反相液相色譜柱具有無與倫比的性能。即使對于非常難分離的堿性化合物，也可獲得出色的峰形，從而改善了這些類型的樣品的柱效和分離度。

    反相液相色譜柱使用中的注意事項(xiàng)

    1、新C18柱在使用前，須先用甲醇或乙腈試劑以20倍柱體積低流速沖洗，作用是使固定相能充分潤濕、碳鏈?zhǔn)嬲箯氐祝狗聪嘁合嗌V柱的性能達(dá)到更好狀態(tài)。

    具體操作是，將配制好65%的乙腈/水沖洗后，把色譜柱進(jìn)口端連接在色譜儀上，出口端放空（不可連上檢測器，以免污染了檢測器），以0.1ml/min~0.5ml/min的低流速將色譜柱中的清稀溶液吹干，過20分鐘后再接上檢測器，以1.0ml/min的流速，繼續(xù)沖洗2~8小時；

    2、液相色譜儀檢測分析樣品完畢后，須沖洗色譜柱。尤其是流動相中含有酸或鹽時，需將色譜柱中的酸或鹽沖洗干凈，通常建議用10%甲醇水沖洗20倍柱體積；

    3、若反相液相色譜柱處于長期閑置狀態(tài)時，要將色譜柱徹底沖洗，建議沖洗3-4小時以上，保存在純有機(jī)試劑或高比例的有機(jī)試劑溶液中；

    4、由于C18柱的固定相疏水性較強(qiáng)，在使用過程中盡量不要使用高水相條件，若水相比例過高易引起固定相疏水塌陷，引起柱效迅速下降，甚至造成不可逆的負(fù)面影響；由于碳載量高，表現(xiàn)尤為明顯，建議使用過程中水相比例不超過90%；

    5、壓力升高、柱性能下降：通常為色譜柱被污染，對色譜柱進(jìn)行再生處理可恢復(fù)部分柱效；

    6、壓力驟升：通常由鹽析出或篩板堵塞引起，若是鹽析出，用10%甲醇水低流速沖洗至壓力恢復(fù)即可；若判斷并非鹽析出，以純甲醇或10%甲醇水為流動相反沖色譜柱（將色譜柱反接，不接檢測器），若反沖半小時仍無效果則說明反沖無效，需尋找其他原因。

    在硅膠制造和鍵合技術(shù)方面進(jìn)行了改進(jìn)，因此能夠獲得這樣優(yōu)異的性能，并且這些技術(shù)完全由控制。

    二手液相色譜儀是一類分離與分析技術(shù)，其特點(diǎn)是以液體作為流動相，固定相可以有多種形式，如紙、薄板和填充床等。在色譜技術(shù)發(fā)展的過程中.為了區(qū)分各種方法，根據(jù)固定相的形式產(chǎn)生了各自的命名，如，紙色譜、薄層色譜和柱液相色譜。

    對二手液相色譜儀的要求

    1、流動相必須用HPLC級的試劑，使用前過濾除去其中的顆粒性雜質(zhì)和其他物質(zhì)(使用0.45μm或更細(xì)的膜過濾)。

    2、流動相過濾后要用超聲波脫氣，脫氣后應(yīng)該恢復(fù)到室溫后使用。

    3、不能用純乙腈作為流動相，這樣會使單向閥粘住而導(dǎo)致泵不進(jìn)液。

    4、使用緩沖溶液時，做完樣品后應(yīng)立即用去離子水沖洗管路及柱子一小時，然后用甲醇(或甲醇水溶液)沖洗40分鐘以上，以充分洗去離子。對于柱塞桿外部，做完樣品后也必須用去離子水沖洗20mL以上。

    5、長時間不用儀器，應(yīng)該將柱子取下用堵頭封好保存，注意不能用純水保存柱子，而應(yīng)該用有機(jī)相(如，甲醇等)，因?yàn)?，純水易長霉。

    6、每次做完樣品后應(yīng)該用溶解樣品的溶劑清洗進(jìn)樣器。

    7、C18柱絕對不能進(jìn)蛋白樣品，血樣、生物樣品。

    8、堵塞導(dǎo)致壓力太大，按預(yù)柱→混合器中的過濾器→管路過濾器→單向閥檢查并清洗，清洗方法：

    ①以異丙醇作溶劑沖洗；

    ②放在異丙醇中間用超聲波清洗；

    ③用10％稀硝酸清洗；

    9、氣泡會致使壓力不穩(wěn)，重現(xiàn)性差，所以在使用過程中要盡量避免產(chǎn)生氣泡。

    10、如果進(jìn)液管內(nèi)不進(jìn)液體時，要使用注射器吸液：通常在輸液前要進(jìn)行流動相的清洗。

    11、要注意柱子的pH值范圍，不得注射強(qiáng)酸強(qiáng)堿的樣品，特別是堿性樣品。

    12、更換流動相時應(yīng)該先將吸濾頭部分放入燒杯中邊振動邊靖洗，二手液相色譜儀然后插入新的流動相中。更換無互溶性的流動相時要用異丙醇過渡一下。

    原因有以下三點(diǎn)：

    （1）流動相過濾在理論上有好處，但是，實(shí)際操作時由于不可能做到專瓶專用，反而容易造成的交叉污染，對于配比復(fù)雜的流動相影響更大。

    （2）流動相過濾在經(jīng)濟(jì)成本上不劃算。買一套過濾裝置要6000多元，且過濾器公認(rèn)是比較容易損壞的設(shè)備。最主要是過濾片的成本太高，一片就要幾十元。按一般液相柱的正常使用壽命計(jì)算，過濾片的成本會遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于色譜柱的成本。

    （3）流動相過濾對于工作效率成本不劃算。使用溶劑過濾器有一個預(yù)清洗、裝備、使用、用后清洗，晾干的過程，至少也有一個小時的時間。這個成本也不能忽視。

    （4）二手液相色譜儀在實(shí)際工作未發(fā)現(xiàn)流動相不過濾會對柱壽命有任何影響。我們起碼有6年時間沒有做過流動相過濾的工作，但是和國內(nèi)同行相比較，在同等使用強(qiáng)度下我們的柱壽命是比較長的。