??一、取鏡和安放
?1.右手握住鏡臂,左手托住鏡座。
?2.把顯微鏡放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上,略偏左(顯微鏡放在距實(shí)驗(yàn)臺(tái)邊緣7厘米左右處)。安裝好目鏡和物鏡。
?二、對(duì)光
?3.轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器,使低倍物鏡對(duì)準(zhǔn)通光孔(物鏡的前端與載物臺(tái)要保持2厘米的距離)。
?4.把一個(gè)較大的光圈對(duì)準(zhǔn)通光孔。左眼注視目鏡內(nèi)(右眼睜開,便于以后同時(shí)畫圖)。轉(zhuǎn)動(dòng)反光鏡,使光線通過(guò)通光孔反射到鏡筒內(nèi)。通過(guò)目鏡,可以看到白亮的視野。
?三、觀察
?5.把所要觀察的玻片標(biāo)本(也可以用印有“6”字的薄紙片制成)放在載物臺(tái)上,用壓片夾壓住,標(biāo)本要正對(duì)通光孔的中心。
?6.轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋,使鏡筒緩緩下降,直到物鏡接近玻片標(biāo)本為止(眼睛看著物鏡,以免物鏡碰到玻片標(biāo)本)。
?7.左眼向目鏡內(nèi)看,同時(shí)反方向轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋,使鏡筒緩緩上升,直到看清物像為止。再略微轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋,使看到的物像更加清晰。
?8.高倍物鏡的使用:使用高倍物鏡之前,必須先用低倍物鏡找到觀察的物象,并調(diào)到視野的正中央,然后轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器再換高倍鏡。換用高倍鏡后,視野內(nèi)亮度變暗,因此一般選用較大的光圈并使用反光鏡的凹面,然后調(diào)節(jié)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋。觀看的物體數(shù)目變少,但是體積變大。
?四、整理
?8.實(shí)驗(yàn)完畢,把顯微鏡的外表擦拭干凈。轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器,把兩個(gè)物鏡偏到兩旁,并將鏡筒緩緩下降到最低處,反光鏡豎直放置。最后把顯微鏡放進(jìn)鏡箱里,送回原處。
?《注意事項(xiàng)》:
?1、嚴(yán)忌單手提取顯微鏡。
?2、若須移動(dòng)顯微鏡,務(wù)必將顯微鏡提起再放至適當(dāng)位置,嚴(yán)忌推動(dòng)顯微鏡(推動(dòng)時(shí)造成的震動(dòng)可能會(huì)導(dǎo)致顯微鏡內(nèi)部零件的松動(dòng),切記!!),使用顯微鏡請(qǐng)務(wù)必小心輕放。
?3、使用顯微鏡時(shí)坐椅的高度應(yīng)適當(dāng),觀察時(shí)更應(yīng)習(xí)慣兩眼同時(shí)觀察,且光圈及光源亮度皆應(yīng)適當(dāng),否則長(zhǎng)時(shí)間觀察時(shí)極易感覺(jué)疲勞。
?4、轉(zhuǎn)動(dòng)旋轉(zhuǎn)盤時(shí)務(wù)必將載物臺(tái)降至最低點(diǎn),以免因操作不當(dāng)而刮傷接目鏡之鏡頭。
?5、標(biāo)本染色或其它任何操作皆應(yīng)將玻片取下,操作完成后再放回載物臺(tái)觀察,切勿在載物臺(tái)上操作,以免染劑或其它液體流入顯微鏡內(nèi)部或傷及鏡頭。
?6、觀察完一種材料,欲更換另一種材料時(shí),務(wù)必將載物臺(tái)下降至最低點(diǎn),換好玻片后再依標(biāo)準(zhǔn)程序重新對(duì)焦,切勿直接抽換標(biāo)本,以免刮傷鏡頭或玻片標(biāo)本。
?7、用畢顯微鏡應(yīng)將載物臺(tái)下降至最低點(diǎn),并將低倍鏡對(duì)準(zhǔn)載物臺(tái)中央圓孔處,將電源線卷好,蓋上防塵罩,并收入存放柜中。
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熒光顯微鏡濾色片的選用
濾色片是熒光顯微鏡的關(guān)鍵部件, 在熒光顯微鏡中按其功能可分為激發(fā)濾色片和截止濾色片兩類。激發(fā)濾色片的功能是從光源中分析出所需的特定光譜, 以激發(fā)標(biāo)本產(chǎn)生熒光。截止濾色片的功能是僅把標(biāo)本上發(fā)出的熒光透過(guò)成像, 而將其它光阻擋不參與成像, 一般激發(fā)濾色片安置在緊靠光源, 而截止濾色片在物鏡與目鏡之間。
按其透過(guò)光譜特性曲線可分為“短波通過(guò)”、“長(zhǎng)波通過(guò)”和“波段通過(guò)”濾色片。波段通過(guò)濾色片按波帶寬度又可分為“寬波帶”和“窄波帶”濾色片, 如果半寬帶(即HW = 50% 的透射峰的主透射帶的寬度之半)大于50nm , 視為“寬波帶型”; 若小于20nm , 則可視為“窄波帶型”。
濾色片初期用貯放玻璃盒中的有色液體, 后改用帶色膠質(zhì)片, 由于易變色和使用不方便已被淘汰?,F(xiàn)在經(jīng)常使用的為色玻璃和干涉濾色片, 色玻璃大都屬寬波帶濾色片, 透過(guò)波段寬, 透過(guò)率隨厚度而降低, 價(jià)格相對(duì)低廉。由于色玻璃與空氣的界面上, 約有4% 光線被反射掉, 玻片愈多, 光能損失愈大, 限制了它的使用性能。干涉濾色片的出現(xiàn), 可按需要制成能透過(guò)或截止一定波段的濾色片, 從而促使熒光顯微術(shù)的進(jìn)展, 現(xiàn)代技術(shù)上已能對(duì)某波段的透射率或反射率進(jìn)行控制。
由此可見(jiàn), 多數(shù)熒光色素和熒光發(fā)色團(tuán)分子具有相當(dāng)寬的吸收光波帶和熒光波帶, 峰值間隔又較大, 所以在需要得到強(qiáng)熒光時(shí), 很少使用窄波帶濾色片, 因?yàn)樗率瓜喈?dāng)大的光源能量損失了(沒(méi)有利用) ,僅在光源的強(qiáng)發(fā)射譜線和激發(fā)時(shí)的吸收峰相重合時(shí)才使用。當(dāng)使用寬波帶濾色片時(shí), 往往組織成分和光路中的自發(fā)熒光會(huì)被這類濾色片中的短波光激發(fā)出來(lái), 加到熒光圖象中而混擾。多數(shù)應(yīng)用中, 激發(fā)濾色片的半寬約20nm 就能給出滿意的結(jié)果。