(rèn)色譜柱的類

型、尺寸、出廠日期以及柱內(nèi)貯存的溶劑。

　　b、擰下柱兩端接頭的密封堵頭放回包裝盒供備用。

　　c、按柱管上標(biāo)示的流動相流向，將色譜柱的入口端通過連接管與進(jìn)樣閥出口相連接(如條件允許，建議在柱前使用保護(hù)柱)；柱的出口與檢測器連接。連接管是外徑為1.57mm、內(nèi)徑為0.1-0.3mm的不銹鋼管。連接管的兩端均有空心螺釘及密封用壓環(huán)。在接管時(shí)一定要設(shè)法降低柱外死體積。連接管通過空心螺釘、壓環(huán)后盡量用力插到底，然后順時(shí)針擰緊空心螺釘，直到擰不動為止，再用扳手繼續(xù)順時(shí)針擰1／4-1／2圈，切記不要用力過大。如色譜柱通過流動相加壓后有漏液現(xiàn)象，請用扳手繼續(xù)順時(shí)針擰1／4圈，直至不漏液為止。

二、液相色譜柱的使用：

　　色譜柱在使用前，*好進(jìn)行柱的性能測試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評價(jià)柱性能變化的參考。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外，在做柱性能測試時(shí)是按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行(出廠測試所使用的條件是*佳條件)，只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性。

　　1、樣品的前處理

　　a、*好使用流動相溶解樣品。

　　b、使用予處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。

　　c、使用0.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。

　　2、流動相的配制

　　液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此要求流動相具備以下的特點(diǎn)：

　　a、流動相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時(shí)間保留在柱中)。

　　b、流動相具有一定惰性，與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(特殊情況除外)。

　　c、流動相的黏度要盡量小，以便在使用較長的分析柱時(shí)能得到好的分離效果；同時(shí)降低柱壓降，延長液體泵的使用壽命(可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。

　　d、流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。如使用UV檢測器，*好使用對紫外吸收較低的溶劑配制。

　　e、流動相沸點(diǎn)不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無法進(jìn)行。

　　f、在流動相配制好后，一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。