727型分光光度計(jì)已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器。常用于核酸，蛋白定量以及細(xì)菌生長(zhǎng)濃度的定量。
分光光度計(jì)的簡(jiǎn)單原理
分光光度計(jì)采用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長(zhǎng)的光源，通過系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長(zhǎng)的光源，光源透過測(cè)試的樣品后，部分光源被吸收，計(jì)算樣品的吸光值，從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
核酸的定量
?核酸的定量是分光光度計(jì)使用頻率最高的功能?？梢远咳苡诰彌_液的寡核苷酸，單鏈、雙鏈DNA，以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波長(zhǎng)260 nm。每種核酸的分子構(gòu)成不一，因此其換算系數(shù)不同。定量不同類型的核酸，事先要選擇對(duì)應(yīng)的系數(shù)。如：1OD的吸光值分別相當(dāng)于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。測(cè)試后的吸光值經(jīng)過上述系數(shù)的換算，從而得出相應(yīng)的樣品濃度。測(cè)試前，選擇正確的程序，輸入原液和稀釋液的體積，爾后測(cè)試空白液和樣品液。然而，實(shí)驗(yàn)并非一帆風(fēng)順。讀數(shù)不穩(wěn)定可能是實(shí)驗(yàn)者最頭痛的問題。靈敏度越高的儀器，表現(xiàn)出的吸光值漂移越大。
事實(shí)上，分光光度計(jì)的設(shè)計(jì)原理和工作原理，允許吸光值在一定范圍內(nèi)變化，即儀器有一定的準(zhǔn)確度和精確度。如EppendorfBiophotometer的準(zhǔn)確度≤%（1A）。%左右之間變動(dòng)，都是正常的。另外，還需考慮核酸本身物化性質(zhì)和溶解核酸的緩沖液的pH值，離子濃度等：在測(cè)試時(shí)，離子濃度太高，也會(huì)導(dǎo)致讀數(shù)漂移，因此建議使用pH值一定、離子濃度較低的緩沖液，如TE，可大大穩(wěn)定讀數(shù)。樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素：由于樣品中不可避免存在一些細(xì)小的顆粒，尤其是核酸樣品。這些小顆粒的存在干擾測(cè)試效果。為了最大程度減少顆粒對(duì)測(cè)試結(jié)果的影響，，。在此范圍內(nèi)，顆粒的干擾相對(duì)較小，結(jié)果穩(wěn)定。
?由于另外測(cè)試的樣品量不同，所以一般分光光度計(jì)廠家提供不同容積的比色杯以滿足用戶不同的需求。目前市場(chǎng)已經(jīng)存在一種既可用于核酸、紫外蛋白質(zhì)定量，亦可用于蛋白比色法測(cè)定的塑料杯，樣品用量?jī)H需50μl，比色杯單個(gè)無菌包裝，可以回收樣品。如Eppendorf UVette?塑料比色杯，是目前比色杯市場(chǎng)上一個(gè)革新。隨著生命科學(xué)以及相關(guān)學(xué)科發(fā)展，對(duì)此類科學(xué)的實(shí)驗(yàn)研究提出更高的要求，分光光度計(jì)將是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室不可缺少的儀器，也成為微生物、食品、制藥等相關(guān)實(shí)驗(yàn)室的必備設(shè)備之一。?
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等離子清洗機(jī),反應(yīng)釜,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,高精度溫濕度計(jì),露點(diǎn)儀,高效液相色譜儀價(jià)格,霉菌試驗(yàn)箱,跌落試驗(yàn)臺(tái),離子色譜儀價(jià)格,噪聲計(jì),高壓滅菌器,集菌儀,接地電阻測(cè)試儀型號(hào),柱溫箱,旋渦混合儀,電熱套,場(chǎng)強(qiáng)儀萬能材料試驗(yàn)機(jī)價(jià)格,洗瓶機(jī),勻漿機(jī),耐候試驗(yàn)箱,熔融指數(shù)儀,透射電子顯微鏡。
原子熒光光度計(jì)利用惰性氣體氬氣作載氣，將氣態(tài)氫化物和過量氫氣與載氣混合后，導(dǎo)入加熱的原子化裝置，氫氣和氬氣在特制火焰裝置中燃燒加熱，氫化物受熱以后迅速分解，被測(cè)元素離解為基態(tài)原子蒸氣，其基態(tài)原子的量比單純加熱砷、銻、鉍、錫、硒、碲、鉛、鍺等元素生成的基態(tài)原子高幾個(gè)數(shù)量級(jí)。
利用原子熒光譜線的波長(zhǎng)和強(qiáng)度進(jìn)行物質(zhì)的定性與定量分析的方法。原子蒸氣吸收特征波長(zhǎng)的輻射之后，原子激發(fā)到高能級(jí)，激發(fā)態(tài)原子接著以輻射方式去活化，由高能級(jí)躍遷到較低能級(jí)的過程中所發(fā)射的光稱為原子熒光。當(dāng)激發(fā)光源停止照射之后，發(fā)射熒光的過程隨即停止?！≡訜晒饪煞譃?3類：即共振熒光、非共振熒光和敏化熒光，其中以共振原子熒光zui強(qiáng)，在分析中應(yīng)用zui廣。共振熒光是所發(fā)射的熒光和吸收的輻射波長(zhǎng)相同。只有當(dāng)基態(tài)是單一態(tài)，不存在中間能級(jí)，才能產(chǎn)生共振熒光。非共振熒光是激發(fā)態(tài)原子發(fā)射的熒光波長(zhǎng)和吸收的輻射波長(zhǎng)不相同。非共振熒光又可分為直躍線熒光、階躍線熒光和反斯托克斯熒光。直躍線熒光是激發(fā)態(tài)原子由高能級(jí)躍遷到高于基態(tài)的亞穩(wěn)能級(jí)所產(chǎn)生的熒光。階躍線熒光是激發(fā)態(tài)原子先以非輻射方式去活化損失部分能量，回到較低的激發(fā)態(tài)，再以輻射方式去活化躍遷到基態(tài)所發(fā)射的熒光。直躍線和階躍線熒光的波長(zhǎng)都是比吸收輻射的波長(zhǎng)要長(zhǎng)。反斯托克斯熒光的特點(diǎn)是熒光波長(zhǎng)比吸收光輻射的波長(zhǎng)要短。敏化原子熒光是激發(fā)態(tài)原子通過碰撞將激發(fā)能轉(zhuǎn)移給另一個(gè)原子使其激發(fā)，后者再以輻射方式去活化而發(fā)射的熒光。
根據(jù)熒光譜線的波長(zhǎng)可以進(jìn)行定性分析。在一定實(shí)驗(yàn)條件下，熒光強(qiáng)度與被測(cè)元素的濃度成正比。據(jù)此可以進(jìn)行定量分析?！≡訜晒夤庾V儀分為色散型和非色散型兩類。兩類儀器的結(jié)構(gòu)基本相似，差別在于非色散儀器不用單色器。色散型儀器由輻射光源、單色器、原子化器、檢測(cè)器、顯示和記錄裝置組成。輻射光源用來激發(fā)原子使其產(chǎn)生原子熒光?？捎眠B續(xù)光源或銳線光源，常用的連續(xù)光源是氙弧燈，可用的銳線光源有高強(qiáng)度空心陰極燈、無極放電燈及可控溫度梯度原子光譜燈和激光。單色器用來選擇所需要的熒光譜線，排除其他光譜線的干擾。原子化器用來將被測(cè)元素轉(zhuǎn)化為原子蒸氣，有火焰、電熱、和電感耦合等離子焰原子化器。檢測(cè)器用來檢測(cè)光信號(hào)，并轉(zhuǎn)換為電信號(hào)，常用的檢測(cè)器是光電倍增管。顯示和記錄裝置用來顯示和記錄測(cè)量結(jié)果，可用電表、數(shù)字表、記錄儀等?！≡訜晒夤庾V分析法具有設(shè)備簡(jiǎn)單、靈敏度高、光譜干擾少、工作曲線線性范圍寬、可以進(jìn)行多元素測(cè)定等優(yōu)點(diǎn)。在地質(zhì)、冶金、石油、生物醫(yī)學(xué)、地球化學(xué)、材料和環(huán)境科學(xué)等各個(gè)領(lǐng)域內(nèi)獲得了廣泛的應(yīng)用。
原子熒光光度計(jì)的日常保養(yǎng)
● 嚴(yán)格遵循開、關(guān)機(jī)程序。
● 觀察管路的密閉性能，如果管路漏液應(yīng)及時(shí)停止轉(zhuǎn)泵，查清漏源再次連接好管路，應(yīng)及時(shí)清除漏液避免液體腐蝕儀器表面。
● 為了自身健康和環(huán)境請(qǐng)你及時(shí)處理廢液。
● 測(cè)試完成以后，用去離子水清洗泵管和注射針管，并及時(shí)取下蠕動(dòng)泵泵管卡，避免泵管長(zhǎng)時(shí)間壓制變形而影響其壽命。變形后可用10%鹽酸浸泡48小時(shí)，用去離子水清洗干凈備用。
● 泵管使用一段時(shí)間后，應(yīng)隨時(shí)向泵管與泵頭間的空隙滴加隨機(jī)提供的硅油，以保護(hù)泵管。
● 儀器的表面清潔 儀器的外殼表面經(jīng)過了噴漆、及噴塑工藝的處理，在使用過程中請(qǐng)不要將溶液遺灑在外殼上， 否則會(huì)在外殼上留下斑痕， 如果不小心將溶液遺灑在外殼上請(qǐng)立即用濕毛巾擦拭干凈，杜絕使用有機(jī)溶液擦拭。
● 氣液分離器和加熱石英管為石英玻璃件，應(yīng)避免碰撞以免破碎，使用過程中可用10%鹽酸浸泡24小時(shí)來清除雜質(zhì)，用去離子水清洗干凈晾干備用。
● 儀器長(zhǎng)期不用時(shí)，需每隔1個(gè)月預(yù)熱儀器半小時(shí)左右(在測(cè)量狀態(tài)下預(yù)熱才有用)，有助于延長(zhǎng)燈及儀器的壽命。
以上資料由 武漢中昌國(guó)研標(biāo)物科技有限公司 整理發(fā)布。
一、原子熒光光度計(jì)點(diǎn)火問題：
在分析工作中，經(jīng)常會(huì)碰到部分儀器點(diǎn)火線圈不亮，無法正常點(diǎn)火。首先要檢查點(diǎn)火爐絲是否正常，如爐絲斷則需要更換爐絲，如爐絲亮但點(diǎn)不燃火焰，就需要檢查燃?xì)饣?font data-color="#0268CA">控制閥，檢查爐絲與爐芯的位置是否合適。排除這些故障后儀器可正常點(diǎn)火。
二、原子熒光光度計(jì)無信號(hào)強(qiáng)度：
在儀器檢定過程中，經(jīng)常遇到儀器測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)溶液后無響應(yīng)熒光強(qiáng)度。遇到此類問題，首先應(yīng)該檢查靜態(tài)光源，檢查元素?zé)羰欠顸c(diǎn)亮。若儀器燈能量正常，說明儀器電路部分正常，則需要進(jìn)一步檢查反應(yīng)系統(tǒng)或原子化系統(tǒng)。檢查儀器泵管松緊是否合適，管道有無堵塞破裂。如出現(xiàn)上述情況，試劑沒有進(jìn)系統(tǒng)，儀器沒有發(fā)生氧化還原反應(yīng)，則不會(huì)產(chǎn)生信號(hào)。更換管道，調(diào)整泵管松緊可以解決此問題。
檢定標(biāo)準(zhǔn)溶液的酸度或還原劑濃度不夠，不能生成被測(cè)元素的氫化物，無法正常原子化也會(huì)造成儀器無響應(yīng)熒光強(qiáng)度，這就需要檢查配置標(biāo)準(zhǔn)溶液所使用的酸和還原劑濃度。
三、原子熒光光度計(jì)性能特點(diǎn)：
1、適用于樣品中砷、汞、硒、鉛、鍺、錫、銻、鉍、鎘、碲、鋅、金等十二種元素的痕量分析。
2、首創(chuàng)采用zui新設(shè)計(jì)的進(jìn)口注射泵與蠕動(dòng)泵聯(lián)用的內(nèi)置式斷續(xù)流動(dòng)進(jìn)樣裝置，即保證進(jìn)樣量準(zhǔn)確，
又克服了注射泵腐蝕和漏液的現(xiàn)象，同時(shí)樣品和空白交替引入，在線清洗，機(jī)械動(dòng)力排除廢液，杜絕交叉污染，節(jié)約樣品和試劑用量。
3、首創(chuàng)夾管閥應(yīng)用技術(shù)，代替?zhèn)鹘y(tǒng)的單向閥和多道通閥，試劑不接觸閥體，無腐蝕，無記憶，且可靠性高，壽命長(zhǎng)達(dá)50萬次以上。
4、全自動(dòng)智能化運(yùn)行，三維自動(dòng)進(jìn)樣器，單個(gè)樣品盤多達(dá)130位，并支持半自動(dòng)測(cè)定方式。
5、采用特制編碼空芯陰極燈，儀器自動(dòng)識(shí)別元素，并可監(jiān)控空芯陰極燈使用壽命。
6、空芯陰極燈采用恒流驅(qū)動(dòng)、脈沖供電方式，提高其發(fā)射強(qiáng)度和效率，延長(zhǎng)其使用壽命。
7、儀器可實(shí)現(xiàn)單點(diǎn)配制工作曲線，自動(dòng)稀釋高濃度樣品。
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