紫外分光光度計就是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。紫外分光光度計可以在紫外可見光區(qū)任意選擇不同波長的光。物質(zhì)的吸收光譜就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長的光能量，相應地發(fā)生了分子振動能級躍遷和電子能級躍遷的結(jié)果。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子 、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu)，其吸收光能量的情況也就不會相同，因此，每種物質(zhì)就有其特有的、固定的吸收光譜曲線，可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測定該物質(zhì)的含量。
紫外分光光度計的操作要點：
啟動儀器之前，一定要把樣品室內(nèi)存放的防潮劑拿出，儀器進行正常運轉(zhuǎn)檢查的時候，千萬不能開啟樣品室蓋；要求比色皿當中的液體占總體積的66%-80%較佳，千萬不能讓液體太多，以致于液體外泄腐蝕儀器；正常檢測的時候，需要保證比色皿干凈，內(nèi)壁上液滴需要使用專業(yè)的紙進行擦拭，千萬不能使用手進行直接的擦拭，容易對使用人員的手造成傷害，相信沒有人希望這樣的事情發(fā)生。
在正常運轉(zhuǎn)的時候，嚴禁把液體溶劑放置于儀器的表層上，如果出現(xiàn)液體外泄的情況，一定要保證進行及時的清潔處理。當檢測完畢之后，需要及時將比色皿內(nèi)的液體處理掉，使用蒸餾水將其清理干凈，同時倒置進行晾干處理。最后需要將儀器的電源關閉，把防潮劑放入到樣品室內(nèi)，做好防塵處理，等到管理人員同意方可離去。
紫外分光光度計的日常維護：
一、溫度和濕度是影響儀器性能的重要因素。他們可以引起機械部件的銹蝕，使金屬鏡面的光潔度下降，引起儀器機械部分的誤差或性能下降；造成光學部件如光柵、反射鏡、聚焦鏡等的鋁膜銹蝕，產(chǎn)生光能不足、雜散光、噪聲等，甚至儀器停止工作，從而影響儀器壽命。維護保養(yǎng)時應定期加以校正。應具備四季恒濕的儀器室，配置恒溫設備，特別是地處南方地區(qū)的實驗室。
二、環(huán)境中的塵埃和腐蝕性氣體亦可以影響機械系統(tǒng)的靈活性、降低各種限位開關、按鍵、光電偶合器的可靠性，也是造成必須學部件鋁膜銹蝕的原因之一。因此必須定期清潔，保障環(huán)境和儀器室內(nèi)衛(wèi)生條件，防塵。
三、儀器使用一定周期后，內(nèi)部會積累一定量的塵埃，可以由維修工程師或在工程師指導下定期開啟儀器外罩對內(nèi)部進行除塵工作，同時將各發(fā)熱元件的散熱器重新緊固，對光學盒的密封窗口進行清潔，必要時對光路進行校準，對機械部分進行清潔和必要的潤滑，最后，恢復原狀，再進行一些必要的檢測、調(diào)校與記錄。
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我們?nèi)绾蝸碓u價一臺紫外可見分光光度計的優(yōu)劣呢？首先，我們要來考察它的外觀。然后，我們探討一下會對儀器的使用有很大影響的幾個重要指標：
1、雜散光它指不應該有光的地方有了光。
它是光譜測量中誤差的主要來源。這個值當然越小越好了。
2、光度準確度光度準確度指實際測量的光度讀數(shù)值與真值之差。
它是用戶對儀器的直接要求，每個用戶都必須重視。
3、噪聲噪聲也是儀器的重要指標之一。
它表征儀器的做稀溶液的能力。這個指標也是越小越好。
4、光譜帶寬指從單色器射出的單色光譜線強度輪廓曲線的1/2高度處的譜帶寬度。
表征儀器的光譜分辨率。按照比耳定律，光譜帶寬應該是越小越好的，但是如果儀器的光源能量弱，光學傳感器的靈敏度低時，光譜帶寬小了，也得不到理想的測量結(jié)果的。所以，選擇和使用儀器時一定注意。
5、穩(wěn)定性穩(wěn)定性是使用者較受關注的指標之一。
儀器的宗旨就是穩(wěn)定可靠，不穩(wěn)定更談不上可靠了。
6、噪聲噪聲也是儀器的重要指標之一。
它表征儀器的做稀溶液的能力。這個指標也是越小越好。
7、波長的準確度和重復性儀器的每個值都是在一定的波長下測得的，如果所示的波長和實際波長偏差萬里，那么測出的值和真值的吻合度從何談起呢？可見這個指標的重要性。
總之，這幾個指標都是相互獨立又相互關聯(lián)的，每個指標對儀器的使用都有很大影響。希望大家在選購紫外、可見分光光度計時，多做比較，多做判斷，切實找到一個穩(wěn)定可靠的好幫手。
我們選擇時需要根據(jù)自己實驗室的需要，主要考慮光學構(gòu)造和光源、檢測方法、樣品類型和數(shù)據(jù)處理等因素。
1.光學構(gòu)造
一般來說，紫外光分光光度計分為單光束和雙光束兩類。1單光束型主要是依賴單束光進行測量。一束給定波長的光通過對照物，然后再通過實際樣品溶液，就能得到吸光結(jié)果。
雙光束型則是通過一個斬光輪（mirroredchopperwheel）將一束光分成兩束，分別測量對照樣品和實際樣品?？梢宰钚』馄疲╨ampdrift）和減少測量時間。一些雙光型光度計不利用斬光輪，而是利用一種光束分光器來代替，將一束光分成兩束平行的光然后同時測量對照樣品和目的樣品。因為增加了測量的速度，所以雙光束分光光度計在測量一些溶液隨時間動態(tài)變化的研究中大有用處。
2.樣品類型
在大部分的樣品類型中，分光光度計可接受樣品孔、小玻璃管cuvette、吸漿管和微孔板。
用小試管裝樣品容量一般從1μl-5ml，并且一些儀器裝備了各種樣品固定物來滿足各種改變需要。
3.光源和檢測方法
分光光度計的光譜也是需要考慮的一個重要因素。
紫外分光光度計一般覆蓋190nm和380nm波長，通常利用氘燈照明。一些特殊的儀器可以提供滿足光子學和半導體研究需要的光譜范圍。
有的儀器可以選擇多種光源：紫外光、可見光和甚至紅外光（780nm至3,000nm）。鎢燈和鹵素燈一般只覆蓋可見光部分（大約380nm到800nm）。而氙燈則可以覆蓋紫外光和可見光區(qū)域。
分光光度計的帶寬（bandwidth）很大程度上依賴于單色儀的狹縫的寬度?？梢酝渡涑鰧嶒灳_要求的光譜。一種嚴格帶寬使得儀器能對復雜的混合物進行高分辨率的吸光測量?？勺兊膯紊珒x的狹縫寬度能使一臺分光光度計滿足多種實驗需要。
4.樣品類型
在大部分的樣品類型中，分光光度計可接受樣品孔、小玻璃管cuvette、吸漿管和微孔板。
用小試管裝樣品容量一般從1μl-5ml，并且一些儀器裝備了各種樣品固定物來滿足各種改變需要。
5.數(shù)據(jù)管理
大部分單機型的分光光度計包含了驅(qū)動儀器運行和管理數(shù)據(jù)的軟件。高性能的儀器，通常與PC機一起聯(lián)用，需要從制造商提供額外的軟件。
由此可見紫外、可見分光光度計是一種常規(guī)的實驗室分析儀器?？蓮V泛用于無機物、有機物的定性、定量分析中，在科研、制藥、化工、環(huán)保、衛(wèi)生、防疫等領域中發(fā)揮重要的作用。
分光光度計計采用一個可以產(chǎn)生多個波長的光源，通過系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長的光源，光源透過測試的樣品后，部分光源被吸收，計算樣品的吸光值，從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
分光光度計的基本工作原理
分光光度計的基本工作原理是基于物質(zhì)對光（對光的波長）的吸收具有選擇性，不同的物質(zhì)都有各自的吸收光帶，所以，當光色散后的光譜通過某一溶液時，其中某些波長的光線就會被溶液吸收。在一定的波長下，溶液中物質(zhì)的濃度與光能量減弱的程度有一定的比例關系，即符合比爾定律。
T=I/Iolg（Io/I）=εcb
式中，T為透過率，Io為入射光強度，I為透射光強度，A為消光值（吸光度），ε為吸收系數(shù)，b為溶液的光徑長度，c為溶液的濃度。從以上公式可以看出，當入射光、吸收系數(shù)和溶液厚度一定時，透光率是根據(jù)溶液的濃度而變化的。
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