超微量紫外可見分光光度計是一類很重要的分析儀器，是應(yīng)用液體的表面張力特性,樣品體積只需要1ul,在偵測臺上,經(jīng)上下臂的接觸拉出固定的光徑達(dá)到快速,微量,高濃度,免石英管,免毛細(xì)管等耗材偵測吸收值的優(yōu)點。無論在物理學(xué)、化學(xué)、生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、材料學(xué)、環(huán)境科學(xué)等科學(xué)研究領(lǐng)域，還是在化工、醫(yī)藥、環(huán)境檢測、冶金等現(xiàn)代生產(chǎn)與管理行業(yè)，紫外可見分光光度計都獲得了日益廣泛的應(yīng)用。
超微量紫外分光光度計的特點：
1、檢測只需1 微升的樣本，節(jié)省消耗品費用;
2、直接使用加樣器將待檢測樣本加在檢測的表面上，無需使用比色皿和毛細(xì)管;
3、測試多樣品的時候不需要不停的更換比色皿，減少工作量;
4、樣本無需進(jìn)行稀釋，即可進(jìn)行快速、簡便的檢測;
5、配套軟件具有開放式數(shù)據(jù)庫，可自行添加標(biāo)樣數(shù)據(jù)，自定義計算公式;
6、樣品檢測范圍廣，只要有標(biāo)樣，可對所有有紫外吸收的樣品進(jìn)行微量檢測。
超微量紫外可見分光光度計注意事項：
1、該儀器應(yīng)放在干燥的房間內(nèi)，使用時放置在堅固平穩(wěn)的工作臺上，室內(nèi)照明不宜太強。熱天時不能用電扇直接向儀器吹風(fēng)，防止燈泡燈絲發(fā)亮不穩(wěn)定。
2、使用本儀器前，使用者應(yīng)該首先了解本儀器的結(jié)構(gòu)和工作原理，甲醛檢測儀以及各個操縱旋鈕之功能。在未按通電源之前，應(yīng)該對儀器的安全性能進(jìn)行檢查，電源接線應(yīng)牢固，通電也要良好，各個調(diào)節(jié)旋鈕的起始位置應(yīng)該正確，然后再按通電源開關(guān)。超微量紫外分光光度計可提供200~850nm的全光譜偵測,且不需要暖機,開機后立即使用。搭配高感度CCD array偵測器,偵測吸收值可高達(dá)300Abs(dsDNA濃度2~15000ng/ul),大部分純化后的核酸幾乎都不需要稀釋即可偵測。
超微量紫外可見分光光度計工作原理：
超微量分光光度計進(jìn)行濃度測定的原理是根據(jù)朗伯-比爾(Lamber-Beer)定律，A=K·C·L 式中，A為吸光度;K為吸(消)光系數(shù);C為溶液的濃度;L為液層厚度。此公式說明：在入射光一定時，溶液的吸光度與溶液的濃度及液層厚度成正比。此式就是光的吸收定律的數(shù)學(xué)表達(dá)式，又叫朗伯-比爾定律。
核酸的定量是超微量分光光度計使用頻率最大的功能。可以定量測定溶于緩沖液的寡核苷酸，單鏈、雙鏈DNA以及RNA含量。這是由于核酸、核苷酸及其衍生物都具有共軛雙鍵，具有紫外吸收的特性，最大的吸收波長在260nm，吸收波谷在230nm。
除了核酸濃度，分光光度計同時顯示幾個非常重要的比值表示樣品的純度，如A260/A280的比值，用于評估樣品的純度，因為蛋白的吸收峰是280nm。純凈的樣品，比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白質(zhì)或者酚類物質(zhì)的影響。A230表示樣品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0。
這種方法是在280nm波長，直接測試蛋白。蛋白質(zhì)直接定量方法，適合測試較純凈、成分相對單一的蛋白質(zhì)。紫外直接定量法相對于比色法來說，速度快，操作簡單;但是容易受到平行物質(zhì)的干擾，如DNA的干擾;另外敏感度低，要求蛋白的濃度較高。
蛋白質(zhì)通常是多種蛋白質(zhì)的化合物，比色法測定的基礎(chǔ)是蛋白質(zhì)構(gòu)成成分：氨基酸(如酪氨酸，絲氨酸)與外加的顯色基團(tuán)或者染料反應(yīng)，產(chǎn)生有色物質(zhì)。有色物質(zhì)的濃度與蛋白質(zhì)反應(yīng)的氨基酸數(shù)目直接相關(guān)，從而反應(yīng)蛋白質(zhì)濃度。
比色方法一般有BCA，Bradford，Lowry 等幾種方法。與傳統(tǒng)分光光度計相比，超微量分光光度計要求的樣品體積小，不需要比色皿，比色杯清洗方便，只需用干凈的吸水紙將樣品從檢測平臺上擦拭干凈即可。除此之外，實驗過程也更為簡單，不需預(yù)熱，可隨時檢測，檢測結(jié)果顯示吸光度值的同時，程序直接給出濃度值。超微量分光光度計與傳統(tǒng)相比，體積更小，更方便使用。
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