液相色譜儀是一種常見的色譜分析方法，與氣相色譜相比液相色譜可以在常溫中操作，且不受樣品揮發(fā)度和熱穩(wěn)定性的限制。
這使得液相色譜非常適合相對分子量較大，難汽化；
不易揮發(fā)或?qū)崦舾械奈镔|(zhì)、離子型化合物和高聚物的分離分析。
然而要選購一臺品質(zhì)優(yōu)良的液相色譜并不容易。
液相色譜儀的指標(biāo)很多，有關(guān)于泵的、關(guān)于檢測器的、關(guān)于色譜柱的……不過，從選購角度考慮；
可以優(yōu)先考慮噪音、漂移、最小檢測濃度、定性定量重復(fù)性等主要技術(shù)指標(biāo)。
當(dāng)然，這些指標(biāo)都要放在系統(tǒng)、回路里去看去比較。
1.噪音
噪音指由儀器的電器元件、溫度波動、電壓的線性脈沖以及其他非溶質(zhì)作用產(chǎn)生的高頻噪聲和基線的無規(guī)則波動產(chǎn)生的聲音。
噪音的大小直接關(guān)系到儀器的檢測靈敏度，噪音越大檢測的靈敏度就越低。
對于檢測低含量的樣品就要求儀器的噪音越小越好，否則噪音過大將會導(dǎo)致基線不穩(wěn)，甚至影響分析結(jié)果；
2.最小檢測濃度(最小檢測限)
最小檢測濃度是反映儀器靈敏度的重要參數(shù)。
根據(jù)公式CL=2×Nd×C/H(CL：最小檢測濃度Nd：噪音C：樣品濃度最小檢測濃度H：樣品峰高)；
最小檢測濃度是和噪音成正比的，噪音越大，最小檢測濃度就越大，靈敏度就越低。
如果選購的儀器回避了這個指標(biāo)，說明他們不愿在最小檢測濃度的基礎(chǔ)上去比較噪音；
3.漂移
漂移是指儀器穩(wěn)定后一段時間內(nèi)基線漂離原點的距離，通常用來衡量儀器穩(wěn)定快慢。
高品質(zhì)的儀器能在較短的時間內(nèi)達(dá)到穩(wěn)定，從而在一定程度上提高分析效率；
4.定性定量重復(fù)性
主要是考核儀器穩(wěn)定性的指標(biāo)，這對于分析樣品來說是非常重要的。
好的儀器其穩(wěn)定性應(yīng)該是十分不錯的，這就要求多次進樣保留時間及含量的一致性，這樣做出來的結(jié)果才能使人信服。
雖然這些指標(biāo)都屬于檢測器，但是就像前面所說的，條件是要放在整個回路和系統(tǒng)里去看去比較。
例如：泵的脈動會直接影響噪音指標(biāo)、泵的流量準(zhǔn)確度指標(biāo)，以及密封性不好也會影響相關(guān)指標(biāo)。
所以要系統(tǒng)地看指標(biāo)才可以反應(yīng)出儀器的一些真實水平。
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液相色譜儀是指利用混合物在液-固或不互溶的兩種液體之間分配比的差異，對混合物進行先分離，而后分析鑒定的儀器。
基本介紹
液相色譜儀根據(jù)固定相是液體或是固體，又分為液-液色譜(LLC）及液-固色譜(LSC）。現(xiàn)代液相色譜儀由高壓輸液泵、進樣系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、色譜柱、檢測器、信號記錄系統(tǒng)等部分組成。與經(jīng)典液相柱色譜裝置比較，具有高效、快速、靈敏等特點。
液相色譜儀使用范圍
應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)、環(huán)境化學(xué)、石油化工等部門。
應(yīng)用范疇
高效液相色譜法只要求樣品能制成溶液,不受樣品揮發(fā)性的限制,流動相可選擇的范圍寬,固定相的種類繁多,因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質(zhì)。
與試樣預(yù)處理技術(shù)相配合,HPLC所達(dá)到的高分辨率和高靈敏度,使分離和同時測定性質(zhì)上十分相近的物質(zhì)成為可能,能夠分離復(fù)雜相體中的微量成分。隨著固定相的發(fā)展,有可能在充分保持生化物質(zhì)活性的條件下完成其分離HPLC成為解決生化分析問題比較為有前途的方法。
由于HPLC具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復(fù)利用,流出組分易收集等優(yōu)點,因而被廣泛應(yīng)用到生物化學(xué)、食品分析、醫(yī)藥研究、環(huán)境分析、無機分析等各種領(lǐng)域。
高效液相色譜儀與結(jié)構(gòu)儀器的聯(lián)用是一個重要的發(fā)展方向。液相色譜-質(zhì)譜連用技術(shù)受到普遍重視,如分析氨基甲酸酯農(nóng)藥和多核芳烴等;液相色譜-紅外光譜連用也發(fā)展很快如在環(huán)境污染分析測定水中的烴類,海水中的不揮發(fā)烴類,使環(huán)境污染分析得到新的發(fā)展。
在器微型化過程中,尺寸的縮小不僅要考慮材料的性質(zhì)和制造上的可能,還要從原理上考慮尺寸縮小后所帶來的一系列問題。這些問題包括：
（1）分離系統(tǒng)中被分配的分子個數(shù)是否大于106,因為只有大于106才能得到符合統(tǒng)計結(jié)果的數(shù)據(jù);
?。?）因分離通道尺寸縮小,自然提高了單位柱長的效率,但是總長度的減少可能使總分離效能遠(yuǎn)低于常規(guī);
（3）對于質(zhì)量敏感型檢測器,經(jīng)過分離柱后單位時間內(nèi)到達(dá)檢測器的分子個數(shù)是否滿足檢測原理所要求的最小數(shù)目;
?。?）對于濃度型檢測器,到達(dá)檢測池的分子數(shù)目是否能滿足符合統(tǒng)計規(guī)律的分子數(shù)目;
（5）檢測微區(qū)內(nèi)的外加能量密度是否超過被檢測分子所能承受的極限;
?。?）微量流動相的輸送與控制;
?。?）因材料尺寸的縮小,表面層氧化或腐蝕對器件功能的影響。最后,色譜儀器微型化所帶來的好處不僅僅是單位長度分離效率的提高,而是總分離能力的保持甚至提高;不僅僅是分離系統(tǒng)或某個部件的微型化,而是整體的微型化;不僅僅是質(zhì)量靈敏度的提高,而是濃度靈敏度的保持或提高;不僅僅是能量和物質(zhì)的低消耗,而是使用的方便和友好;不僅僅是整體尺寸的縮小,更重要的是整機的穩(wěn)定性和可靠性的提高!
下面分別討論上述7個問題。
?。?）色譜分離的基本原理是有符合統(tǒng)計規(guī)律數(shù)目的分子群經(jīng)過不斷的兩相分配和分子碰撞,利用其分配系數(shù)的差異來達(dá)到分離的目的。這是一個宏觀參數(shù)。當(dāng)分子數(shù)目低于這個數(shù)目時,就會偏離統(tǒng)計規(guī)律而出現(xiàn)所謂的漲落現(xiàn)象。分子數(shù)目越少,漲落現(xiàn)象越嚴(yán)重。當(dāng)分子數(shù)目低于103個時,已沒有準(zhǔn)確的色譜保留規(guī)律,因此也就失去了宏觀意義下的分離規(guī)律。一般地,保證符合統(tǒng)計規(guī)律的分子數(shù)目是106個。
例如內(nèi)徑30μm的填充毛細(xì)管液相色譜（μ2HPLC）柱或毛細(xì)管電泳柱,若分別保持10萬/m和40萬/m的分離柱效,直接進樣時不過載的進樣量分別為40pL（1pL=10-12L）和115pL,分子總數(shù)分別是112×1012～112×1014和415×1010～415×1012。樣品中含量低至1～0.01μL/L（對μ2HPLC）或低至20～0.2μL/L（對CE）的組分就不能滿足106個分子的數(shù)目要求,分離過程中就會出現(xiàn)上述問題。所以,上述分離系統(tǒng)對濃度高于這個指標(biāo)的樣品分離時可以有重復(fù)的保留時間。如果考慮檢測方面的限制[參見下述的（3）和（4）>,痕量分析中用粗內(nèi)徑的填充色譜柱總是優(yōu)于微型色譜柱。
為了能進行痕量分析,微型分離分析系統(tǒng)往往采用樣品預(yù)濃縮技術(shù)以補償濃度靈敏度的不足。但為此而發(fā)展的技術(shù)也同樣適用于常規(guī)分離分析系統(tǒng),同樣可以提高常規(guī)儀器的靈敏度,除非樣品量受到嚴(yán)格限制。
?。?）45年前的色譜柱理論已經(jīng)指出,毛細(xì)管開口柱的內(nèi)徑越小,或填充柱的填料粒度越小,色譜柱的分離效率就越高。毛細(xì)管電泳亦然,只是理論上有些不同,如有散熱問題和塞子流型的特點。微型化中普遍采用的細(xì)內(nèi)徑分離柱并不是微型儀器的專利,所能達(dá)到的高柱效也不是最近才認(rèn)識到的。如果在現(xiàn)有常規(guī)儀器中使用這種等效內(nèi)徑的色譜柱,再適當(dāng)改進進樣技術(shù)和檢測器,就會有與微型色譜或芯片電泳同樣的單位柱長的柱效,同時還可以有極高的總分離效能,因為常規(guī)儀器中分離柱的長度很少受限,而高的分離效能才是真正有意義的。所以,微型色譜和芯片毛細(xì)管電泳用短分離柱而有快速分離的特點,并不是它真正的優(yōu)點,因為用同樣尺寸的分離柱可以分別在常規(guī)色譜和毛細(xì)管電泳上實現(xiàn)同樣的效果。
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