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液相色譜柱的使用方法 液相色譜常見問題解決方法

時間:2020-07-01    來源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     
【導(dǎo)讀】色譜柱在使用前,可以進(jìn)行柱的性能測試,并將結(jié)果保存起來,作為今后評價柱性能變化的參考。但要注意:柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有



    色譜柱在使用前,可以進(jìn)行柱的性能測試,并將結(jié)果保存起來,作為今后評價柱性能變化的參考。但要注意:柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同;另外,在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進(jìn)行(出廠測試所使用的條件是較佳條件),只有這樣,測得的結(jié)果才有可比性。

    1、樣品的前處理:

    a、可以使用流動相溶解樣品。

    b、使用予處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。

    c、使用0.45?m的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。

    2、流動相的配制:

    液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的,因此要求流動相具備以下的特點(diǎn):

    a、流動相對樣品具有一定的溶解能力,保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中)。

    b、流動相具有一定惰性,與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(特殊情況除外)。

    c、流動相的黏度要盡量小,以便在使用較長的分析柱時能得到好的分離效果;同時降低柱壓降,延長液體泵的使用壽命(可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。

    d、流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。如使用UV檢測器,可以使用對紫外吸收較低的溶劑配制。

    e、流動相沸點(diǎn)不要太低,否則容易產(chǎn)生氣泡,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無法進(jìn)行。

    f、在流動相配制好后,一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測,還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。

    3、流動相流速的選擇:

    因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù),使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱,要追求較佳柱效,可以使用較佳流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱,流速一般選擇1ml/min,對于內(nèi)徑為4.0mm柱,流速0.8ml/min為佳。

    當(dāng)選用較佳流速時,分析時間可能延長。可采用改變流動相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分析時間(如使用反相柱時,可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量)。





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液相色譜儀五種故障問題解決方法

  液相色譜儀是一種常用的分析儀器,主要由高壓輸液泵、進(jìn)樣系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、色譜柱、檢測器、信號記錄系統(tǒng)等部分組成,被廣泛用于生物醫(yī)學(xué)、環(huán)境化學(xué)、石油化工等領(lǐng)域中?! ?、柱壓高原因  (1)緩沖液鹽分如(乙酸銨等)沉積于柱內(nèi);  (2)樣品污染沉積。處理對于第一種情況先用40~50℃的純水,低速正向沖洗柱子,待柱壓逐漸下降后,相應(yīng)提高流速沖洗,柱壓大幅度下降后,用常溫純水沖洗,之后用純甲醇沖洗柱子30分鐘;對于第二種情況,由樣品的沉積引起污染的C18柱,和純水反向沖洗柱子,然后換成甲醇沖洗,接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定),再用換成甲醇沖洗,然后用純水沖洗,最后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上?! ?、氣泡溢出  流動相內(nèi)有氣泡,關(guān)閉泵,打開泄壓閥,打開purg鍵,清洗脫氣,氣泡不斷從過濾器冒出,進(jìn)入流動相,無論打開purge鍵幾次,都無法清除不斷產(chǎn)生的氣泡。原因過濾器長期沉浸于乙酸銨等緩沖液內(nèi),過濾器內(nèi)部由于霉菌的生長繁殖,形成菌團(tuán),阻塞了過濾器,緩沖液難以流暢地通過過濾器,空氣在泵的壓力作用下經(jīng)過濾器進(jìn)入流動相。處理過濾器浸泡于5%硝酸溶液中,超聲清洗幾分鐘即可;亦可將過濾器浸泡于5%硝酸溶液中12~36小時,輕輕震蕩幾次,再將過濾器用純水清洗幾次,打開泄壓閥,打開purge鍵清洗脫氣,如仍有氣泡不斷從過濾器冒出,繼續(xù)將過濾器浸泡于5%硝酸溶液中,如沒有氣泡不斷從過濾器中冒出,說明過濾器內(nèi)部的霉菌菌團(tuán)已被硝酸破壞,流動相可以流暢地通過過濾器。打開泄壓閥,打開泵,流速調(diào)至1.0~3.0ml/min,純水沖洗過濾器1小時左右。即可將過濾器清洗干凈。關(guān)閉泄壓閥,純甲醇沖洗半小時即可。  3、既無壓力指示,又無液體流過  (1)泵密封墊圈磨損;  (2)大量氣泡進(jìn)入泵體。處理對于第一種情況,更換密封墊圈;對于第二種情況,在泵作用的同時,用一個50ml的玻璃針筒在泵的出口處幫助抽出空氣?! ?、壓力波動大,流量不穩(wěn)定  原因系統(tǒng)中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物,使得兩者不能密封。處理工作中注意觀察流動相的量,保證不銹鋼濾器沉入儲液器瓶底,避免吸入空氣,流動相要充分脫氣。如為單向閥和閥座之間夾有異物,拆下單向閥,放入盛有丙酮的燒杯用超聲波清洗?! ?、出峰不佳,峰分叉  (1)色譜柱被污染;  (2)柱頭填料塌陷。處理對于第一種情況,先用純水反向沖洗柱子,然后換成甲醇沖洗,接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定),再換成甲醇沖洗,然后用純水沖洗,最后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。如沖洗后依然出峰不佳,則考慮第二種情況。對于第二種情況,擰開柱頭,檢查柱填料是否硬結(jié)或塌陷。去除硬結(jié)部分(污染的填料),裝入新填料,滴一滴甲醇,填料下陷,再填,用與柱內(nèi)徑相同的頂端平滑的不銹鋼桿壓緊,再填平,滴甲醇,再壓緊反復(fù)幾次,直至裝滿填平。柱頭用甲醇沖洗干凈,擦凈柱外壁的填料,擰緊柱頭,用純甲醇沖洗30分鐘以上。

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液相色譜儀 液相色譜儀五種故障問題解決方法_液相色譜儀

高效液相色譜儀高壓輸液系統(tǒng)由哪些組成?

  高效液相色譜儀高壓輸液系統(tǒng)由儲液器、溶劑吸濾器、高壓輸液泵、脫氣裝置和梯度洗脫裝置等組成。

  

        一、儲液器:  1~2L的玻璃瓶?! 《?、溶劑吸濾器:  采用Ni合金材質(zhì),孔約0.45um,防止顆粒物進(jìn)入泵內(nèi)。  三、高壓輸液泵:  1、要求: ?。?)流量準(zhǔn)確可調(diào),可調(diào)范圍寬。流動相流速為0.5~2mL/min,泵最大流量范圍為5~10mL/min。 ?。?)耐高壓,輸出壓力常達(dá)30~60MPa?! 。?)輸出流量穩(wěn)定。 ?。?)結(jié)構(gòu)材料應(yīng)耐化學(xué)腐蝕?! ?、類型: ?。?)恒壓泵?! 。?)恒流泵:恒流泵使用廣泛,有單活塞往復(fù)泵和雙活塞往復(fù)泵。  3、操作注意事項(xiàng):  (1)防止固體微粒進(jìn)入泵內(nèi)?! 。?)流動相不應(yīng)含有腐蝕性物質(zhì)?! 。?)防止儲液器內(nèi)的流動相用完?! 。?)不超過規(guī)定的最高壓力。 ?。?)流動相一般應(yīng)該先脫氣?! ∷摹⑻荻认疵撗b置:  1、等度洗脫:在一分析周期內(nèi)流動相組成保持恒定,適合分析組分?jǐn)?shù)目較少和性質(zhì)差別不大的樣品?! ?、梯度洗脫:在一個分析周期內(nèi)按一定程序連續(xù)變化流動相的濃度配比、極性、PH值和離子強(qiáng)度。可縮短分析時間,提高分離度,改善峰形,提高檢測靈敏度。用來分析組分?jǐn)?shù)目多和性質(zhì)相差較大樣品。  五、脫氣裝置:  將氣體從溶劑中除去,有離線超聲波振蕩脫氣、在線惰性氣體鼓泡吹掃脫氣和在線真空脫氣等裝置。

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高效液相色譜儀 高效液相色譜儀高壓輸液系統(tǒng)由哪些組成?_高效液相色譜儀

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