系統(tǒng)一般由輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、數(shù)據(jù)記錄及處理裝置等組成。
其中輸液泵、色譜柱、檢測器是關(guān)鍵部位。有的儀器還有梯度洗脫裝置、在線脫氣機(jī)、自動進(jìn)樣器、與柱或保護(hù)住、柱溫控制器等，現(xiàn)代HPLC儀還有微機(jī)控制系統(tǒng)，進(jìn)行自動化儀器控制和數(shù)據(jù)處理。
下面就介紹下高效液相色譜使用中的幾個重要環(huán)節(jié)吧。
實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作
1.過濾流動相。為了保證流動相潔凈，流動相使用前都必須微膜過濾。
2.流動相脫氣。為了避免流動相中氣泡對儀器（氣泡可能會對儀器及相關(guān)設(shè)備的正常使用及壽命產(chǎn)生一定影響）及分析結(jié)果的影響。
3.運(yùn)行液相泵前盡量先清洗泵柱塞部件。清洗液一般采用10%甲醇溶液，也有采用10%異丙醇溶液
（5%甲醇或異丙醇等有機(jī)相溶液能避免微生物污染，但濃度不能太高，高于20%緩沖液可能會導(dǎo)致鹽結(jié)晶析出，碰到酸堿類物質(zhì)可能會有比較強(qiáng)烈的反應(yīng)；另外異丙醇粘度較大，清洗能力較強(qiáng)；也有采用純水清洗的，這樣如果儀器每天使用還行，如果長期不用，為了防止微生物繁殖，純水還得用含有有機(jī)相的清洗液置換出去）
沖洗，這是為了保護(hù)泵柱塞和密封圈等部件在泵運(yùn)行時不被結(jié)晶鹽等磨損而導(dǎo)致泵頭漏液。
4.每天運(yùn)行儀器前先排氣。一般的液相色譜儀都有排氣功能，沒有的可以不接色譜柱開機(jī)運(yùn)行幾分鐘排氣。
5.泵運(yùn)行時盡量不采用大流量模式（主要是換流動相或排氣泡等，流量盡量設(shè)為3.0ml/min以內(nèi)，這樣更有利于保護(hù)泵柱塞桿和密封圈等部件的壽命）。
6.分析前先對色譜系統(tǒng)（整個流路）進(jìn)行沖洗及平衡，尤其是色譜柱。先用純甲醇沖洗30分鐘，再換10%甲醇水溶液沖洗30分鐘，最后換含緩沖鹽或酸堿類物質(zhì)的流動相平衡30分鐘。色譜柱如果長期沒用，每一步?jīng)_洗、平衡量盡量為色譜柱柱容量20倍以上）。
如果流動相中不含緩沖鹽或酸堿類物質(zhì)，純甲醇沖洗完可直接換為流動相。使用色譜柱前知道或懷疑色譜柱中殘留有或酸堿鹽類物質(zhì)，在用純甲醇沖洗前增加一步10%甲醇水溶液沖洗。
7.如果色譜柱需要控溫（升溫），要先運(yùn)行泵后再設(shè)柱溫箱溫度。
8.待儀器運(yùn)行穩(wěn)定后（基線基本走平后，這個是經(jīng)驗(yàn)值），方可進(jìn)樣。
樣品前處理
1.樣品濃度不要太大，雜質(zhì)不要太多，否則色譜柱處理起來壓力很大。
2.進(jìn)樣前樣品一定得先經(jīng)微膜（一般采用0.22um或0.45um微膜）過濾。
實(shí)驗(yàn)過程中注意事項(xiàng)
1.為了避免進(jìn)樣器殘留影響，進(jìn)樣前先對進(jìn)樣器進(jìn)行清洗（這個不是必須的，但盡量是每進(jìn)一針樣品或標(biāo)準(zhǔn)品前都清洗進(jìn)樣器和進(jìn)樣針，當(dāng)然同一樣品也可以不洗，不同樣品盡量洗），清洗順序?yàn)榧兯?、甲醇、流動相?/p>
2.每進(jìn)一針樣品后要對系統(tǒng)進(jìn)行一次沖洗、平衡后再進(jìn)下一針樣品（等度要求不高，梯度要求相對高，主要是沖洗色譜柱中殘留的強(qiáng)保留物質(zhì)）。
實(shí)驗(yàn)完畢的后續(xù)工作
1.做完樣要先清洗進(jìn)樣器，清洗順序?yàn)榧兯?、甲醇?/p>
2.關(guān)閉柱溫箱溫度設(shè)置。
3.沖洗色譜系統(tǒng)及色譜柱。先用10%甲醇水溶液沖洗30分鐘后換為純甲醇沖洗30分鐘，待基線基本走平停泵。如果流動相中不含緩沖鹽或酸堿類物質(zhì)，沖洗時流動相可直接換為純甲醇。色譜柱用完后如果長時間內(nèi)不會再用，純甲醇沖洗量要大于色譜柱柱容量20倍以上的，沖洗后卸下，兩端密封保存。
4.待色譜柱溫度降至接近于室溫時再停泵、關(guān)機(jī)（這一點(diǎn)需特別注意，目的是防止溫度過高損壞色譜柱）。
5.關(guān)機(jī)前用清洗液清洗柱塞桿。
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一臺品質(zhì)優(yōu)良的液相色譜系統(tǒng)應(yīng)從以下幾個方面考慮：
一．主要技術(shù)指標(biāo)優(yōu)異：
首先是如何看指標(biāo)。液相色譜儀的指標(biāo)很多，有泵的、檢測器的、色譜柱等等。我們認(rèn)為要看主要技術(shù)指標(biāo)，根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)，儀器的主要指標(biāo)有噪音，漂移，最小檢測濃度，定性定量重復(fù)性等。這些指標(biāo)都要放在系統(tǒng)，回路里去看，去比較。就是需要把各單元裝置都要聯(lián)接好，如接好色譜柱，進(jìn)樣閥，并且要通上流動相。因?yàn)槟诜治鲋幸捕际锹?lián)接好以后才可以進(jìn)行分析的，而不是單單用個檢測器或是泵的。
然后在這個基礎(chǔ)上，我們再去比較這些主要指標(biāo)。
1．噪音
是指由儀器的電器元件、溫度波動、電壓的線性脈沖以及其他非溶質(zhì)作用產(chǎn)生的高頻噪聲和基線的無規(guī)則波動。噪音的大小直接關(guān)系到儀器的檢測靈敏度，噪音越大，檢測的靈敏度就越低。對于檢測低含量的樣品就要求儀器的噪音越小越好，否則噪音過大將會導(dǎo)致基線不穩(wěn)，甚至影響分析結(jié)果。
2．最小檢測濃度（最小檢測限）
是反映儀器靈敏度的重要參數(shù)。CL=2×Nd×C/H（CL ：最小檢測濃度 Nd:噪音 C：樣品濃度最小檢測濃度 H：樣品峰高）由上式可見，最小檢測濃度是和噪音成正比的，噪音越大，最小檢測濃度就越大，靈敏度就越低。某些廠家回避了這個指標(biāo)，說明他們不愿在最小檢測濃度的基礎(chǔ)上去比較噪音。
3．漂移
是指儀器穩(wěn)定后一段時間內(nèi)基線漂離原點(diǎn)的距離，通常用來衡量儀器穩(wěn)定快慢。高品質(zhì)的儀器能在較短的時間內(nèi)達(dá)到穩(wěn)定，從而在一定程度上提高了分析效率。
4．定性定量重復(fù)性
主要是考核儀器穩(wěn)定性的指標(biāo)，這對于分析樣品來說是非常重要的。好的儀器其穩(wěn)定性應(yīng)該是十分優(yōu)秀的，這就要求多次進(jìn)樣保留時間及含量的一致性，這樣做出來的結(jié)果才能使人信服。
有的朋友會認(rèn)為這些指標(biāo)好像都是檢測器的。對的，但是就前面所說條件是要放在整個回路和系統(tǒng)里去看去比較。例如：泵的脈動會直接影響噪音指標(biāo)，泵的流量準(zhǔn)確度、精確度指標(biāo)，以及密封性不好也會影響相關(guān)指標(biāo)。所以要系統(tǒng)地看指標(biāo)。例如：某些公司在公布的指標(biāo)中，噪音和漂移指標(biāo)寫的條件是空池或有的干脆不寫。這個指標(biāo)只考核了UV檢測器光學(xué)和電氣的特性，與實(shí)際情況相差甚遠(yuǎn)，并沒有考驗(yàn)泵的壓力脈動，液流回路的阻尼和UV檢測器流通池的性能。所以我們認(rèn)為從以上的主要指標(biāo)中可以反應(yīng)出儀器的一些真實(shí)水平。
二．操作方便：
操作方便性無論是對新手還是成熟的用戶都是很重要的。操作越簡單，有利于提高分析效率，也為以后分析方法的拓展提供有力的幫助。上海伍豐科學(xué)儀器有限公司的WS-100工作站軟件實(shí)現(xiàn)了真正的智能化操作。它摒棄了以往工作站軟件只能起到數(shù)據(jù)處理的理念，率先在國內(nèi)推出了集控制與后處理于一身的軟件，在操作使用上給用戶帶來了極大的方便。
三．系統(tǒng)的，整體開發(fā)
這里指的是儀器的整體開發(fā)，是一個完整的系統(tǒng)。目前市場上有這個現(xiàn)象，說我的泵是進(jìn)口的，或者是檢測器怎么好，用了什么很多的進(jìn)口件組裝等等。其實(shí)這是個誤區(qū)。液相色譜是個復(fù)雜的系統(tǒng)，不是整體開發(fā)的，各項(xiàng)指標(biāo)之間、軟件和硬件、硬件和硬件等都不匹配，整體水平不會高到哪里去，而且在售后服務(wù)方面對用戶也是不負(fù)責(zé)任的。
整體開發(fā)的主要優(yōu)點(diǎn)有：各項(xiàng)技術(shù)指標(biāo)統(tǒng)一、儀器各單元的通信協(xié)調(diào)、能夠建立一個整體的數(shù)字化評價系統(tǒng)、體現(xiàn)了企業(yè)的科技及開發(fā)實(shí)力。
國外知名的儀器生產(chǎn)廠家的產(chǎn)品也是整體開發(fā)的，所以能夠保證儀器的整體水平。
四．穩(wěn)定可靠，故障率低
從以上各方面比較，LC-100智能液相色譜系統(tǒng)完全符合一臺優(yōu)秀儀器的所有特點(diǎn)，代表了目前國產(chǎn)液相色譜的真正水平。
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在線脫氣機(jī)接于HPLC的流動相存儲液瓶與高壓恒流泵之間。流動相經(jīng)由在線脫氣機(jī)的入口進(jìn)入脫氣機(jī)中，在獨(dú)立的單元真空泵腔內(nèi)，通過預(yù)先設(shè)定的真空度，真空泵連續(xù)低速運(yùn)行，HPLC流動相在泵的作用下流經(jīng)真空腔內(nèi)一段很短的Teflon® AF脫氣膜管，按照Henry’s定律，在真空作用下，溶劑中溶解的氣體通過管壁排出。配了在線脫氣機(jī)的液相色譜儀再不需要人工超聲脫氣或氦氣脫氣。下面我們來了解一下在線脫氣機(jī)。 問：流行品牌液相色譜儀的在線脫氣機(jī)有何特點(diǎn) 答：目前大流行品牌的在線脫氣機(jī)很大部分是使用了TeflonAF脫氣管技術(shù)。有的流行品牌提供TeflonAF技術(shù)脫氣機(jī)和其他類型脫氣機(jī)供用戶選擇，因?yàn)閮r格有不同。 問：如何判別是TeflonAF技術(shù)脫氣機(jī)。 由于TeflonAF技術(shù)脫氣效率非常高，TeflonAF脫氣管路體積很小，僅有不到每路500ul。而普通脫氣機(jī)的管路每路有12ml。相差巨大。檢查儀器性能指標(biāo)中都有標(biāo)示這個指標(biāo)。 問：液相色譜儀一般配原廠的在線脫氣機(jī)，還是說可以配其他品牌的脫氣機(jī)？ 答：如果原廠配的是TeflonAF的在線脫氣機(jī)，那么脫氣效果會很好。但有一個問題是流行品牌液相色譜儀廠家把維修零配件的價格定的太高，難以接受。例如：真空泵，脫氣盒，在發(fā)生故障時需要更換。這些配件少則5千，多則萬元，難以接受。而Easeatech在線脫氣機(jī)的真空泵和脫氣盒的價格要低的多。并且都是原裝進(jìn)口，性能和壽命都非常高。由于在線脫氣機(jī)是獨(dú)立的，Easeatech在線脫氣機(jī)可配所有品牌的液相色譜儀，例如Waters，安捷倫，島津，戴安。所以新購置一臺液相色譜儀，配原廠的脫氣機(jī)不一定是的選擇。配Easeatech在線脫氣機(jī)更合適。 問：用氦氣脫氣的四元液相色譜儀是否需要配在線脫氣機(jī)？ 答：氦氣脫氣也不錯。就是用完后還要重新買氦氣，很麻煩。如果有經(jīng)費(fèi)，還是購一臺在Easeatech線脫氣機(jī)。 問：二元雙泵液相色譜儀是否要配在線脫氣機(jī)？ 答：二元液相色譜儀屬于高壓混合類型。要求不高時可以不配在線脫氣機(jī)，但實(shí)驗(yàn)前要用超聲脫氣機(jī)脫氣。脫氣后的流動相才能倒入流動相瓶中使用。有些麻煩。在要求高的情況下，例如：1）流動相的配比大約相等，如有機(jī)相（甲醇）：水是50:50，或60:40等，這時氣體產(chǎn)生較多，壓力會波動較大。2）基線噪音影響到實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，要求更低的基線噪音。在這些情況下排除了泵和檢測器本身故障，解決的辦法就是配Easeatech在線脫氣機(jī)。 問：液相色譜儀的脫氣機(jī)出現(xiàn)故障，需要更換脫氣盒，如何處理呢？ 答：由于原裝脫氣盒價格被定的太高，更換費(fèi)用太高。因次建議購買Easeatech在線脫氣機(jī)。一勞永逸的解決這個問題。如果是Waters液相色譜儀，也可以用Easeatech的脫氣盒代替原裝的，價格要低很多。安裝沒有任何問題。因?yàn)榻涌诤托螤疃纪耆粯印?/span>
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