高效液相色譜法有“三高一廣一快”的特點：
①高壓：流動相為液體，流經(jīng)色譜柱時，受到的阻力較大，為了能迅速通過色譜柱，必須對載液加高壓。
②高效：分離效能高?？蛇x擇固定相和流動相以達(dá)到較佳分離效果，比工業(yè)精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。
③高靈敏度：紫外檢測器可達(dá)0.01ng，進(jìn)樣量在μL數(shù)量級。
④應(yīng)用范圍廣：百分之七十以上的有機(jī)化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點、大分子、強極性、熱穩(wěn)定性差化合物的分離分析，顯示出優(yōu)勢。
⑤分析速度快、載液流速快：較經(jīng)典液體色譜法速度快得多，通常分析一個樣品在15～30分鐘，有些樣品甚至在5分鐘內(nèi)即可完成，一般小于1小時。
此外高效液相色譜還有色譜柱可反復(fù)使用、樣品不被破壞、易回收等優(yōu)點，但也有缺點，與氣相色譜相比各有所長，相互補充。高效液相色譜的缺點是有“柱外效應(yīng)”。在從進(jìn)樣到檢測器之間，除了柱子以外的任何死空間（進(jìn)樣器、柱接頭、連接管和檢測池等）中，如果流動相的流型有變化，被分離物質(zhì)的任何擴(kuò)散和滯留都會顯著地導(dǎo)致色譜峰的加寬，柱效率降低。高效液相色譜檢測器的靈敏度不及氣相色譜。
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色譜分析是以假定給定組分的保留值在分離條件不變時保留值恒定為基礎(chǔ)的。對標(biāo)準(zhǔn)的液相色譜程序而言，每個峰都對應(yīng)于一個組分，以標(biāo)準(zhǔn)品與樣品中組分的保留時間相對應(yīng)進(jìn)行鑒別。恒定的保留時間對分析設(shè)計排列的樣品很重要。
在液相色譜儀分析中常涉及到組分的保留值。保留值發(fā)生改變可使已建立的方法不能繼續(xù)進(jìn)行下去，或引起分析周期太長，或者峰分不開。應(yīng)該找出引起保留值變化的原因。
除上述條件之外，引起保留變化的原因主要包括下列3種：
1.柱-柱之間；
2.日-日或日內(nèi)：保留時間可能隨時間而變化，如溫度、柱溫、pH值等對柱性能有影響，通常是所有的峰提前或延遲。
3.樣品-樣品間：偶爾也有樣品與標(biāo)準(zhǔn)品的保留時間不同，可能是樣品介質(zhì)的影響。
以下重點討論造成日-日間和日內(nèi)保留時間變化的影響因素，它們主要是：
a.分離條件控制差
除了色譜柱外，保留是溫度、流動相組成和流速的綜合體現(xiàn)，如果有一個條件變化，保留時間也會隨之發(fā)生變化。
b.柱平衡慢
流動相組成或溫度變化時，柱在新條件下再平衡需要一定的時間，在柱達(dá)到完全平衡錢不應(yīng)進(jìn)樣。
c.柱鈍化
長時間進(jìn)樣，柱會退化，強保留組分被柱不可逆的保留，導(dǎo)致所有組分保留減少。鍵合相層從填料微粒上剝落下來，會導(dǎo)致某些組分的保留增加，而另一組分的保留減少。
d.柱過載和樣品介質(zhì)相互作用
過大的樣品量超出柱的線性范圍，使保留減少。也可能是樣品本身過載，從其它方面影響保留。
高效液相色譜儀是由儲液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、查看器、記錄儀等幾有些構(gòu)成。儲液器中的活動相被高壓泵打入體系，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入活動相，被活動相載入色譜柱（固定相、內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不一樣的分配系數(shù)，在兩相中作相對運動時，經(jīng)過重復(fù)屢次的吸附-解吸的分配進(jìn)程，各組分在移動速度上發(fā)生較大的不一樣，被別離成單個組分順次從柱內(nèi)流出，經(jīng)過查看器時，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜方式打印出來。 高效液相色譜儀常見故障解決方法： 故障1 活動相內(nèi)有氣泡，封閉泵，翻開泄壓閥，翻開purge鍵，清潔脫氣，氣泡不斷從過濾器冒出，進(jìn)入活動相，不管翻開purge鍵幾回，都無法清除不斷發(fā)生的氣泡。 因素過濾器長時刻沉浸于乙酸銨等緩沖液內(nèi)，過濾器內(nèi)部由于霉菌的成長繁衍，構(gòu)成菌團(tuán)，阻塞了過濾器，緩沖液難以流暢地經(jīng)過過濾器，空氣在泵的壓力作用下經(jīng)過濾器進(jìn)入活動相。 處理過濾器浸泡于5%硝酸溶液中，超聲清潔幾分鐘即可；亦可將過濾器浸泡于5%硝酸溶液中12～36小時，悄悄震蕩幾回，再將過濾器用純水清潔幾回，翻開泄壓閥，翻開purge鍵，清潔脫氣，如仍有氣泡不斷從過濾器冒出，持續(xù)將過濾器浸泡于5%硝酸溶液中，如沒有氣泡不斷從過濾器中冒出，闡明過濾器內(nèi)部的霉菌菌團(tuán)已被硝酸損壞，活動相能夠流暢地經(jīng)過過濾器。翻開泄壓閥，翻開泵，流速調(diào)至1.0～3.0ml/min，純水沖刷過濾器1小時擺布。即可將過濾器清潔潔凈。封閉泄壓閥，純甲醇沖刷半小時即可。 故障2 柱壓高因素：緩沖液鹽分如（乙酸銨等）堆積于柱內(nèi)；樣品污染堆積。 處理關(guān)于第一種狀況先用40～50℃的純水,低速正向沖刷柱子，待柱壓逐步降低后，相應(yīng)進(jìn)步流速沖刷，柱壓大幅度降低后，用常溫純水沖刷，之后用純甲醇沖刷柱子30分鐘；關(guān)于第二種狀況，由樣品的堆積導(dǎo)致污染的C18柱，和純水反向沖刷柱子，然后換成甲醇沖刷，接著用甲醇+異丙醇（4+6）沖刷柱子（沖刷時刻的長短由樣品污染的狀況而定），再用換成甲醇沖刷，然后用純水沖刷，最終甲醇沖刷正向沖刷柱子30分鐘以上。 故障3 既無壓力指示，又無液體流過[1>；。 泵密封墊圈磨損；很多氣泡進(jìn)入泵體。 處理關(guān)于第一種狀況，替換密封墊圈；關(guān)于第二種狀況，在泵作用的一起，用一個50ml的玻璃針筒在泵的出口處協(xié)助抽出空氣。 故障4 壓力動搖大，流量不穩(wěn)定. 因素體系中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物，使得兩者不能密封。 處理作業(yè)中留意調(diào)查活動相的量，確保不銹鋼濾器沉入儲液器瓶底，防止吸入空氣，活動相要充沛脫氣[2>；。如為單向閥和閥座之間夾有異物，拆下單向閥，放入盛有丙酮的燒杯用超聲波清潔. 故障5 出峰欠安，峰分叉。 因素色譜柱被污染；柱頭填料陷落。 處理關(guān)于第一種狀況，先用純水反向沖刷柱子，然后換成甲醇沖刷，接著用甲醇+異丙醇（4+6）沖刷柱子（沖刷時刻的長短由樣品污染的狀況而定），再換成甲醇沖刷，然后用純水沖刷，最終甲醇沖刷正向沖刷柱子30分鐘以上。如沖刷后仍然出峰欠安，則考慮第二種狀況。關(guān)于第二種狀況,擰開柱頭，查看柱填料是不是硬結(jié)或陷落。去掉硬結(jié)有些(污染的填料），裝入新填料，滴一滴甲醇，填料下陷，再填，用與柱內(nèi)徑一樣的頂端滑潤的不銹鋼桿壓緊，再填平，滴甲醇，再壓緊重復(fù)幾回，直至裝滿填平；。柱頭用甲醇沖刷潔凈，擦凈柱外壁的填料，擰緊柱頭，用純甲醇沖刷30分鐘以上。 下一篇：恒溫水浴的操作使用及注意事項高效液相色譜儀常見故障解決方法
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