使用前，要將液相色譜柱進行柱的性能測試，并保存結果，作為以后評價柱性能變化的參考。注意點：1.柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同；2.為了測得的結果才有可比性，在做柱性能測試時要按照色譜柱出廠報告中的條件進行(出廠測試所使用的條件是較佳條件)。

1、樣品的前處理
? a、可以使用流動相溶解樣品。
? b、使用予處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質。
? c、使用0.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質。

2、流動相的配制

液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質量交換而達到分離的目的，因此要求流動相具備以下的特點：
a、流動相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中)。
b、流動相具有一定惰性，與樣品不產(chǎn)生化學反應(特殊情況除外)。
c、流動相的黏度要盡量小，以便在使用較長的分析柱時能得到好的分離效果；同時降低柱壓降，延長液體泵? 的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。
d、流動相的物化性質要與使用的檢測器相適應。如使用UV檢測器，可以使用對紫外吸收較低的溶劑配制。
e、流動相沸點不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導致實驗無法進行。
f、在流動相配制好后，一定要進行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。
3、流動相流速的選擇
? 因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱，要追求較佳柱效，可以使用較佳流速。對內徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml／min，對于內徑為4.0mm柱，流速0.8ml／min為佳。當選用較佳流速時，分析時間可能延長?？刹捎酶淖兞鲃酉嗟南礈鞆姸鹊姆椒ㄒ钥s短分析時間(如使用反相柱時，可適當增加甲醇或乙腈的含量)。
注意
a．由于甲醇廉價，對于反相柱推薦使用甲醇體系(必須使用乙腈的場合除外)。
b．對于正相柱推薦使用沸程為30-60℃的石油醚或提純后的己烷作流動相，沒有提純的己烷不得使用。用水 可以使用超純水(電阻率大于18兆歐)，去離子水及雙蒸水中含有酚類雜質，有可能影響分析結果。
c．含水流動相最*在實驗前配制，尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動相不要過夜?？梢约尤氙B氮化鈉，防止? 細菌生長。
d．流動相要求使用0.45μm濾膜過濾，除去微粒雜質。
e．使用HPLC級溶劑配制流動相，使用合適的流動相可延長色譜柱的使用壽命，提高柱性能。

    在進行液相色譜儀分析實驗時，流動相再進入儀器之前，必須使用超聲波清洗機進行簡單的除氣泡處理，以防對泵造成損害，對檢測結果造成干擾。若在檢測過程中發(fā)現(xiàn)液相色譜儀恒流泵里有氣泡，須及時進行排除，排除高壓液相色譜儀泵中氣泡的方法如下。

    1、首先，檢查流動相儲液瓶中的溶劑過濾頭是否阻塞。具體做法：將輸入三通器上的溶劑塑料連接管的卸下，將流動相儲液瓶置于高位，利用壓差使溶液流出。如果溶劑流的很順暢，說明溶劑過濾頭是好的。如果是一滴一滴的流出，則說明過濾頭阻塞，需要超聲清洗，復原。

    2、用堵頭將儀器的高壓液流輸出口封住將色譜柱連在管路上、，可避免在抽液時將空氣抽入管路內。將儀器所配的注射器及塑料連接管插到放空閥的導管上，逆時針旋開放空閥旋鈕，抽液5-10mL，將泵的流速設定在每分鐘一毫升的流速。啟動泵，觀察塑料連接管的流動溶液是否還有氣泡。如沒有氣泡說明從過濾頭到放空閥這一段已將氣泡排除。

    3、將泵關閉，將堵頭從儀器的高壓液流輸出口去掉將色譜柱從管路上卸掉、使輸出口放空。順時針關閉放空閥旋鈕，將泵的流速設定在3-5mL的流速，將泵內的阻尼器和壓力傳感器的氣泡趕出，流出溶液10-15mL將泵關閉。連接上色譜柱，將流速設定在每分鐘一毫升，啟動泵，觀察壓力及壓力脈動。

    4、用水和異丙醇甲醇、交替沖洗泵的內腔，使吸附在內墻壁上的氣泡趕出。

    5、應用快速降壓法趕出氣泡：用小堵頭將泵的流動相輸出口堵上，將流速設定在1毫升/分，將柱前壓力升至20Mpa左右，將排空閥快速打開，重復2~3即可。