分光光度計的使用步驟主要有哪些?
以下相關(guān)工程師做如下介紹：
1.把分光光度計電源線連接好，儀器的電源具備接地功能;
2.接通電源后，按動開機開關(guān)，然后讓儀器預(yù)熱至少20分鐘；
儀器會自動校正，然后顯示546.0nm 0.000A說明自檢結(jié)束，就可以開始測試;
3.使用“方式”鍵測試的方式，再根據(jù)自己要測量的結(jié)果選透光率、吸光度、和濃度的測試;
4.要對波長進行分析，選擇按鍵6，然后按提示依次進行;
5.把樣品溶液和要測定的溶液各自倒入比色皿中后；
然后打開樣品蓋，把盛著溶液的比色皿插入另一個比色皿中，最后蓋好樣品蓋;
6.把參比的溶液拉到光路中按住“OABS/100%T”鍵；
這時的顯示器會顯示出BLANKING,，直到最后顯示出“100%T”或者是“0.000A”為止;
7.最后儀器顯示出“100%T”或者是“0.000A”即可結(jié)束測試。
這時被測樣品的透光度、吸光度等參數(shù)就可直接讀出;
8.分光光度計使用完畢，關(guān)上電源，取出比色皿洗凈，樣品室用軟布或軟紙擦凈。
分光光度計的使用注意事項：
1、分光光度計應(yīng)放在干燥的房間內(nèi)，使用時放置在堅固平穩(wěn)的工作臺上，室內(nèi)照明不宜太強。
熱天時不能用電扇直接向儀器吹風(fēng)，防止燈泡燈絲發(fā)亮不穩(wěn)定;
2、分光光度計使用前，使用者應(yīng)該首先了解分光光度計的結(jié)構(gòu)和工作原理，以及各個操縱旋鈕之功能。
在未按通電源之前，應(yīng)該對儀器的安全性能進行檢查，電源接線應(yīng)牢固；
通電也要良好，各個調(diào)節(jié)旋鈕的起始位置應(yīng)該正確，然后再按通電源開關(guān)。
3、在分光光度計尚未接通電源時，電表指針必須于“0”刻線上；
若不是這種情況，則可以用電表上的校正螺絲進行調(diào)節(jié)。
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導(dǎo)讀：
紫外可見分光光度計在生物學(xué)的應(yīng)用分析中, 常見的有蛋白質(zhì)含量檢測;一般是在蛋白質(zhì)的吸收峰上作吸光度測定。因為蛋白質(zhì)對紫外光的主要吸收波長為280nm, 所以, 采用光度測量模式, 將儀器的波長GOTO 到蛋白質(zhì)的zui大吸收峰波長280nm 上, 測試其吸光度大小, 就可完成對蛋白質(zhì)的定量檢測。
目前, 紫外可見分光光度計的應(yīng)用主要是在定量分析方面。先從生命科學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用來介紹。紫外可見分光光度計在生命科學(xué)中應(yīng)用非常廣泛。zui主要的是以下5 個方面。
1. 蛋白質(zhì)分析工作中的應(yīng)用
紫外可見分光光度計在蛋白質(zhì)的分析中, zui主要的是作蛋白質(zhì)含量檢測;一般是在蛋白質(zhì)的吸收峰上作吸光度測定。因為蛋白質(zhì)對紫外光的主要吸收波長為280nm, 所以, 采用光度測量模式, 將儀器的波長GOTO 到蛋白質(zhì)的zui大吸收峰波長280nm 上, 測試其吸光度大小, 就可完成對蛋白質(zhì)的定量檢測。
2. 核酸分析工作中的應(yīng)用
紫外可見分光光度計在核酸分析中的應(yīng)用, 主要是用來對核酸的定量檢測; 因為核酸的吸收峰在260nm。我們只要采用光度測量模式, 將紫外可見分光光度計的波長GOTO 到核酸的zui大吸收峰260nm 上, 測試其吸光度大小就是了。
3. 氨基酸分析工作中的應(yīng)用
紫外可見分光光度計在氨基酸分析中的應(yīng)用, 主要是用來對氨基酸的定量檢測。因為氨基酸對紫外光的主要吸收波長為230nm, 所以, 我們只要采用光度測量模式, 將紫外可見分光光度計儀器的波長GOTO 到氨基酸的zui大吸收峰230nm 上, 就可測試其吸光度大小, 從而計算出氨基酸的含量。但是, 因為氨基酸分析時, 一般是將它溶解在水中, 而水在230 nm 附近有很多干擾吸收線, 所以, 在用紫外可見分光光度計對氨基酸分析檢測時, 要注意防止干擾的問題。此外, 還需注意: 只有少數(shù)氨基酸有紫外吸收, 多數(shù)氨基酸無紫外吸收或很弱, 測定時要衍生化后再測。
4. 糖類分析測試工作中的應(yīng)用
紫外可見分光光度計在糖的分析中, 主要是作定量檢測。因為糖對紫外光的主要吸收波長為218nm, 所以, 對糖類進行分析時, 只要采用光度測量模式, 將紫外可見分光光度計儀器的波長GOTO 到氨基酸的zui大吸收峰218 nm上, 就可測試其吸光度大小, 從而計算出糖的含量。
5. 多糖分析測試工作中的應(yīng)用
紫外可見分光光度計在多糖的分析中, 主要也是作定量檢測。因為多糖對紫外光的主要吸收波長為206nm, 所以, 我們只要采用光度測量模式, 將紫外可見分光光度計儀器的波長GOTO 到多糖的zui大吸收峰206 nm 上, 就可測試其吸光度大小, 從而計算出多糖的含量。
但是多糖的分析難度很大。因為, 在206 nm 處的時候, 光源(氘燈) 的能量已經(jīng)很弱, 儀器光學(xué)系統(tǒng)的能量輸出也很低, 光電倍增管的靈敏度也很低, 206nm 左右的干擾也很大。所以, 用紫外可見分光光度計作多糖的分析是很難的事, 目前許多科學(xué)家正在研究中。
紫外可見吸收光譜是由于分子中的某些基團吸收了紫外可見輻射光后，發(fā)生了電子能級躍遷而產(chǎn)生的吸收光譜。
由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu)，其吸收光能量的情況也就不會相同；
因此，每種物質(zhì)就有其特有的、固定的吸收光譜曲線，可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測定該物質(zhì)的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎(chǔ)。
分光光度分析就是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。它是帶狀光譜，反映了分子中某些基團的信息?？梢杂脴?biāo)準(zhǔn)光圖譜再結(jié)合其它手段進行定性分析。
根據(jù)Lambert-Beer定律說明光的吸收與吸收層厚度成正比，比耳定律說明光的吸收與溶液濃度成正比;如果同時考慮吸收層厚度和溶液濃度對光吸收率的影響，即得朗伯-比耳定律。
即A=εbc，(A為吸光度，ε為摩爾吸光系數(shù)，b為液池厚度，c為溶液濃度)就可以對溶液進行定量分析。
將分析樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣品以相同濃度配制在同一溶劑中，在同一條件下分別測定紫外可見吸收光譜。
若兩者是同一物質(zhì)，則兩者的光譜圖應(yīng)完全一致。如果沒有標(biāo)樣，也可以和現(xiàn)成的標(biāo)準(zhǔn)譜圖對照進行比較。這種方法要求儀器準(zhǔn)確，精密度高，且測定條件要相同。
實驗證明，不同的極性溶劑產(chǎn)生氫鍵的強度也不同，這可以利用紫外光譜來判斷化合物在不同溶劑中氫鍵強度，以確定選擇哪一種溶劑。
應(yīng)用：
在水和廢水監(jiān)測中的應(yīng)用，對于一個水系的監(jiān)測分析和綜合評價，一般包括水相(溶液本身)、固相(懸浮物、底質(zhì))、生物相(水生生物)。
在水質(zhì)的常規(guī)監(jiān)測中，紫外可見分光光度法占有較大的比重。由于水和廢水的成分復(fù)雜多變，待測物的濃度和干擾物的濃度差別很大，在具體分析時必須選擇好分析方法。
在農(nóng)產(chǎn)品和食品分析中可用于檢測的組分或成分有蛋白質(zhì)、賴氨酸、葡萄糖、維生素C、硝酸鹽、亞硝酸鹽、砷、汞等；
在植物生化分析中可用于檢測葉綠素、全氮和酶的活力等；
在飼料分析中可用于檢測煙酸、棉酚、磷化氫和甲酯等。
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