液相色譜儀是指利用混合物在液-固或不互溶的兩種液體之間分配比的差異,對(duì)混合物進(jìn)行先分離,而后分析鑒定的儀器。
基本介紹
液相色譜儀根據(jù)固定相是液體或是固體,又分為液-液色譜(LLC)及液-固色譜(LSC)。現(xiàn)代液相色譜儀由高壓輸液泵、進(jìn)樣系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、色譜柱、檢測(cè)器、信號(hào)記錄系統(tǒng)等部分組成。與經(jīng)典液相柱色譜裝置比較,具有高效、快速、靈敏等特點(diǎn)。
液相色譜儀使用范圍
應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)、環(huán)境化學(xué)、石油化工等部門(mén)。
應(yīng)用范疇
高效液相色譜法只要求樣品能制成溶液,不受樣品揮發(fā)性的限制,流動(dòng)相可選擇的范圍寬,固定相的種類繁多,因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質(zhì)。
與試樣預(yù)處理技術(shù)相配合,HPLC所達(dá)到的高分辨率和高靈敏度,使分離和同時(shí)測(cè)定性質(zhì)上十分相近的物質(zhì)成為可能,能夠分離復(fù)雜相體中的微量成分。隨著固定相的發(fā)展,有可能在充分保持生化物質(zhì)活性的條件下完成其分離HPLC成為解決生化分析問(wèn)題比較為有前途的方法。
由于HPLC具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復(fù)利用,流出組分易收集等優(yōu)點(diǎn),因而被廣泛應(yīng)用到生物化學(xué)、食品分析、醫(yī)藥研究、環(huán)境分析、無(wú)機(jī)分析等各種領(lǐng)域。
高效液相色譜儀與結(jié)構(gòu)儀器的聯(lián)用是一個(gè)重要的發(fā)展方向。液相色譜-質(zhì)譜連用技術(shù)受到普遍重視,如分析氨基甲酸酯農(nóng)藥和多核芳烴等;液相色譜-紅外光譜連用也發(fā)展很快如在環(huán)境污染分析測(cè)定水中的烴類,海水中的不揮發(fā)烴類,使環(huán)境污染分析得到新的發(fā)展。
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高效液相色譜法的應(yīng)用遠(yuǎn)遠(yuǎn)廣于氣相色譜法。它廣泛用于合成化學(xué)、石油化學(xué)、生命科學(xué)、臨床化學(xué)、藥物研究、環(huán)境監(jiān)測(cè)、食品檢驗(yàn)及法學(xué)檢驗(yàn)等領(lǐng)域。
一. 在食品分析中的應(yīng)用
1.食品營(yíng)養(yǎng)成分分析:蛋白質(zhì)、氨基酸、糖類、色素、維生素、香料、有機(jī)酸(鄰苯二甲酸、檸檬酸、蘋(píng)果酸等)、有機(jī)胺、礦物質(zhì)等;
2.食品添加劑分析:甜味劑、防腐劑、著色劑(合成色素如檸檬黃、莧菜紅、靛藍(lán)、胭脂紅、日落黃、亮藍(lán)等)、抗氧化劑等;
食品污染物分析:霉菌毒素(黃曲霉毒素、黃桿菌毒素、大腸桿菌毒素等)、微量元素、多環(huán)芳烴等。
二. 在環(huán)境分析中的應(yīng)用
多環(huán)芳烴(特別是稠環(huán)芳烴)、農(nóng)藥(如氨基甲酸脂類,反相色譜)殘留等。
三. 在生命科學(xué)中的應(yīng)用
HPLC技術(shù)目前已成為生物化學(xué)家和醫(yī)學(xué)家在分子水平上研究生命科學(xué)、遺傳工程、臨床化學(xué)、分子生物學(xué)等必不可少的工具。其在生化領(lǐng)域的應(yīng)用主要集中于兩個(gè)方面:
1. 低分子量物質(zhì),如氨基酸、有機(jī)酸、有機(jī)胺、類固醇、卟啉、糖類、維生素等的分離和測(cè)定。
2. 高分子量物質(zhì),如多肽、核糖核酸、蛋白質(zhì)和酶(各種胰島素、激素、細(xì)胞色素、干擾素等)的純化、分離和測(cè)定。
過(guò)去對(duì)這些生物大分子的分離主要依賴于等速電泳、經(jīng)典離子交換色譜等技術(shù),但都有一定的局限性,遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足生物化學(xué)研究的需要。因?yàn)樵谏I(lǐng)域中經(jīng)常要求從復(fù)雜的混合物基質(zhì),如培養(yǎng)基、發(fā)酵液、體液、組織中對(duì)感性趣的物質(zhì)進(jìn)行有效而又特異的分離,通常要求檢測(cè)限達(dá)ng級(jí)或pg級(jí),或pmol,fmol,并要求重復(fù)性好、快速、自動(dòng)檢測(cè);制備分離、回收率高且不失活。在這些方面,HPLC具有明顯的優(yōu)勢(shì)。
四. 在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用
體液中代謝物測(cè)定;藥代動(dòng)力學(xué)研究;臨床藥物監(jiān)測(cè):
1. 合成藥物:抗生素、抗憂郁藥物(冬眠靈、氯丙咪嗪、安定、利眠寧、****等)、黃胺類藥等。
2. 天然藥物生物堿(吲哚堿、顛茄堿、**堿、強(qiáng)心甙)等
五.在無(wú)機(jī)分析中的應(yīng)用
陽(yáng)、陰離子的分析等。