液相色譜儀根據固定相是液體或是固體,又分為液-液色譜(LLC)及液-固色譜(LSC)?,F代液相色譜儀由高壓輸液泵、進樣系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、色譜柱、檢測器、信號記錄系統(tǒng)等部分組成。與經典液相柱色譜裝置比較,具有高效、快速、靈敏等特點。
液相色譜儀操作步驟:
1. 首先對流動相進行過濾,根據需要選擇不同的濾膜,一般為有機系和水系,常用的孔徑為0.20um和0.45um。
2. 對抽濾后的流動相進行超聲脫氣10-20分鐘。
3. 正常情況下,儀器首先用甲醇沖洗10-20分鐘,然后再進入測試用流動相(如流動相為緩沖試劑,則要二次重蒸水沖洗10-20分鐘,直至色譜柱中有機相沖凈為止) 。
4. 一般情況下,流動相沖洗20-30分鐘后,儀器方可穩(wěn)定,重要的是儀器基線走后,方可進樣測試。
5. 同時進兩針標樣,將其結果相比較,其結果的比值在0.98-1.02之間后,就可以正式進行樣品的測試了。
6. 樣品測試結束后,就要進行色譜儀及色譜柱的清洗和維護。如流動相為緩沖試劑,同樣也要用重蒸水清洗10-20分鐘,方可用有機相進行保護,否則,有損色譜柱。
7). 關機時,先關計算機,再關液相色譜。
液相色譜注意事項:
1. 流動相均需色譜純度,水用20M的去離子水。脫氣后的流動相要小心振動盡量不引起氣泡。
2. 柱子是非常脆弱的,第一次做的方法,先不要讓液體過柱子。
3. 所有過柱子的液體均需嚴格的過濾。
4. 壓力不能太大,可以不要超過150kgf/cm2 .
5. 因為緩沖試劑遇有機溶劑,會結晶,有損色譜柱,所以,每次由有機相變流動相或流動相變有機相均需用蒸餾水清洗。
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高效液相色譜儀是實驗中常見的儀器之一,色譜柱的靈敏度是確保實驗準確性的重要原因,那么當色譜柱的靈敏度不夠時,我們該如何去解決呢?應該從以下幾個方面去分析:
1、樣品量不足:解決辦法為增加樣品量
2、樣品未從柱子中流出:可根據樣品的化學性質改變流動相或柱子
3、樣品與檢測器不匹配:根據樣品化學性質調整波長或改換檢測器
4、檢測器衰減太多:調整衰減即可。
5、檢測器時間常數太大:解決辦法為降低時間參數
6、檢測器池窗污染:解決辦法為清洗池窗。
7、檢測池中有氣泡:解決辦法為排氣。
8、記錄儀測壓范圍不當:調整電壓范圍即可。
9、流動相流量不合適:調整流速即可。
10、檢測器與記錄儀超出校正曲線:解決辦法為檢查記錄儀與檢測器,重作校正曲線。