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高效液相色譜法的應(yīng)用 液相色譜操作規(guī)程

時(shí)間:2020-06-21    來源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     
【導(dǎo)讀】   高效液相色譜法的應(yīng)用遠(yuǎn)遠(yuǎn)廣于氣相色譜法。它廣泛用于合成化學(xué)、石油化學(xué)、生命科學(xué)、臨床化學(xué)、藥物研究、環(huán)境監(jiān)測、食品檢驗(yàn)及法學(xué)檢驗(yàn)等領(lǐng)域。   一. 在食品分析中的應(yīng)用   

  高效液相色譜法的應(yīng)用遠(yuǎn)遠(yuǎn)廣于氣相色譜法。它廣泛用于合成化學(xué)、石油化學(xué)、生命科學(xué)、臨床化學(xué)、藥物研究、環(huán)境監(jiān)測、食品檢驗(yàn)及法學(xué)檢驗(yàn)等領(lǐng)域。

  一. 在食品分析中的應(yīng)用

  1.食品營養(yǎng)成分分析:蛋白質(zhì)、氨基酸、糖類、色素、維生素、香料、有機(jī)酸(鄰苯二甲酸、檸檬酸、蘋果酸等)、有機(jī)胺、礦物質(zhì)等;

  2.食品添加劑分析:甜味劑、防腐劑、著色劑(合成色素如檸檬黃、莧菜紅、靛藍(lán)、胭脂紅、日落黃、亮藍(lán)等)、抗氧化劑等;

  食品污染物分析:霉菌毒素(黃曲霉毒素、黃桿菌毒素、大腸桿菌毒素等)、微量元素、多環(huán)芳烴等。

  二. 在環(huán)境分析中的應(yīng)用

  多環(huán)芳烴(特別是稠環(huán)芳烴)、農(nóng)藥(如氨基甲酸脂類,反相色譜)殘留等。

  三. 在生命科學(xué)中的應(yīng)用

  HPLC技術(shù)目前已成為生物化學(xué)家和醫(yī)學(xué)家在分子水平上研究生命科學(xué)、遺傳工程、臨床化學(xué)、分子生物學(xué)等必不可少的工具。其在生化領(lǐng)域的應(yīng)用主要集中于兩個(gè)方面:

  1. 低分子量物質(zhì),如氨基酸、有機(jī)酸、有機(jī)胺、類固醇、卟啉、糖類、維生素等的分離和測定。

  2. 高分子量物質(zhì),如多肽、核糖核酸、蛋白質(zhì)和酶(各種胰島素、激素、細(xì)胞色素、干擾素等)的純化、分離和測定。

  過去對這些生物大分子的分離主要依賴于等速電泳、經(jīng)典離子交換色譜等技術(shù),但都有一定的局限性,遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足生物化學(xué)研究的需要。因?yàn)樵谏I(lǐng)域中經(jīng)常要求從復(fù)雜的混合物基質(zhì),如培養(yǎng)基、發(fā)酵液、體液、組織中對感性趣的物質(zhì)進(jìn)行有效而又特異的分離,通常要求檢測限達(dá)ng級或pg級,或pmol,fmol,并要求重復(fù)性好、快速、自動檢測;制備分離、回收率高且不失活。在這些方面,HPLC具有明顯的優(yōu)勢。

  四. 在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用

  體液中代謝物測定;藥代動力學(xué)研究;臨床藥物監(jiān)測:

  1. 合成藥物:抗生素、抗憂郁藥物(冬眠靈、氯丙咪嗪、安定、利眠寧、****等)、黃胺類藥等。

  2. 天然藥物生物堿(吲哚堿、顛茄堿、**堿、強(qiáng)心甙)等

  五.在無機(jī)分析中的應(yīng)用

  陽、陰離子的分析等。



    液相色譜柱是實(shí)驗(yàn)室一種常用的色譜配件,也是液相色譜儀的必不可缺的一部分,那么,我們在做樣品分析的時(shí)候,如果色譜柱出現(xiàn)柱子柱流失怎么辦呢?下面為大家講講。
    首先明白液相色譜柱柱流失是不可避免的。柱流失程度與什么因素有關(guān)?
    1、柱流失程度與固定相種類和色譜柱規(guī)格有關(guān),一般固定相的量越多,柱流失則相對較高。
    2、柱流失與柱溫以及載氣中氧氣的濃度有關(guān)。高溫下,固定相的分解會加快,因此,高溫時(shí)的流失會比低溫時(shí)高。氧氣是許多固定相分解的催化劑,特別是在高溫時(shí)段,強(qiáng)調(diào)載氣的純度和液相色譜柱安裝的氣密性,一方面就是出于氧氣會加劇柱流失的考慮。
    3、此外,液相色譜柱隨著使用次數(shù)和時(shí)間的增加,固定相的穩(wěn)定性最終也會發(fā)生不可逆的變化,導(dǎo)致柱流失的增加。液相色譜柱柱流失嚴(yán)重情況多出現(xiàn)在進(jìn)樣的溶液類型,5MS的柱子是非極性的,當(dāng)使用極性溶劑時(shí),就會發(fā)生反應(yīng)而導(dǎo)致大量柱流失,在做測試時(shí)一定要留意樣品的性質(zhì)。







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