分光光度計(jì)屬于精密儀器,應(yīng)當(dāng)妥善保管和精心維護(hù),這樣才能保證分光光度計(jì)長(zhǎng)期使用、長(zhǎng)期的穩(wěn)定可靠、測(cè)量精度高。
分光光度計(jì)使用注意事項(xiàng)
1. 使用儀器前,使用者應(yīng)該首先了解本儀器的結(jié)構(gòu)和工作原理,以及各個(gè)操縱旋鈕之功能。在未按通電源之前,應(yīng)該對(duì)儀器的安全性能進(jìn)行檢查。
2. 指針式儀器尚未接通電源時(shí),電表指針必須位于零刻度上,若不是這種情況,則可以用電表上的校正螺絲進(jìn)行調(diào)零。
3. 儀器在制造廠原包裝條件下,應(yīng)儲(chǔ)存在環(huán)境溫度為5℃~35℃,濕度不超過(guò)85%的室內(nèi),且在空氣中不應(yīng)有足以引起腐蝕的有害物質(zhì)。
4. 儀器工作環(huán)境應(yīng)在在干燥的房間內(nèi),使用時(shí)放置在堅(jiān)固平穩(wěn)的工作臺(tái)上,室內(nèi)照明不宜太強(qiáng)。
5. 比色皿使用完畢后,請(qǐng)立即用蒸餾水沖洗干凈,并用干凈柔軟的紗布將水跡擦去,以防止表面光潔度被破壞,影響比色皿的透光率。
6. 比色杯的配套性問(wèn)題。比色杯必須配套使用,否則將使測(cè)試結(jié)果失去意義。
7. 鑒于儀器在出廠之前已經(jīng)調(diào)試到較佳狀態(tài),所以用戶不能擅自調(diào)整,更不能擅自打開(kāi)機(jī)殼拆卸其中的零件(更換光源燈除外),尤其是拆卸單色器、不能碰傷或擦拭光學(xué)原件鏡面。
8. 如有故障急需自修,應(yīng)在廠方技術(shù)人員同意指導(dǎo)下,請(qǐng)具有相應(yīng)資質(zhì)的專業(yè)人員進(jìn)行檢查、調(diào)整和維修,建議返修。
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與傳統(tǒng)分光光度計(jì)相比,超微量分光光度計(jì)要求的樣品體積小,不需要比色皿,比色杯清洗方便,只需用干凈的吸水紙將樣品從檢測(cè)平臺(tái)上擦拭干凈即可。除此之外,實(shí)驗(yàn)過(guò)程也更為簡(jiǎn)單,不需預(yù)熱,可隨時(shí)檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果顯示吸光度值的同時(shí),程序直接給出濃度值。超微量分光光度計(jì)與傳統(tǒng)相比,體積更小,更方便使用。
實(shí)驗(yàn)室如何選擇一款性價(jià)比高、質(zhì)量可靠的超微量分光光度計(jì),下面幾項(xiàng)指標(biāo)可以作為參考:
1、使用要求和預(yù)算:固定波長(zhǎng)的價(jià)值量較低幾萬(wàn)塊錢,可以做全波長(zhǎng)掃描的價(jià)值量高,一般在6萬(wàn)以上。如果僅要求可以測(cè)核酸、蛋白,可以選擇固定波長(zhǎng)的。
2、檢測(cè)濃度范圍:根據(jù)日常提取樣品的濃度,范圍大的會(huì)檢測(cè)到15000ng/ul,范圍小的會(huì)在3000ng/ul。
3、光源:LED光源或者氙燈光源,
4、品牌:進(jìn)口或者國(guó)產(chǎn)。國(guó)產(chǎn)品牌的價(jià)位一般在3-5萬(wàn),進(jìn)口品牌的價(jià)位一般在4-10萬(wàn)。對(duì)產(chǎn)品品牌要求高的,預(yù)算比較充足的用戶,可以考慮購(gòu)買進(jìn)口品牌的;國(guó)產(chǎn)品牌的性價(jià)比高,技術(shù)水平也能達(dá)到國(guó)外的先進(jìn)水平。
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【紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)工作原理】
分子的紫外可見(jiàn)吸收光譜是由于分子中的某些基團(tuán)吸收了紫外可見(jiàn)輻射光后,發(fā)生了電子能級(jí)躍遷而產(chǎn)生的吸收光譜。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu),其吸收光能量的情況也就不會(huì)相同,因此,每種物質(zhì)就有其特有的、固定的吸收光譜曲線,可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長(zhǎng)處的吸光度的高低判別或測(cè)定該物質(zhì)的含量,這就是分光光度定性和定量分析的基礎(chǔ)。
分光光度分析就是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。它是帶狀光譜,反映了分子中某些基團(tuán)的信息??梢杂脴?biāo)準(zhǔn)光圖譜再結(jié)合其它手段進(jìn)行定性分析。
根據(jù)Lambert-Beer定律說(shuō)明光的吸收與吸收層厚度成正比,比耳定律說(shuō)明光的吸收與溶液濃度成正比;如果同時(shí)考慮吸收層厚度和溶液濃度對(duì)光吸收率的影響,即得朗伯-比耳定律。即A=εbc,(A為吸光度,ε為摩爾吸光系數(shù),b為液池厚度,c為溶液濃度)就可以對(duì)溶液進(jìn)行定量分析。
將分析樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣品以相同濃度配制在同一溶劑中,在同一條件下分別測(cè)定紫外可見(jiàn)吸收光譜。若兩者是同一物質(zhì),則兩者的光譜圖應(yīng)完全一致。如果沒(méi)有標(biāo)樣,也可以和現(xiàn)成的標(biāo)準(zhǔn)譜圖對(duì)照進(jìn)行比較。這種方法要求儀器準(zhǔn)確,精密度高,且測(cè)定條件要相同。
實(shí)驗(yàn)證明,不同的極性溶劑產(chǎn)生氫鍵的強(qiáng)度也不同,這可以利用紫外光譜來(lái)判斷化合物在不同溶劑中氫鍵強(qiáng)度,以確定選擇哪一種溶劑。