【中國(guó)儀器網(wǎng) 維修保養(yǎng)】導(dǎo)讀：液相色譜儀是一種常用的專(zhuān)業(yè)檢驗(yàn)檢測(cè)儀器，在使用過(guò)程中難免會(huì)遇到一些故障，這需要相應(yīng)的辦法來(lái)解決。

　　液相色譜儀的系統(tǒng)由儲(chǔ)液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、記錄儀等幾部分組成。儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相)內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中做相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，經(jīng)過(guò)反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過(guò)程，各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出，通過(guò)檢測(cè)器時(shí)，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來(lái)。
　　
　　1、HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法是什么？
　　
　?、贅悠妨坎蛔悖鉀Q辦法為增加樣品量
　　
　?、跇悠肺磸闹又辛鞒觥？筛鶕?jù)樣品的化學(xué)性質(zhì)改變流動(dòng)相或柱子
　　
　　③樣品與檢測(cè)器不匹配。根據(jù)樣品化學(xué)性質(zhì)調(diào)整波長(zhǎng)或改換檢測(cè)器
　　
　?、軝z測(cè)器衰減太多。調(diào)整衰減即可。
　　
　?、輽z測(cè)器時(shí)間常數(shù)太大。解決辦法為降低時(shí)間參數(shù)
　　
　　⑥檢測(cè)器池窗污染。解決辦法為清洗池窗。
　　
　　⑦檢測(cè)池中有氣泡。解決辦法為排氣。
　　
　?、嘤涗泝x測(cè)壓范圍不當(dāng)。調(diào)整電壓范圍即可。
　　
　　⑨流動(dòng)相流量不合適。調(diào)整流速即可。
　　
　?、鈾z測(cè)器與記錄儀超出校正曲線。解決辦法為檢查記錄儀與檢測(cè)器，重作校正曲線。
　　
　　2、液相色譜中峰出現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因是什么？
　　
　?、俸Y板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖洗柱子，替換篩板或更換柱子。
　　
　?、诖嬖诟蓴_峰，解決辦法為使用較長(zhǎng)的柱子，改換流動(dòng)相或更換選擇性好的柱子
　　
　?、劭赡苤d，減少進(jìn)樣量。
　　
　　3、為何出現(xiàn)峰展寬？
　　
　　①樣品體積過(guò)大——用流動(dòng)相配樣,總的樣品體積小于*峰的15%
　　
　?、谠谶M(jìn)樣閥中造成峰擴(kuò)展——進(jìn)樣前后排出氣泡以降低擴(kuò)散
　　
　　③數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢——設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于10點(diǎn)
　　
　?、軝z測(cè)器時(shí)間常數(shù)過(guò)大——設(shè)定時(shí)間常數(shù)為感興趣*峰半寬的10%
　　
　　⑤流動(dòng)相粘度過(guò)高——增加柱溫,采用低粘度流動(dòng)相
　　
　?、迿z測(cè)池體積過(guò)大——用小體積池,卸下熱交換器
　　
　　⑦保留時(shí)間過(guò)長(zhǎng)——等度洗脫時(shí)增加強(qiáng)溶劑含量,也可用梯度洗脫
　　
　?、嘀怏w積過(guò)大——將連接管徑和連接管長(zhǎng)度降至zui小
　　
　?、針悠愤^(guò)載——進(jìn)小濃度小體積樣品
　　
　　4、如何簡(jiǎn)單判斷比例閥是否內(nèi)漏？
　　
　　設(shè)定泵使用一個(gè)單獨(dú)通路（A），打開(kāi)Purge閥，流速5mL/min，提起其他溶劑瓶?jī)?nèi)的溶劑過(guò)濾頭直至離開(kāi)液面，觀察這些通路（B、C、D）內(nèi)的溶劑是否隨著流動(dòng)，正常時(shí)均不應(yīng)流動(dòng)。
　　
　　5、做HPLC分析時(shí)，柱壓不穩(wěn)定，如何解決？
　　
　?、俦脙?nèi)有空氣，解決的辦法是清除泵內(nèi)空氣，對(duì)溶劑進(jìn)行脫氣處理；
　　
　?、诒壤y失效，更換比例閥即可；
　　
　?、郾妹芊鈮|損壞，更換密封墊即可；
　　
　　④溶劑中的氣泡，解決的辦法是對(duì)溶劑脫氣，必要時(shí)改變脫氣方法；
　　
　?、菹到y(tǒng)檢漏，找出漏點(diǎn)，密封即可；
　　
　?、尢荻认疵?，這時(shí)壓力波動(dòng)是正常的。
　　
　　6、購(gòu)買(mǎi)的HPLC柱驗(yàn)收測(cè)試時(shí)柱壓過(guò)高，請(qǐng)問(wèn)為什么？
　　
　　柱壓過(guò)高是HPLC柱用戶zui常碰到的問(wèn)題。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問(wèn)題，您可按下面步驟檢查問(wèn)題的起因：
　　
　?、俨鹑ケＷo(hù)預(yù)柱，看柱壓是否還高，否則是保護(hù)柱的問(wèn)題，若柱壓仍高，再檢查；
　　
　　②把色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降，否則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降，再檢查；
　　
　　③將柱子的進(jìn)出口反過(guò)來(lái)接在儀器上，用10倍柱體積的流動(dòng)相沖洗柱子，（此時(shí)不要連接檢測(cè)器，以防固體顆粒進(jìn)入流動(dòng)池）。這時(shí)，如果柱壓仍不下降，再檢查；只用于使用過(guò)的柱子。
　　
　?、芨鼡Q柱子入口篩板，若柱壓下降，說(shuō)明您的溶劑或樣品含有顆粒雜質(zhì)，正是這些雜質(zhì)將篩板堵塞引起壓力上升。若柱壓還高，請(qǐng)與廠商。一般情況下，在進(jìn)樣器與保護(hù)柱之間接一個(gè)在線過(guò)濾器便可避免柱壓過(guò)高的問(wèn)題。
　　
　　7、色譜柱中的流動(dòng)相會(huì)排干嗎？
　　
　　不少做色譜分離試驗(yàn)的人遇到過(guò)這樣的情形：不慎未及時(shí)補(bǔ)充流動(dòng)相，泵將溶劑瓶中的流動(dòng)相吸干了，HPLC系統(tǒng)由此而停止工作了。如此情況是否會(huì)損壞色譜柱？泵是否已將色譜柱中所有流動(dòng)相都排干了？色譜柱還能使用嗎？事實(shí)上，如果泵將溶劑瓶中的流動(dòng)相吸干，并不會(huì)造成色譜柱的損壞。即使泵中充滿了空氣，泵也不會(huì)將空氣排入色譜柱。因?yàn)楸弥荒茌斔鸵后w，而不能輸送空氣。
　　
　　相比之下，另一個(gè)更可能發(fā)生的情況是忘記蓋上色譜柱兩端的密封蓋或蓋子太松而使色譜柱變干。同樣，整個(gè)色譜柱干涸的情況不太容易發(fā)生，多半可能只是色譜柱兩端的幾個(gè)毫米變干了，因揮發(fā)掉所有溶劑是色譜柱變干需要相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間。即使色譜柱真的變干了，也不一定就不可救藥了?？梢試L試用一種完全脫氣的、表面張力低的溶劑（如，經(jīng)氦氣脫氣的甲醇）沖洗色譜柱以除去氣體。較低的表面張力有助于浸潤(rùn)填料表面；已脫氣的溶劑應(yīng)該能夠溶解并去除滯留在填料中的氣體。色譜柱大約需要（以1mL/min的流速）沖一個(gè)小時(shí)或更多的時(shí)間被徹底浸潤(rùn)，恢復(fù)到正常狀態(tài)。
　　
　　8、除了在線脫氣，常用的實(shí)驗(yàn)室脫氣方式還有哪些？
　　
　　加熱回流脫氣，脫氣效果zui佳，但無(wú)法保持；氦脫氣，此方法脫氣效果佳，能除去百分之九十以上的空氣，但氦氣價(jià)格太貴，所以用的不多；真空脫氣，效果僅次于氦脫氣，但脫氣過(guò)程中容易造成樣品溶液揮發(fā)損失；超聲脫氣，只能脫去約百分之三十的空氣，但在實(shí)驗(yàn)室中zui常用。目前還是盡量爭(zhēng)取用在線脫氣，方便且效果好。

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