分光光度計(jì)的基本原理是:物質(zhì)在光的照射下會(huì)產(chǎn)生對(duì)光吸收的效應(yīng),而且物質(zhì)對(duì)光的吸收是具有選擇性的。各種不同物質(zhì)都具有其各自的吸收光譜。
因此不同波長(zhǎng)的單色光通過(guò)溶液時(shí)其光的能星就會(huì)被不同程度的吸收,光能量被吸收的程度和物質(zhì)的濃度有一定的比例關(guān)系,即符合比耳定律。
在使用可見(jiàn)分光光度計(jì)前先了解一下的操作規(guī)程沒(méi)有錯(cuò)。
開(kāi)機(jī)
1、開(kāi)機(jī)前，檢查電源插座是否接上;
2、啟動(dòng)電源開(kāi)關(guān)，儀器顯示"723C"
3、儀器經(jīng)自測(cè)后，按"MODE"鍵后再按"2"鍵，儀器顯示"DATA"
基本使用方法
1、按"GO TO λ"鍵，輸入設(shè)定波長(zhǎng);
2、四個(gè)比色皿，其中R位置放置參比試樣，其余三個(gè)放入待測(cè)試樣。將比色皿放入樣品池內(nèi)的比色皿架中，蓋上樣品池蓋;
3、將參比試樣推入光路，按"ABS%"鍵，使儀器自動(dòng)調(diào)零和置滿度;
4、然后將待測(cè)試樣推入光路，顯示試樣的吸光度值;
5、如果要想將待測(cè)試樣的數(shù)據(jù)打印出，只需按"START/STOP"鍵即可。
可見(jiàn)分光光度計(jì)的使用注意事項(xiàng)
每天使用結(jié)束后，應(yīng)仔細(xì)檢查樣品室內(nèi)是否有溶液溢出，若有溢出必須隨時(shí)用濾紙吸干;
儀器使用完畢，用防塵套罩住。
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分光光度法是指應(yīng)用分光光度計(jì)的分析方法，具有靈敏、準(zhǔn)確、快速及選擇性好等特點(diǎn)。
通常所測(cè)樣品溶液濃度下限可達(dá)10-6~10-5mol/L，適用于測(cè)定食品中的微量組分（如肉制品中的亞硫酸鹽、糖果中的二氧化硫等）。
原理
物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收
當(dāng)光束照射到物質(zhì)上時(shí)，光與物質(zhì)發(fā)生相互作用，產(chǎn)生反射、散射、吸收或透射。
若被照射的是均勻溶液，光的散射可以忽略。
溶液顏色的產(chǎn)生
當(dāng)一束白光通過(guò)某一有色溶液時(shí)，一些波長(zhǎng)的光被溶液吸收，另一些波長(zhǎng)的光則透過(guò)溶液。
透射光或反射光刺激人眼使人感到顏色的存在。
人把自身能感覺(jué)到的光定義為可見(jiàn)光。
在可見(jiàn)光區(qū)，不同波長(zhǎng)的光呈現(xiàn)不同的顏色，因此溶液的顏色由透射光的波長(zhǎng)所決定。
透射光與吸收光可組成白光，故稱這兩種光互為補(bǔ)色光，兩種顏色互為補(bǔ)色。
光吸收的本質(zhì)
當(dāng)一束光照射到某物質(zhì)或其溶液時(shí)，組成該物質(zhì)的分子、原子或離子與光子發(fā)生“碰撞”;
光子的能量就轉(zhuǎn)移到分子、原子或離子上，是這些粒子由最低能態(tài)（基態(tài)）躍遷到較高能太（激發(fā)態(tài)），這個(gè)作用稱為物質(zhì)對(duì)光的吸收。
被激發(fā)的粒子約在10-8s后回到基態(tài)，并以熱或熒光等形式釋放出能量。
分子、原子或離子具有不連續(xù)的量子化能級(jí)，僅當(dāng)照射光光子的能量hυ，與被照射物質(zhì)粒子的基態(tài)和激發(fā)態(tài)能量之差相當(dāng)時(shí)，才能發(fā)生吸收。
不同物質(zhì)微粒由于結(jié)構(gòu)不同而具有不同的量子化能級(jí)，其基態(tài)和激發(fā)態(tài)能量差也不相同。
所以物質(zhì)對(duì)光的吸收具有選擇性。
吸收曲線
吸收曲線，也稱為吸收光譜，描述了物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)的光的吸收能力。
將不同波長(zhǎng)的光透過(guò)某一固定濃度和厚度的有色溶液，測(cè)量每一波長(zhǎng)下有色溶液對(duì)光的吸收程度（即吸光度）；
然后以波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)作圖，繪制的曲線即為吸收曲線。
不同濃度的同一物質(zhì)，在吸收峰附近的吸光度隨著濃度增加而增大，但最大吸收波長(zhǎng)不變。
若在最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，則靈敏度最高。
因此，吸收曲線是分光光度法中選擇測(cè)定波長(zhǎng)的重要依據(jù)。
光吸收基本定律
即朗伯-比爾定律：
當(dāng)一束平行單色光通過(guò)液層厚度為b的有色溶液時(shí)，溶質(zhì)吸收了光能，光的強(qiáng)度就要減弱。
溶液的濃度越大，通過(guò)的液層厚度越大，入射光越強(qiáng)，則光被吸收的越多，光強(qiáng)度的減弱也越顯著。
該定律是紫外可見(jiàn)分光光度法等各類吸光光度法定量分析的依據(jù)，是由實(shí)驗(yàn)觀察得到的，不僅適用于溶液，也適用于其他均勻非散射的吸光物質(zhì)。
A=lg(I/I0)=εbc
A-吸光度；
I0-入射光強(qiáng)度，cd；
I-透射光強(qiáng)度，cd；
ε-吸光系數(shù)，L/(mol˙cm)；
b-液層厚度（光程長(zhǎng)度），cm；
c-有色溶液的濃度，mol/L。
其物理意義為：
當(dāng)一束平行單色光通過(guò)單一均勻、非散射的吸光物質(zhì)溶液時(shí)，溶液的吸光度與溶液濃度和液層厚度的乘積成正比。
式中ε是吸光物質(zhì)在特定波長(zhǎng)和溶劑的情況下的一個(gè)特征常數(shù)，數(shù)值上等于濃度為1mol/L的吸光物質(zhì)在1cm光程中的吸光度。
ε是吸光物質(zhì)吸光能力的量度，ε值越大，方法的靈敏度越高。
由實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算ε時(shí)，常以被測(cè)物質(zhì)的總濃度代替吸光物質(zhì)的濃度，實(shí)際上時(shí)表觀摩爾吸光系數(shù)。
在多組分體系中，如果各種吸光物質(zhì)之間沒(méi)有相互作用，體系的總吸光度等于各組分吸光度之和，即吸光度具有加和性。
透光度T是透射光強(qiáng)度I與入射光強(qiáng)度I0之比，即：
T=I/I0
因此：A=lg(1/T)
先檢查保險(xiǎn)絲是否松動(dòng)或熔斷，再檢查電源線是否斷路或接觸不良。正常時(shí)，電源進(jìn)線與機(jī)殼間的絕緣電阻應(yīng)大于20MΩ。
二、故障現(xiàn)象：空心陰極燈點(diǎn)不亮。
可能是燈電源已壞或未接通；燈頭接線斷路或燈頭與燈座接觸不良?？煞謩e檢查燈電源、連線及相關(guān)接插件。
三、故障現(xiàn)象：空心陰極燈內(nèi)有跳火放電現(xiàn)象。
這是燈陰極表面有氧化物或雜質(zhì)的原因。可加大燈電流到十幾個(gè)毫安，直到火花放電現(xiàn)象停止。若無(wú)效，需換新燈。
四、故障現(xiàn)象：空心陰極燈輝光顏色不正常。
這是燈內(nèi)惰性氣體不純?？稍诠ぷ麟娏飨路聪蛲娞幚?，直到輝光顏色正常為止。
五、故障現(xiàn)象：輸出能量過(guò)低。
可能是波長(zhǎng)超差；陰極燈老化；外光路不正；透鏡或單色器被嚴(yán)重污染；放大器系統(tǒng)增益下降等。若是在短波或者部分波長(zhǎng)范圍內(nèi)輸出能量較低，則應(yīng)檢查燈源及光路系統(tǒng)的故障。若輸出能量在全波長(zhǎng)范圍內(nèi)降低，應(yīng)重點(diǎn)檢查光電倍增管是否老化，放大電路有無(wú)故障。
六、故障現(xiàn)象：電氣回零不好。
這可能由如下原因造成：
1、陰極燈老化。更換新燈。
2、廢液不暢通，
3、霧化室內(nèi)積水。應(yīng)及時(shí)排除。
4、燃?xì)獠环€(wěn)定，使測(cè)定條件改變?？烧{(diào)節(jié)燃?xì)?，使之符合條件。
5、陰極燈窗口及燃燒器兩側(cè)的石英窗或聚光鏡表面有污垢。逐一檢查清除。
6、毛細(xì)管太長(zhǎng)?？杉羧ザ嘤嗟拿?xì)管。
七、故障現(xiàn)象：靈敏度低。
可能由如下原因造成
1、陰極燈工作電流大，造成譜線變寬，產(chǎn)生自吸收。應(yīng)在光源發(fā)射強(qiáng)度滿足要求的情況下，盡可能采用低的工作電流。
2、霧化效率低。若是管路堵塞的原因，可將助燃?xì)獾牧髁块_(kāi)大，用手堵住噴嘴，使其暢通后放開(kāi)。若是撞擊球與噴嘴的相對(duì)位置沒(méi)有調(diào)整好，則應(yīng)調(diào)整到霧呈煙狀液粒很小時(shí)為較佳。
3、燃?xì)馀c助燃?xì)庵冗x擇不當(dāng)。一般燃?xì)馀c助燃?xì)庵刃∮跒樨氀?，介于和之間為中焰，大于為富焰。
4、燃燒器與外光路不平行。應(yīng)使光軸通過(guò)火焰中心，縫與光軸保持平行。
5、分析譜線沒(méi)找準(zhǔn)?？蛇x擇較靈敏的共振線作為分析譜線。
6、樣品及標(biāo)準(zhǔn)溶液被污染或存放時(shí)間過(guò)長(zhǎng)變質(zhì)。立即將容器沖洗干凈，重新配制。
八、故障現(xiàn)象：穩(wěn)定性差。
可能由如下原因造成
1、儀器受潮或預(yù)熱時(shí)間不夠。可用熱風(fēng)機(jī)除潮或按規(guī)定時(shí)間預(yù)熱后再操作使用。
2、燃?xì)饣蛑細(xì)鈮毫Σ环€(wěn)定。若不是氣源不足或管路泄漏的原因，可在氣源管道上加一閥門(mén)控制開(kāi)關(guān)，調(diào)穩(wěn)流量。
3、廢液流動(dòng)不暢。停機(jī)檢查，疏通或更換廢液管。
4、火焰高度選擇不當(dāng)，造成基態(tài)原子數(shù)變化異常，致使吸收不穩(wěn)定。
5、光電倍增管負(fù)高壓過(guò)大。雖然增大負(fù)高壓可以提高靈敏度，但會(huì)出現(xiàn)噪聲大，測(cè)量穩(wěn)定性差的問(wèn)題。只有適當(dāng)降低負(fù)高壓，才能改善測(cè)量的穩(wěn)定性。
九、故障現(xiàn)象：背景校正噪聲大。
1、光路未調(diào)到較佳位置。重新調(diào)整氘燈與空心陰極燈的位置，使兩者光斑重合。
2、高壓調(diào)得太大。適當(dāng)降低氘燈能量，在分析靈敏度允許的情況下，增加狹縫寬度。
3、原子化溫度太高?？蛇x用適宜的原子化條件。
十、故障現(xiàn)象：校準(zhǔn)曲線線性差。
1、光源燈老化或使用高的燈電流，引起分析譜線的衰弱或擴(kuò)寬。應(yīng)及時(shí)更換光源燈或調(diào)低燈電流。
2、狹縫過(guò)寬，使通過(guò)的分析譜線超過(guò)一條?？蓽p小狹縫。
3、測(cè)定樣品的濃度太大。由于高濃度溶液在原子化器中生成的基態(tài)原子不成比例，使校準(zhǔn)曲線產(chǎn)生彎曲。因此，需縮小測(cè)量濃度的范圍或用靈敏度較低的分析譜線。
十一、故障現(xiàn)象：檢出限偏高。
1、標(biāo)尺擴(kuò)展不夠。應(yīng)擴(kuò)大至合適值。
2、積分時(shí)間太短。可加長(zhǎng)至適當(dāng)值。
3、分析靈敏度偏低。按前面故障現(xiàn)象的處理方法逐一分析解決。
4、毛細(xì)管堵塞或老化腐蝕。應(yīng)清理或更換毛細(xì)管。
5、氣路不穩(wěn)定。查看氣路系統(tǒng)中有無(wú)漏氣、積水等問(wèn)題；檢查氣源是否穩(wěn)定。
十二、故障現(xiàn)象：產(chǎn)生回火。
發(fā)生這種現(xiàn)象是因氣流速度小于燃燒速度?；鼗饡r(shí)極易引起火災(zāi)和爆炸。因此，在突然停電或助燃?xì)鈮嚎s機(jī)出現(xiàn)故障，以及發(fā)現(xiàn)廢液排出管水封不好或霧化室中的安全塞松動(dòng)漏氣時(shí)，或者氣路長(zhǎng)時(shí)間不更換出現(xiàn)老化時(shí)，應(yīng)立即關(guān)閉燃?xì)鈿饴?，確保人身和財(cái)產(chǎn)的安全。然后將儀器各控制開(kāi)關(guān)恢復(fù)到開(kāi)啟前的狀態(tài)后方可檢查產(chǎn)生回火的原因。
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