紫外吸收檢測器 ultraviolet absorption detector
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反相液相色譜柱具有無與倫比的性能。即使對于非常難分離的堿性化合物,也可獲得出色的峰形,從而改善了這些類型的樣品的柱效和分離度。
反相液相色譜柱使用中的注意事項
1、新C18柱在使用前,須先用甲醇或乙腈試劑以20倍柱體積低流速沖洗,作用是使固定相能充分潤濕、碳鏈舒展徹底,使反相液相色譜柱的性能達到更好狀態(tài)。
具體操作是,將配制好65%的乙腈/水沖洗后,把色譜柱進口端連接在色譜儀上,出口端放空(不可連上檢測器,以免污染了檢測器),以0.1ml/min~0.5ml/min的低流速將色譜柱中的清稀溶液吹干,過20分鐘后再接上檢測器,以1.0ml/min的流速,繼續(xù)沖洗2~8小時;
2、液相色譜儀檢測分析樣品完畢后,須沖洗色譜柱。尤其是流動相中含有酸或鹽時,需將色譜柱中的酸或鹽沖洗干凈,通常建議用10%甲醇水沖洗20倍柱體積;
3、若反相液相色譜柱處于長期閑置狀態(tài)時,要將色譜柱徹底沖洗,建議沖洗3-4小時以上,保存在純有機試劑或高比例的有機試劑溶液中;
4、由于C18柱的固定相疏水性較強,在使用過程中盡量不要使用高水相條件,若水相比例過高易引起固定相疏水塌陷,引起柱效迅速下降,甚至造成不可逆的負面影響;由于碳載量高,表現(xiàn)尤為明顯,建議使用過程中水相比例不超過90%;
5、壓力升高、柱性能下降:通常為色譜柱被污染,對色譜柱進行再生處理可恢復部分柱效;
6、壓力驟升:通常由鹽析出或篩板堵塞引起,若是鹽析出,用10%甲醇水低流速沖洗至壓力恢復即可;若判斷并非鹽析出,以純甲醇或10%甲醇水為流動相反沖色譜柱(將色譜柱反接,不接檢測器),若反沖半小時仍無效果則說明反沖無效,需尋找其他原因。
在硅膠制造和鍵合技術方面進行了改進,因此能夠獲得這樣優(yōu)異的性能,并且這些技術完全由控制。
色譜柱是化學實驗中常見、常用的化工儀器之一,正確而有效的使用方法,不僅能夠延長色譜柱的使用壽命,也能確保試驗的準確性。
1、“保護柱”的使用
保護柱是很短的色譜柱,填裝和液相色譜柱相同的填料。正確使用”保護柱”,可以起到阻攔一些容易損壞液相色譜柱的物質的作用。從而達到延長柱子壽命的效果。相反,如果使用”保護柱”不當,可能會縮短色譜柱的使用壽命。例如,在保護柱使用過程中,如果污染達到一定程度而沒有及時更換,累積的雜物很可能會沖入色譜柱中,反而會造成色譜柱損壞。因此,在使用”保護柱”時,重要的是要知道什幺時候該換保護柱。該換的時候就必須要立即更換。
2、選擇高品質的柱子
一般認為同一廠牌、同一型號的柱子之間的品質都相同,對品質管理很嚴格的廠家而言,這說法是成立的。但如果廠家品質管理不夠嚴格,即使是同一批號的新柱子之間的品質也有差異。所以,選用柱子時必須選擇管理嚴格的高品質柱子,我們知道,任何柱子使用過后都會產生變化。尤其如在強酸或強堿條件下使用,柱子更易產生變化。因此,應盡量選用pH適用范圍大的柱子。在開發(fā)新分析方法時,許多專家建議不要使用舊柱子。因柱子一經使用。柱性會改變;如此一來,使用舊柱子開發(fā)出來的新分析方法,很可能在再使用同廠牌的新柱子分析時。發(fā)生無法達到預定效果的情況。總的說。開發(fā)新分析方法時要使用品質好的新柱子;并且一支柱子可以使用在一種分析方法上;則柱子壽命可以延長。
3、定期沖洗色譜柱
一般柱子使用一段時間后總會有一些雜質累積在柱內,而且這些雜質不會隨著流動相出來,會逐漸影響柱子的品質。這些雜質在后來的分析譜圖上出現(xiàn)。從而造成出現(xiàn)怪峰、基線不平等現(xiàn)象。簡單的解決方法是用較強的流動相沖洗。而且每次分析某一產品完成后沖洗。如果分析時使用緩沖劑﹐可以用水來取代緩沖劑。先使用有機和水的混合溶液為流動相沖洗緩沖劑。接著再用100%有機溶劑沖洗。如果直接用100%有機溶劑沖洗的話,緩沖劑很可能會沉淀出來,而損壞柱子的品質。使用10-20倍柱體積的量來沖洗基本就足夠了??梢詫?00%有機溶劑沖洗的條件加在分析實驗程序完畢后,如此一來每天在開機前都會用100%機溶劑沖洗。一般硅膠柱可以反沖洗處理﹐即是在將沖洗前將柱子倒反接后再沖洗。打算使用反沖洗處理前,可以先參考柱子的保養(yǎng)說明書。所以要真正保護柱子,使柱子的壽命延長,可以是使用”保護柱”和定期沖洗柱子。
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