1、液相色譜柱的結(jié)構(gòu)：
a、空柱由柱接頭、柱管及濾片組裝而成。
柱接頭采用低死體積結(jié)構(gòu)，柱接頭是兩端螺紋組件，一端是為7/16英寸外螺紋，另一端是3/16英寸的內(nèi)螺紋(國內(nèi)外已規(guī)范化)。7/16英寸外螺紋與1/4英寸柱管(Φ6.35mm)連接，中間放置壓壞用于密封。3/16英寸的內(nèi)螺紋與1/16英寸(Φ1.57mm)的連接管連接，中間也放置壓環(huán)用于柱接頭的密封。為了盡量減少柱外死體積，在安裝色譜柱時，用Φ1.57mm連接管通過空心螺釘壓環(huán)后要盡量插到底，然后再擰緊空心螺釘。壓環(huán)被空心螺釘擠壓變形后緊箍在連接管上(連接管通過壓環(huán)后露出的管長度應(yīng)嚴(yán)格控制在2.5mm長或其他固定尺寸)。
在兩端柱接頭內(nèi)，柱管兩端各放置一片不銹鋼濾片(或濾網(wǎng))，用于封堵柱填料不被流動相沖出柱外而流失?？罩鹘M件均為316#不銹鋼材質(zhì)，能耐受一般的溶劑作用。但由于含氯化物的溶劑對其有一定的腐蝕性，故使用時要注意，柱及連接管內(nèi)不能長時間存留此類溶劑，以避免腐蝕。
b、柱填料：
液相色譜柱的分離作用是在填料與流動相之間進(jìn)行的，柱子的分類是依據(jù)填料類型而定。
正相柱：多以硅膠為柱填料。根據(jù)外型可分為無定型和球型兩種，其顆粒直徑在3—10?m的范圍內(nèi)。另一類正相填料是硅膠表面鍵合—CN，-NH2等官能團(tuán)即所謂的鍵合相硅膠。
反相柱：主要是以硅膠為基質(zhì)，在其表面鍵合十八烷基官能團(tuán)(ODS)的非極性填料。也有無定型和球型之分。
常用的其他的反相填料還有鍵合C8、C4、C2、苯基等，其顆粒粒徑在3—10?m之間。
2、色譜柱的安裝：
a、拆開柱包裝盒，確認(rèn)色譜柱的類型、尺寸、出廠日期以及柱內(nèi)貯存的溶劑。
b、擰下柱兩端接頭的密封堵頭放回包裝盒供備用。
c、按柱管上標(biāo)示的流動相流向，將色譜柱的入口端通過連接管與進(jìn)樣閥出口相連接(如條件允許，建議在柱前使用保護(hù)柱);柱的出口與檢測器連接。連接管是外徑為1.57mm、內(nèi)徑為0.1-0.3mm的不銹鋼管。連接管的兩端均有空心螺釘及密封用壓環(huán)。在接管時一定要設(shè)法降低柱外死體積。連接管通過空心螺釘、壓環(huán)后盡量用力插到底，然后順時針擰緊空心螺釘，直到擰不動為止，再用扳手繼續(xù)順時針擰1/4-1/2圈，切記不要用力過大。如色譜柱通過流動相加壓后有漏液現(xiàn)象，請用扳手繼續(xù)順時針擰1/4圈，直至不漏液為止。
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色譜柱是高效液相色譜儀的重要組成部分，在色譜儀分析系統(tǒng)中起著分離作用，是色譜分析的核心部件，對高效液相色譜柱的正確使用不僅能延長色譜柱的使用壽命，還能有效保證實驗結(jié)果。
以下簡單介紹液相色譜柱
在使用過程中應(yīng)當(dāng)注意的問題
01
性能測試
新色譜柱使用前，應(yīng)進(jìn)行柱的性能測試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評價柱性能變化的參考依據(jù) (柱性能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異有所不同，在測試中需保證方法一致性）。
02
流動相的配制
液相色譜是通過樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此要求流動相具備以下的特點：
流動相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會沉淀在柱中（或長時間保留在柱中）。
流動相具有一定惰性，與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)。
流動相的黏度要盡量小，以便在使用較長的分析柱時既能得到好的分離效果，同時又降低柱壓，延長柱子的使用壽命（可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度）。
流動相的物化性質(zhì)與使用的檢測器相適應(yīng)。
流動相沸點不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實驗無法進(jìn)行。
流動相配制好后，一定要進(jìn)行脫氣，除去溶解在流動相中的微量氣體。
03
新色譜柱使用前沖洗步驟
1、首先查看色譜柱的說明書，注意色譜柱封存的溶劑、推薦流速、pH值、耐受柱壓、及使用溫度等信息。
2、如分析使用的流動相與色譜柱內(nèi)儲存的溶劑混溶，可以直接使用流動相參照色譜柱說明書中推薦的流速、溫度等條件沖洗色譜柱20倍柱體積以上。如果分析條件使用的流動相與色譜柱內(nèi)儲存的溶劑不混溶，請選擇與色譜柱內(nèi)儲存溶劑和流動相都混溶的溶劑，作為置換溶劑，逐步置換到分析使用的流動相。每次置換均應(yīng)沖洗色譜柱20倍柱體積以上。
04
日常使用注意事項
1、請使用HPLC級別以上的試劑作為流動相。
2、流動相要用0.45um孔徑以下的微孔濾膜濾過。
3、流動相的pH值不能超出色譜柱的適用范圍。
4、注意流動相的流動方向要與色譜柱標(biāo)識的方向一致。
5、容易滋生微生物的流動相不要存放過久，要及時換新，以免微生物滋生污染色譜柱。
6、色譜柱分析結(jié)束后要及時徹底沖洗。
7、長時間不用的色譜柱要將流動相置換為色譜柱保存的溶劑，并兩端用堵頭封死保存。
8、色譜柱要避免劇烈碰撞、跌落等。
05
流動相流速的選擇
因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù)，使用不用的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱，要追求較佳柱效，應(yīng)使用zui佳流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1mL/min，對于內(nèi)徑4.0mm柱，流速0.8mL/min為更佳。當(dāng)選用zui佳流速時，分析時間可能延長。可采用改變流動相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分析時間（如使用反相柱時，可適當(dāng)增加有機(jī)試劑甲醇或乙腈的含量）。
液相色譜柱在色譜分析中起著至關(guān)重要的角色，是樣品分離的核心，正確使用色譜柱才能達(dá)到更好的理想的分離效果，提高色譜柱的使用壽命。
島津液相色譜儀LC-40
融合“AI”與”loT”尖端技術(shù)的液相色譜儀
診斷精靈＆修復(fù)精靈
智能判斷流動相中氣泡的存在，主動排氣，自動重啟分析序列
流速控制精靈
智能流量控制，流速逐漸增加至柱溫設(shè)定值，保護(hù)色譜柱
流動相精靈
儲液盤內(nèi)置傳感器，實時監(jiān)測流動相剩余量
溶劑配置精靈
自動以任意比例混合流動相，方便、準(zhǔn)確地制備出分析所需流動相
倉溫管控精靈
空氣循環(huán)制冷控溫模塊，防止熱空氣進(jìn)入樣品倉形成冷凝水
譜峰解析精靈
zui小肩縫提取，共流出峰切割，線性范圍拓展
液相色譜法是分析化學(xué)中發(fā)展較快、應(yīng)用廣泛的一種分析方法，特別是高效液相色譜儀已經(jīng)成為生命科學(xué)、材料科學(xué)、環(huán)境科學(xué)等方面必不可少的重要檢測方法?，F(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的發(fā)展使得分析對象越來越復(fù)雜，分析要求越來越高，液相色譜的強(qiáng)大功能使其成為新世紀(jì)中解決生命科學(xué)、材料科學(xué)、環(huán)境科學(xué)等復(fù)雜體系發(fā)現(xiàn)難題的比較為有力的技術(shù)和方法。
高效液相色譜儀是在經(jīng)典液相色譜的基礎(chǔ)上，引入氣相色譜的理論和技術(shù)而發(fā)展起來的。在高效液相色譜中，流動相與組分之間有一定的親和力，分離過程的實現(xiàn)是組分、流動相和固定相三者間相互作用的結(jié)果，分離不但取決于組分和固定相的性質(zhì)，還與流動相的性質(zhì)密切相關(guān)，一般情況下，高效液相色譜儀的分析可在室溫下進(jìn)行，由于采用顆粒極細(xì)的固定相，柱內(nèi)壓降很大，加上流動相黏度高，因此必須采用高入口壓，以此來維持一定的流動相線速。高效液相色譜儀對于揮發(fā)性低、熱穩(wěn)定性差、分子量大的物質(zhì)特別有利，它在醫(yī)藥、生化等方面具有非常重要的作用。
色譜柱的常見問題：
1.色譜柱污染：
目前,基層實驗室多采用反相色譜柱,要減少色譜柱的污染比較為有效的辦法是要純化樣品。凡是樣品純化得越干凈,色譜柱的壽命就越長;反之,只有提取沒有純化的樣品,色譜柱柱效就會大幅下降。一般來說,要提取純化好的樣品,可以的方法是用流動相溶解樣品,這樣,一方面能減少色譜圖中的溶劑峰干擾,另一方面也能檢查樣品在流動相中的溶解性。如果樣品進(jìn)樣后在流動相中沉淀,會堵塞進(jìn)樣器和柱頭,甚至樣品分解,出現(xiàn)鬼峰。如果出現(xiàn)樣品與流動相不溶要設(shè)法改變?nèi)芙鈼l件,可更換樣品溶劑,或改進(jìn)樣品純化處理的方法,或濾過去除不溶性物質(zhì)。
2.色譜柱阻塞與對策
如果配有保護(hù)柱,應(yīng)先去掉保護(hù)柱進(jìn)行分析。如果色譜柱阻塞,可進(jìn)行反沖洗。如果問題仍然存在,色譜柱可能被強(qiáng)保留的污染物損壞,建議使用恰當(dāng)?shù)脑偕绦?。如果問題仍然存在,可能是進(jìn)口阻塞,更換入口處的篩板或更換色譜柱。如果必要,亦可更換色譜柱。
3.嚴(yán)格清場
清洗的過程是延長色譜柱壽命的關(guān)鍵,每次分析工作結(jié)束時,要做好清場工作。如果流動相是緩沖鹽,先用5%甲醇水沖洗30 min以上；如果流動相是離子對,先用50%甲醇水沖洗30 min以上；如果流動相是酸性溶劑,先用純水沖洗30 min以上,流速0.5 mL#min-1,最后過度到用色譜甲醇沖洗色譜柱,目的是沖去吸附在柱上的強(qiáng)保留組分。如果用甲醇-水為流動相也應(yīng)這樣沖洗色譜柱,在一定程度上可恢復(fù)柱效。
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