薄層色譜又叫薄板層析,是色譜法中的一種,是快速分離和定性分析少量物質(zhì)的一種很重要的實(shí)驗(yàn)技術(shù),屬固—液吸附色譜;
它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點(diǎn),一方面適用于少量樣品(幾到幾微克,甚至0.01微克)的分離;另一方面在制作薄層板時(shí),把吸附層加厚加大;
因此,又可用來(lái)精制樣品,此法特別適用于揮發(fā)性較小或較高溫度易發(fā)生變化而不能用氣相色譜分析的質(zhì)。
此外,薄層色譜法還可用來(lái)跟蹤有機(jī)反應(yīng)及進(jìn)行柱色譜之前的一種“預(yù)試”。
薄層色譜是在被洗滌干凈的玻板(10×3cm左右)上均勻的涂一層吸附劑或支持劑,帶干燥、活化后將樣品溶液用管口平整的毛細(xì)管滴加于離薄層板一端約1cm處的起點(diǎn)線上;
涼干或吹干后置薄層板于盛有展開劑的展開槽內(nèi),浸入深度為0.5cm。待展開劑前沿離頂端約1cm附近時(shí);
將色譜板取出,干燥后噴以顯色劑,或在紫外燈下顯色。
薄層色譜(Thin Layer Chromatography)常用TLC表示,又稱薄層層析,屬于固-液吸附色譜。
是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種微量、快速而簡(jiǎn)單的色譜法,它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點(diǎn)。
一方面適用于小量樣品(幾到幾十微克,甚至0.01μg)的分離;
另一方面若在制作薄層板時(shí),把吸附層加厚,將樣品點(diǎn)成一條線,則可分離多達(dá)500mg的樣品。
因此又可用來(lái)精制樣品。故此法特別適用于揮發(fā)性較小或在較高溫度易發(fā)生變化而不能用氣相色譜分析的物資。
此外,在進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)時(shí),常利用薄層色譜觀察原料斑點(diǎn)的逐步消失來(lái)判斷反應(yīng)是否完成。
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等電聚焦電泳色譜儀是利用蛋白質(zhì)分子或其它兩性分子的等電點(diǎn)不同,在一個(gè)穩(wěn)定、連續(xù)和線性的pH梯度中進(jìn)行分離,檢測(cè)方法有染色法、掃描法和其它檢測(cè)方法。
一、染色法:
1、考馬斯亮藍(lán)染色法。
2、銀染色法。
3、同工酶染色法。
4、專一蛋白染色法。
5、熒光標(biāo)記以及免疫法。
二、掃描法:
激光光源強(qiáng)度大,單色性好,掃描IEFE區(qū)帶比較合適。
操作程序和條件必須嚴(yán)格相同。
三、其它檢測(cè)方法:
1、電泳轉(zhuǎn)移法。
2、雙向電泳法。
3、滴定曲線分析法。
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氣路管路、進(jìn)樣器、注射器的清洗
注射器使用前可先用丙酮清洗,以免玷污樣品,但可以還是用待注射樣品對(duì)注射器本身做一二次清洗。清洗時(shí)只能吸入樣品,排出樣品時(shí)要在樣品瓶之外。注射器在使用結(jié)束后要立即清洗,以免被樣品中的高沸點(diǎn)物質(zhì)玷污。一般常用下述溶液依次清洗:5%氫氧化鈉水溶液、蒸餾水、丙酮、氯仿,最后用真空泵抽干。 分析測(cè)試百科網(wǎng)樂意為你解答實(shí)驗(yàn)中碰到的各種問題,有問題可找我,百度上搜下就有。
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