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液相色譜中常用的柱前衍生化方法 液相色譜技術(shù)指標(biāo)

時(shí)間:2020-06-30    來(lái)源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     
【導(dǎo)讀】液相色譜使用較多的是紫外檢測(cè)器,為了使一些沒(méi)有紫外吸收或紫外吸收很弱的化合物能被紫外檢測(cè)器檢測(cè),往往通過(guò)衍生化反應(yīng)在這些化合物的分子中引入有強(qiáng)紫外吸收的



    液相色譜使用較多的是紫外檢測(cè)器,為了使一些沒(méi)有紫外吸收或紫外吸收很弱的化合物能被紫外檢測(cè)器檢測(cè),往往通過(guò)衍生化反應(yīng)在這些化合物的分子中引入有強(qiáng)紫外吸收的基團(tuán):2,4-二硝基苯、苯甲基、對(duì)硝基苯甲基、3,5-二硝基苯甲基、苯甲酸酯、對(duì)甲苯酰、對(duì)氯苯甲酸制、對(duì)硝基苯甲酸酯、對(duì)甲氧基苯甲酸酯、苯甲酰甲基、對(duì)溴苯甲酰甲基,這些衍生物可被紫外檢測(cè)器檢測(cè)。
    大多數(shù)紫外衍生反應(yīng)來(lái)自經(jīng)典的光度分析和有機(jī)定量分析,新的衍生化反應(yīng)和衍生化試劑是隨液相發(fā)展而發(fā)展的,這些反應(yīng)的原理都來(lái)自有機(jī)合成,所以就要求操作者對(duì)有機(jī)合成有所了解。但是,由于柱前衍生化是為色譜分析準(zhǔn)備樣品,處理樣品的量?。╩g級(jí)),所用的小型和微型反應(yīng)器皿又不同于常量的有機(jī)合成,而是類似于近年來(lái)發(fā)展的微量有機(jī)合成。紫外衍生化反應(yīng)要選擇反應(yīng)產(chǎn)率高、重復(fù)性好的反應(yīng)。過(guò)量試劑和試劑中的雜質(zhì)如果干擾下一步的色譜分離和檢測(cè),則在色譜進(jìn)樣前要進(jìn)行純化分離。還要注意反應(yīng)介質(zhì)對(duì)紫外吸收的影響。
    (1)苯甲酰化反應(yīng):苯甲酰氯及其衍生物--對(duì)硝基苯甲酰氯、3,5-二甲基苯甲酰氯和對(duì)甲氧基苯甲酰氯都可以同胺、醇和酚類化合物反應(yīng),生成紫外吸收的苯甲酸酯類衍生物;
    (2)2,4-二硝基氟代苯(DNFB)的反應(yīng):DNFB與醇的反應(yīng)產(chǎn)率很低,但可與大多數(shù)伯胺、仲胺和氨基酸反應(yīng),生成強(qiáng)紫外吸收的苯胺類衍生物;
    (3)苯基異硫氰酸酯(PITC)的反應(yīng):PITC可與氨基酸反應(yīng),生成苯基己丙酰硫脲衍生物--PTH氨基酸;
    (4)苯基磺酰氯的反應(yīng):苯基磺酰氯可與伯胺和仲胺反應(yīng)。
    甲苯磺酰氯可與多氨基化合物反應(yīng),不僅能提高它們的檢測(cè)靈敏度,還可改變HPLC的分離度。
    (5)有機(jī)酸的酯化反應(yīng):有機(jī)酸很容易與酰溴基反應(yīng)生成酯,常用的酰溴基試劑有苯甲酰溴、甲氧基苯甲酰溴、對(duì)溴基苯甲酰溴和對(duì)硝基苯甲酰溴等;
    酯化反應(yīng)在極性溶劑(如乙腈、丙酮或四氫呋喃)中進(jìn)行,有時(shí)需要加催化劑,如冠醚加鉀離子、二乙胺或N-二異丙基胺等。
    (6)羰羥基化合物的反應(yīng):醛類和酮類中的羰基可與2,4-二硝基苯肼(DNPA)反應(yīng),反應(yīng)在弱酸性條件下進(jìn)行,生成苯腙衍生物。
    羰基化合物還可以與對(duì)甲基芐基羥胺(PNBA)在堿催化下反應(yīng),生成有強(qiáng)紫外吸收的肟。





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高效液相色譜儀的脫氣的必要性

  在食品分析中,無(wú)論是殘留分析還是成分分析,HPLC 也已成為不可或缺的。流動(dòng)相脫氣是HPLC 系統(tǒng)能得到可靠數(shù)據(jù)的一個(gè)很有效的措施。下面分析一下,高效液相色譜脫氣的必要性,并總結(jié)歸納了脫氣常用的方法。

  一、脫氣的必要性

  流動(dòng)相脫氣是HPLC 系統(tǒng)能得到可靠數(shù)據(jù)的一個(gè)很有效的措施。HPLC 泵在輸送液體時(shí)要產(chǎn)生很大的力量,由于氣體的壓縮比與液體相比大的多,因而當(dāng)氣泡存在時(shí),我們發(fā)現(xiàn)瞬間的流速降低和系統(tǒng)壓力下降。如果這個(gè)氣泡足夠大,液相泵將不能輸送任何溶劑,而且如果壓力低于預(yù)先設(shè)定的壓力低限,泵將停止工作。當(dāng)一個(gè)氣泡通過(guò)輸液泵時(shí),由于系統(tǒng)壓力大,氣泡通常會(huì)溶解在流動(dòng)相溶液中,隨流動(dòng)相通過(guò)柱子。但是到達(dá)檢測(cè)器流通池時(shí)系統(tǒng)壓力又恢復(fù)到了大氣壓,因而氣泡可能在檢測(cè)器流通池中又顯現(xiàn),在色譜圖上會(huì)出現(xiàn)不規(guī)律的毛刺。

  二、脫氣方法

  1、吹氦脫氣法。

  利用氦氣在液體中溶解度比空氣低的特性,在0.1MPa 壓力下,以約60 mL/min 流速通入流動(dòng)相儲(chǔ)液容器中10~15min,可以很有效地從流動(dòng)相中排除溶解的空氣,能排除接近80%的氧氣。采用一個(gè)高效分布式噴射流裝置,一體積的氦氣可從流動(dòng)相中將等體積的幾乎全部氣體排除。這意味著1L 氦氣通過(guò)1L 流動(dòng)相就可完成排氣這個(gè)工作。這種脫氣方法雖然好,但氦氣價(jià)格較高,很少使用。

  2、加熱回流法。

  此法的脫氣效果較好。在操作時(shí)要注意冷凝塔的冷卻效率,否則溶劑會(huì)丟失,混合流動(dòng)相的比例會(huì)有變化。

  3、抽真空脫氣法。

  此法可使用真空泵,降壓至0.05~0.07MPa ,即可除去溶解的氣體。但是由于真空脫氣會(huì)使混合溶劑組成發(fā)生變化,從而影響到實(shí)驗(yàn)的重現(xiàn)性,因此多用于單溶劑體系的簡(jiǎn)單分析。

  4、超聲波脫氣法。

  將欲脫氣的流動(dòng)相置于超聲波清洗機(jī)中,用超聲波震蕩10~20min。此法的脫氣效果最差。

標(biāo)簽: 高效液相色譜儀
高效液相色譜儀 高效液相色譜儀的脫氣的必要性_高效液相色譜儀
  在線脫氣機(jī)接于HPLC的流動(dòng)相存儲(chǔ)液瓶與高壓恒流泵之間。流動(dòng)相經(jīng)由在線脫氣機(jī)的入口進(jìn)入脫氣機(jī)中,在獨(dú)立的單元真空泵腔內(nèi),通過(guò)預(yù)先設(shè)定的真空度,真 空泵連續(xù)低速運(yùn)行,HPLC流動(dòng)相在泵的作用下流經(jīng)真空腔內(nèi)一段很短的Teflon® AF脫氣膜管,按照Henry’s定律,在真空作用下,溶劑中溶解的氣體通過(guò)管壁排出。配了在線脫氣機(jī)的液相色譜儀再不需要人工超聲脫氣或氦氣脫氣。下面我們來(lái)了解一下在線脫氣機(jī)。
 
  問(wèn):流行品牌液相色譜儀的在線脫氣機(jī)有何特點(diǎn)
 
  答:目前大流行品牌的在線脫氣機(jī)很大部分是使用了TeflonAF脫氣管技術(shù)。有的流行品牌提供TeflonAF技術(shù)脫氣機(jī)和其他類型脫氣機(jī)供用戶選擇,因?yàn)閮r(jià)格有不同。
 
  問(wèn):如何判別是TeflonAF技術(shù)脫氣機(jī)。
 
  由于TeflonAF技術(shù)脫氣效率非常高,TeflonAF脫氣管路體積很小,僅有不到每路500ul。而普通脫氣機(jī)的管路每路有12ml。相差巨大。檢查儀器性能指標(biāo)中都有標(biāo)示這個(gè)指標(biāo)。
 
  問(wèn):液相色譜儀一般配原廠的在線脫氣機(jī),還是說(shuō)可以配其他品牌的脫氣機(jī)?
 
  答:如果原廠配的是TeflonAF的在線脫氣機(jī),那么脫氣效果會(huì)很好。但有一個(gè)問(wèn)題是流行品牌液相色譜儀廠家把維修零配件的價(jià)格定的太高,難以接受。例如:真空泵,脫氣盒,在發(fā)生故障時(shí)需要更換。這些配件少則5千,多則萬(wàn)元,難以接受。而Easeatech在線脫氣機(jī)的真空泵和脫氣盒的價(jià)格要低的多。并且都是原裝進(jìn)口,性能和壽命都非常高。由于在線脫氣機(jī)是獨(dú)立的,Easeatech在線脫氣機(jī)可配所有品牌的液相色譜儀,例如Waters,安捷倫,島津,戴安。所以新購(gòu)置一臺(tái)液相色譜儀,配原廠的脫氣機(jī)不一定是的選擇。配Easeatech在線脫氣機(jī)更合適。
 
  問(wèn):用氦氣脫氣的四元液相色譜儀是否需要配在線脫氣機(jī)?
 
  答:氦氣脫氣也不錯(cuò)。就是用完后還要重新買氦氣,很麻煩。如果有經(jīng)費(fèi),還是購(gòu)一臺(tái)在Easeatech線脫氣機(jī)。
 
問(wèn):二元雙泵液相色譜儀是否要配在線脫氣機(jī)?
 
  答:二元液相色譜儀屬于高壓混合類型。要求不高時(shí)可以不配在線脫氣機(jī),但實(shí)驗(yàn)前要用超聲脫氣機(jī)脫氣。脫氣后的流動(dòng)相才能倒入流動(dòng)相瓶中使用。有些麻煩。在要求高的情況下,例如:1)流動(dòng)相的配比大約相等,如有機(jī)相(甲醇):水是50:50,或60:40等,這時(shí)氣體產(chǎn)生較多,壓力會(huì)波動(dòng)較大。2)基線噪音影響到實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,要求更低的基線噪音。在這些情況下排除了泵和檢測(cè)器本身故障,解決的辦法就是配Easeatech在線脫氣機(jī)。
 
  問(wèn):液相色譜儀的脫氣機(jī)出現(xiàn)故障,需要更換脫氣盒,如何處理呢?
 
  答:由于原裝脫氣盒價(jià)格被定的太高,更換費(fèi)用太高。因次建議購(gòu)買Easeatech在線脫氣機(jī)。一勞永逸的解決這個(gè)問(wèn)題。如果是Waters液相色譜儀,也可以用Easeatech的脫氣盒代替原裝的,價(jià)格要低很多。安裝沒(méi)有任何問(wèn)題。因?yàn)榻涌诤托螤疃纪耆粯印?/div>


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