色譜柱用久后常出現(xiàn)柱壓升高，柱效降低，峰形畸變，保留時間改變等變化，如不采取適當措施，色譜柱將無法再使用，縮短色譜柱的使用壽命。在高效液相色譜儀的使用中，保持高效液相色譜柱的柱效、容量和滲透特性，延長柱子的使用壽命非常重要。

    1、流動相對色譜柱的損害因素

    顆粒雜質:目前廣泛使用的柱填料直徑多在10um以下，微小的顆粒雜質很容易使柱子發(fā)生堵塞，因此使用的溶劑應當過濾，柱子上端接頭應當裝微孔過濾片以阻擋顆粒物進入柱中。

    水溶液中的微生物:以水溶液為流動相時，應防止細菌的生長，五氯酚、疊氮化鈉、辛酸等能防止細菌生長。當用水溶液或有機酸緩沖液保護柱子時，一些厭氧霉菌可能在色譜柱中滋生，堵塞固定相顆粒間的空隙。

    pH值:對硅膠基鍵合相填料，水溶液pH值不可超過2-7.5這一范圍，當pH>8時，硅膠會釋出

    生成絮狀物堵塞柱子，且難以復原，柱效很快降低，甚至完全失效。

    鹽類析出:當在流動相緩沖液中加入和水混溶的有機溶劑時，其中的鹽類溶解度下降，可析出鹽類沉淀，堵塞柱子;加入粘度不同的樣品溶液也可能發(fā)生類似現(xiàn)象。所以緩沖液中鹽的濃度宜低，樣品提取液的組成應和流動相匹配。

    2、樣品對色譜柱的損害因素

    雜質堵塞:樣品中的微粒同樣會使柱子堵塞，樣品也應進行過濾處理。

    樣品組分的不可逆吸附:通常被吸附的組分有蛋白質、醣等，可以采取加裝保護柱，或使用適應的溶劑反沖來處理。常用溶劑有四氫呋喃(適用于溶解有機高聚物和工業(yè)樣品中的焦油)、高濃度的脲或鹽酸胍溶液(使蛋白質改性而洗脫)、高離子強度的磷酸鹽緩沖液(pH=7，適合反相柱和離子交換柱，可除去蛋白質和醣等)。

    樣品組分與固定相反應:這種反應對NH2柱的影響較嚴重，NH2易和酐、酮形成希夫(Schiff)縮合而減少活性點，使保留時間縮短，因此羰基化合物樣品和流動相(如丙酮、乙酸乙酯等)不宜使用NH2柱。

    活性點被覆蓋:由于固定相吸附樣品中的組成或雜質而使活性點被覆蓋，在柱壓升高的同時保留時間減少，將樣品過濾或使用萃取分離柱(對大分子有機物如蛋白質、白細胞等)效果較好。

    3、色譜柱固定相的化學變化

    色譜柱固定相分解、活性基團變性以及鍵合相基團脫落會使保留時間顯著變化。

    1、鍵合相基團脫落

    絕大多數(shù)鍵合相都是通過硅氧硅鍵(Si-O-Si)連接在硅基質上，形成帶有機基團的固定相Si-O-Si-R(R為、G18H37、C8H17、CnH2n+1)。硅氧硅鍵可在水溶液中水解而斷裂，使鍵合相基團脫落，對C2和NH2柱鍵合相基團脫落不可忽視。為減少或防止基團脫落，可增加流動相的有機溶劑量，降低離子強度和pH值，對基團已脫落的固定相，可用合適的硅烷試劑再生。

    2、固定相分解或活性基團變性

    例如氰基柱的保留時間顯著縮短，但鍵合相中C、H、N的百分含量并無大變化，證明未發(fā)生—CN水解成-COOH反應，而是形成了衍生物。在硅上增加烷基可減少水解。

    4、高效液相色譜柱的保養(yǎng)

    色譜柱在使用一段時間后，常遇到柱子受污染，柱效下降的問題，采用適當?shù)姆椒▽ιV加以保護和再生，能夠延長色譜柱的使用壽命。