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液相色譜進(jìn)樣前分析的幾個問題 液相色譜常見問題解決方法

時間:2020-06-30    來源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     
【導(dǎo)讀】液相色譜進(jìn)樣是很精確的一個過程,關(guān)系分離的效果,所以一定要小心進(jìn)樣,以下是舜星為你分析的進(jìn)樣實驗總結(jié): ?應(yīng)當(dāng)注意以下幾個問題: ?(1)樣品在流動相中可以是可溶的,如果可能的話,應(yīng)當(dāng)用流動相溶解樣

液相色譜進(jìn)樣是很精確的一個過程,關(guān)系分離的效果,所以一定要小心進(jìn)樣,以下是舜星為你分析的進(jìn)樣實驗總結(jié):
?
應(yīng)當(dāng)注意以下幾個問題:
?(1)
樣品在流動相中可以是可溶的,如果可能的話,應(yīng)當(dāng)用流動相溶解樣品,它可使色譜圖中低k’段的虛假峰盡可能減少。

?(2)
選擇合適的進(jìn)樣閥或注射器。一般說來只要選擇適當(dāng),都能獲得很好的重復(fù)性。在選擇進(jìn)樣閥時,要考慮它應(yīng)有較好的清洗條件,并能減少而不是加劇近樣過程中通過柱和檢測器的紊亂狀態(tài)。無論使用進(jìn)樣閻還是注射器,部應(yīng)當(dāng)盡可能地減小結(jié)構(gòu)和死體積。

?(3)
為了位監(jiān)控嚴(yán)密,應(yīng)當(dāng)盡可能地選用一種內(nèi)標(biāo),尤其是在遇到復(fù)雜樣品時,更應(yīng)如此。

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  1、舊

色譜

柱柱效低,分離不好,柱入口床層塌陷



  原因:填料被

流動

相溶蝕而流失。



  解決方法:用同型填料填補(bǔ)柱效可部分恢復(fù)。對硅膠質(zhì)填料,流動相PH值在2—7范圍內(nèi),否則可能被溶蝕。



  2、柱使用—段時間后,柱效下降,出現(xiàn)峰拖尾



  原因:柱入口床層被污染。



  解決方法:用強(qiáng)溶劑沖洗20-30ml,若效果不明顯應(yīng)廢棄。



  3、舊色譜柱柱效低分離不好,有時出現(xiàn)雙峰



  原因:入門填料被污染變質(zhì)所致。



  4、新柱柱效低柱外死體積大



  原因:樣品在流動相中

溶解

不好,影響傳質(zhì)過程。更換連接管,重新連接色譜柱,降低死體積。



  解決方法:使用合適的流動相或使用流動相溶解樣品。




  5、新柱接到儀器上后,柱頭漏液



  原因:柱接頭與儀器之間連接管的壓環(huán)變形量不夠。



  解決方法:用扳手順時針方向擰緊1/4圈直到不漏液為止。



? 6、柱壓升高



  原因:色譜柱入U濾片被流動相或樣品中顆粒堵住。



  樣品組分在濾片上沉淀堵住濾片。



  解決方法:卸下入口接頭的濾片,使用1:1的硝酸溶液超聲清洗5min,再用水、甲醇清洗除去水份。樣品及流動相使用0.45μm濾膜除去微量雜質(zhì)。使用流動相作溶劑配制樣品。





  7、新柱接到儀器上后,檢測器出口不斷有小氣泡出現(xiàn)



  原因:①同上。



  ②流動相脫氣不徹底特別是MeOH/H20體系由于氫鍵作用很容易出現(xiàn)氣泡。



  解決方法:①同上。



 ?、谂浜昧鲃酉嗪笠欢ㄒM(jìn)行脫氣處理。



  8、新柱接到儀器上后,啟動儀器沒有柱壓降



  原因:柱放置時間過長柱內(nèi)充裝的液體己揮發(fā)干。



  解決方法:繼續(xù)開

,用流動相將柱內(nèi)氣體置換掉。




  9、新柱接到儀器上后柱壓降不斷增加,甚至超過儀器的耐壓限



  原因:柱入口濾片被固體顆粒堵塞或被毒菌堵塞。



  解決方法:更換或清洗柱入口濾片;用0.45μm過濾膜過濾流動相除去微小顆粒物。



 


  10、使用—段時間后,柱效下降,分離不好



  原因:①柱填料被流動相溶解而流失。



  ②柱填料被樣品雜質(zhì)污染。



  解決方法:①推薦使用予柱。如柱床層塌陷,用相同型號填料填補(bǔ)。



 ?、谕扑]使用保護(hù)柱或用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱除去污染雜質(zhì)。



  11、柱使用一段時間后,柱效下降出現(xiàn)雙峰



  原因:柱入口床層被污染使柱填料變質(zhì)。



  解決方法:用強(qiáng)溶劑沖洗除去雜質(zhì)。



12、進(jìn)樣次數(shù)增加柱壓降逐漸增加



  原因:①樣品中含有不溶于流動相的微小顆粒物。



  ②樣品在流動相中析出微小結(jié)晶。



  解決方法:①用0.45μm過濾膜過濾樣品。



 ?、谕扑]使用流動相溶解樣品。




  13、使用緩沖液作流動相時,柱壓降升高很快



  原因:霉菌生長所致。



  解決方法:①在流動相中加入有毒物質(zhì)或加疊氯化鈉防止霉菌生長。



 ?、趯嶒灲Y(jié)束后先用純水后用MeOH各沖洗20-30ml后關(guān)機(jī)。

   液相色譜儀可能出現(xiàn)的基本故障有哪些呢?下面給大家列舉了一些可能會出現(xiàn)的故障,希望對各位用戶有所幫助。

  1、柱壓高原因

  (1)緩沖液鹽分如(乙酸銨等)沉積于柱內(nèi);

  (2)樣品污染沉積。處理對于種情況先用40~50℃的純水,低速正向沖洗柱子,待柱壓逐漸下降后,相應(yīng)提高流速沖洗,柱壓大幅度下降后,用常溫純水沖洗,之后用純甲醇沖洗柱子30分鐘;對于第二種情況,由樣品的沉積引起污染的C18柱,和純水反向沖洗柱子,然后換成甲醇沖洗,接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定),再用換成甲醇沖洗,然后用純水沖洗,后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。[1]

  2、氣泡溢出

  流動相內(nèi)有氣泡,關(guān)閉泵,打開泄壓閥,打開purg鍵,清洗脫氣,氣泡不斷從過濾器冒出,進(jìn)入流動相,無論打開purge鍵幾次,都無法清除不斷產(chǎn)生的氣泡。原因過濾器長期沉浸于乙酸銨等緩沖液內(nèi),過濾器內(nèi)部由于霉菌的生長繁殖,形成菌團(tuán),阻塞了過濾器,緩沖液難以流暢地通過過濾器,空氣在泵的壓力作用下經(jīng)過濾器進(jìn)入流動相。處理過濾器浸泡于5%硝酸溶液中,超聲清洗幾分鐘即可;

  亦可將過濾器浸泡于5%硝酸溶液中12~36小時,輕輕震蕩幾次,再將過濾器用純水清洗幾次,打開泄壓閥,打開purge鍵清洗脫氣,如仍有氣泡不斷從過濾器冒出,繼續(xù)將過濾器浸泡于5%硝酸溶液中,如沒有氣泡不斷從過濾器中冒出,說明過濾器內(nèi)部的霉菌菌團(tuán)已被硝酸破壞,流動相可以流暢地通過過濾器。打開泄壓閥,打開泵,流速調(diào)至1.0~3.0ml/min,純水沖洗過濾器1小時左右。即可將過濾器清洗干凈。關(guān)閉泄壓閥,純甲醇沖洗半小時即可。

  3、既無壓力指示,又無液體流過

  (1)泵密封墊圈磨損;

  (2)大量氣泡進(jìn)入泵體。處理對于種情況,更換密封墊圈;對于第二種情況,在泵作用的同時,用一個50ml的玻璃針筒在泵的出口處幫助抽出空氣。

  4、壓力波動大,流量不穩(wěn)定

  原因系統(tǒng)中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物,使得兩者不能密封。處理工作中注意觀察流動相的量,保證不銹鋼濾器沉入儲液器瓶底,避免吸入空氣,流動相要充分脫氣。如為單向閥和閥座之間夾有異物,拆下單向閥,放入盛有丙酮的燒杯用超聲波清洗。

  5、出峰不佳,峰分叉

  (1)色譜柱被污染;

  (2)柱頭填料塌陷。處理對于種情況,先用純水反向沖洗柱子,然后換成甲醇沖洗,接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定),再換成甲醇沖洗,然后用純水沖洗,后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。如沖洗后依然出峰不佳,則考慮第二種情況。

  對于第二種情況,擰開柱頭,檢查柱填料是否硬結(jié)或塌陷。去除硬結(jié)部分(污染的填料),裝入新填料,滴一滴甲醇,填料下陷,再填,用與柱內(nèi)徑相同的頂端平滑的不銹鋼桿壓緊,再填平,滴甲醇,再壓緊反復(fù)幾次,直至裝滿填平。柱頭用甲醇沖洗干凈,擦凈柱外壁的填料,擰緊柱頭,用純甲醇沖洗30分鐘以上。



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