液相色譜的柱子通常分為正相柱和反相柱。正相柱大多以硅膠為柱，或是在硅膠表面鍵合-CN,-NH3等官能團的鍵合相硅膠柱;反相柱填料主要以硅膠為基質(zhì)，在其表面鍵合非極性的十八烷基官能團（ODS）稱為C18柱，其它常用的反相柱還有C8,C4,C2和苯基柱等。另外還有離子交換柱，GPC柱，聚合物填料柱等。下面介紹一下反相色譜柱的選擇和使用：

    一、反相色譜柱的選擇

    1.柱子的PH值使用范圍

    反相柱優(yōu)點是固定相穩(wěn)定，應(yīng)用廣泛，可使用多種溶劑。但硅膠為基質(zhì)的填料，使用時一定要注意流動相的PH范圍。一般的C18柱PH值范圍都在2-8，流動相的PH值小于2時，會導(dǎo)致鍵合相的水解;當(dāng)PH值大于7時硅膠易溶解;經(jīng)常使用緩沖液固定相要降解。一旦發(fā)生上述情況，色譜柱人口處會塌陷。同樣填料各種不同牌號的色譜柱不盡相同。如果流動相PH較高或經(jīng)常使用緩沖液時，建議選擇PH范圍大的柱子，例如戴安公司的Acclaim柱PH2-9或Zorbax的PH2-11.5的柱子。

    2.填料的端基封尾（或稱封口）

    把填料的殘余硅羥基采用封口技術(shù)進行端基封尾，可改善對極性化合物的吸附或拖尾;含碳量增高了，有利于不易保留化合物的分離;填料穩(wěn)定性好了，組分的保留時間重現(xiàn)性就好。如果待分析的樣品屬酸性或堿性的化合物，可以選用填料經(jīng)端基封尾的色譜柱。

    二、液相色譜柱的使用

    色譜柱在使用前，可以進行柱的性能測試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評價柱性能變化的參考。在做柱性能測試時要按照色譜柱出廠報告中的條件進行（出廠測試所使用的條件是較佳條件），只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同。

    1、樣品的前處理

    a、可以使用流動相溶解樣品。

    b、使用預(yù)處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。

    c、使用0.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。

    2、流動相的配制

    液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此要求流動相具備以下的特點：

    a、流動相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會沉淀在柱中（或長時間保留在柱中）。

    b、流動相與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)c、流動相的黏度要盡量小，以便得到好的分離效果;降低柱壓降，延長泵的使用壽命（可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度）。

    d、流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。如使用UV檢測器，可以使用對紫外吸收較低的溶劑配制。

    e、流動相沸點不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實驗無法進行。

    f、在流動相配制好后，一定要進行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。

    3、流動相流速的選擇

    因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱，要追求較佳柱效，可以使用較佳流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml/min，對于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml/min為佳。

    當(dāng)選用較佳流速時，分析時間可能延長?？刹捎酶淖兞鲃酉嗟南礈鞆姸鹊姆椒ㄒ钥s短分析時間（如使用反相柱時，可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量）。

    注意：

    a.含水流動相可以在實驗前配制，尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動相不要過夜。可以加入疊氮化鈉，防止細(xì)菌生長。

    b.流動相要求使用0.45μm濾膜過濾，除去微粒雜質(zhì)。

    c.使用HPLC級溶劑配制流動相，使用合適的流動相可延長色譜柱的使用壽命，提高柱性能。

    三.色譜柱的維護

    1.色譜柱的平衡

    反相色譜柱由工廠測試后是保存在乙腈/水中的。新柱應(yīng)先使用10-20倍柱體積的甲醇或乙腈沖洗色譜柱。請一定確保您分析樣品所使用的流動相和乙腈/水互溶。每天用足夠的時間以流動相來平衡色譜柱，您就會在處理問題方面獲得最大的"補償"，而且您的色譜柱的壽命也會變得更長!操作步驟：

    a.平衡開始時將流速緩慢地提高，用流動相平衡色譜柱直到獲得穩(wěn)定的基線（緩沖鹽或離子對試劑流速如果較低，則需要較長的時間來平衡）

    b.如果使用的流動相中含有緩沖鹽，應(yīng)注意用純水"過渡"即每天分析開始前必須先用純水沖洗30分鐘以上再用緩沖鹽流動相平衡;分析結(jié)束后必須先用純水沖洗30分鐘以上除去緩沖鹽之后再用甲醇沖洗30分鐘保護柱子。

    2.色譜柱的再生

    長期使用的色譜柱，往往柱效會下降（柱子的理論塔板數(shù)減低）。可以對色譜柱進行再生，在有條件的實驗室應(yīng)使用一個廉價的泵進行柱子的再生。

    建議用來沖洗柱子的溶劑體積

    色譜柱尺寸柱體積所用溶劑的體積

    125-4mm1.6ml30ml

    250-4mm3.2ml60ml

    250-10mm20ml400ml

    選擇再生方法：

    極性固定相（如Si，NH2*，DIOL基色譜填料）的再生：

    正庚烷→→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水**

    非極性固定相（如反相色譜填料RP-18，RP-8，CN等）的再生：水→乙腈→（或異丙醇）→乙腈→水

    注意：

    a.在對NH2改性的色譜柱進行再生時，由于NH2可能以銨根離子的形式存在，因此應(yīng)該在水洗后用0.1M的氨水沖洗，然后再用水沖洗至堿溶液完全流出稀硫酸可以用來清洗已污染的色譜柱，如果簡單的用有機溶劑/水的處理不能夠完全洗去硅膠表面吸附的雜質(zhì)，在水洗后加用0.05M稀硫酸沖洗非常有效。

    3.色譜柱的維護

    a.使用預(yù)柱保護分析柱（硅膠在極性流動相/離子性流動相中有一定的溶解度）

    b.大多數(shù)反相色譜柱的pH穩(wěn)定范圍是2-7.5，盡量不超過該色譜柱的pH范圍

    c.避免流動相組成及極性的劇烈變化

    d.流動相使用前必須經(jīng)脫氣和過濾處理

    e.如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動相，應(yīng)在實驗完畢柱子沖洗干凈，并保存于甲醇或乙腈中

    f.氯化物的溶劑對其有一定的腐蝕性，故使用時要注意，柱及連接管內(nèi)不能長時間存留此類溶劑，以避免腐蝕

一、流動相的pH應(yīng)在使用范圍內(nèi)
以硅膠為基質(zhì)的反相色譜柱的pH范圍為2~9，流動相超過其pH范圍將會導(dǎo)致硅膠基質(zhì)流失和鍵合相碳鏈斷裂，使柱效下降，壽命變短。

二、去除樣品和流動相匯總的固體顆粒
樣品和流動相中含有固體顆粒物質(zhì)會堵塞色譜柱篩板，不僅會引起柱壓的升高，而且也會引起柱效下降。因此，建議使用超純水和色譜純試劑，在分析前對樣品進行針筒過濾，流動相過0.45um濾膜。

三、使用保護柱或在線過濾器
保護柱和在線過濾器上都有篩板，其孔徑與色譜柱篩板孔徑相同，因此可以阻止固體顆粒物質(zhì)到達(dá)色譜柱，有效防止色譜柱篩板的堵塞。由于柱壓升高在分析故障中占很大比例，因此除對樣品和流動相進行過濾外，建議您在色譜柱進樣端加上保護柱或在線過濾器。

四、正確使用緩沖鹽
緩沖鹽使用不當(dāng)會使其在流動相（含有機溶劑）中析出，堵塞填料基質(zhì)上的微孔和顆粒間的空隙，使填料板結(jié)，柱壓上升；同時阻礙了基質(zhì)上的鍵合的碳鏈自由舒展，使用色譜柱的保留能力下降，柱效降低。

建議使用前要過濾，使用后要沖洗。具體方法如下：
1、等度條件：使用緩沖鹽前和使用后需要過濾流動相1.0ml/min流速沖洗60min.
2、梯度條件：用含有緩沖鹽的流動相跑梯度之前，用與初始流動相組成相同的過濾流動相似1.0ml/min流速沖洗60min；分析完成后，再用該過濾流動以1.0ml/min沖洗色譜柱120min。含緩沖鹽流動相的梯度設(shè)定應(yīng)盡量平緩，以避免梯度過程中緩沖鹽析出。

五、柱清洗方法：
1、未使用緩沖鹽：每天分析完成后，用純甲醇或純乙腈反向沖洗色譜柱60min。
2、使用過緩沖鹽：分析完成后，先后用上述方法除去緩沖鹽，然后再用純甲醇或乙腈反向沖洗色譜柱60min。

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    氣相色譜柱除用于定量和定性分析外，還能測定樣品在固定相上的分配系數(shù)、活度系數(shù)、分子量和比表面積等物理化學(xué)常數(shù)，是一種對混合氣體中各組成分進行分析檢測的儀器。廣泛應(yīng)用于石油、化工、生物化學(xué)、醫(yī)藥衛(wèi)生、食品工業(yè)、環(huán)保等方面。

    選擇氣相色譜柱時要考慮到以下性能：

    1、柱長

    氣相色譜柱柱長會影響到柱效、保留（分析時間）和載氣壓力。

    如果不知道較佳長度，優(yōu)先使用25-30米長的色譜柱；10-15米的色譜柱十分適用于分離含有很容易分離溶質(zhì)的樣品或含溶質(zhì)較少的樣品；50-60米長的色譜柱適合分離含有很多組分的復(fù)雜樣品，但是長的色譜柱的分析時間較長、費用也較高。

    2、內(nèi)徑

    0.15和0.18mm內(nèi)徑的色譜柱十分適用于泵容量低的GC/MS系統(tǒng)。內(nèi)徑較小的色譜柱具有的柱容量最小，并需要最高的柱頭壓；

    當(dāng)需要較高的樣品容量時，使用0.32mm內(nèi)徑的色譜柱。與0.25mm內(nèi)徑的色譜柱相比，它們對于不分流進樣或大體積（>2?L）進樣時早流出的溶質(zhì)有更佳的分離度；

    只有在儀器配備大口徑直接進樣器并需要較高的柱效時，才使用0.45mm內(nèi)徑的色譜柱。特別適用于高載氣流速的情況，比如吹掃-捕集、頂空進樣器和閥進樣的應(yīng)用。

    3、膜厚

    色譜柱液膜厚度影響保留、分離度、流失、惰性和柱容量。

    0.18-0.32mm內(nèi)徑的色譜柱平均或標(biāo)準(zhǔn)膜厚為0.18-0.25?m，可用于大多數(shù)分析；

    0.45-0.53mm內(nèi)徑的色譜柱平均或標(biāo)準(zhǔn)膜厚為0.8-1.5?m

    薄液膜色譜柱用于降低高沸點、高分子量溶質(zhì)的保留（如，類固醇、甘油三酯）。

    厚液膜色譜柱惰性更好，柱容量更大，用于保留和分離揮發(fā)性溶質(zhì)（如，輕質(zhì)溶劑、氣體）。