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氣相色譜柱的選擇方法 色譜柱是如何工作的

時(shí)間:2020-07-02    來源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     
【導(dǎo)讀】氣相色譜柱的分離效果主要取決于其固定相,柱長度,柱內(nèi)徑,液膜厚度這幾個(gè)因素,從原理上講,這幾個(gè)因素相同的柱子,其分離效果是完全一樣的。1)柱長度的選擇分



    氣相色譜柱的分離效果主要取決于其固定相,柱長度,柱內(nèi)徑,液膜厚度這幾個(gè)因素,從原理上講,這幾個(gè)因素相同的柱子,其分離效果是完全一樣的。
    1)柱長度的選擇
    分辨率與柱長的平方根成正比。在其他條件不變的情況下,為取得加倍的分辨率需有4倍的柱長。較短的柱子適于較簡(jiǎn)單的樣品,尤其是由那些在結(jié)構(gòu)、極性和揮發(fā)性上相差較大的組分組成的樣品。
    一般來說:
    15m的短柱用于快速分離較簡(jiǎn)單的樣品,也適于掃描分析;
    30m的色譜柱是常用的柱長,大多數(shù)分析在此長度的柱子上完成;
    50m、60m或更長的色譜柱用于分離比較復(fù)雜的樣品。
    應(yīng)該注意,柱長增加分析時(shí)間也增加。
    2)柱內(nèi)徑的選擇
    柱徑直接影響柱子的效率、保留特性和樣品容量。小口徑柱比大口徑柱有更高柱效,但柱容量更小。
    0.25mm:具有較高的柱效,柱容量較低。分離復(fù)雜樣品較好。
    0.32mm:柱效稍低于0.25mm的色譜柱,但柱容量約高60%。
    0.53mm:具有類似于填充柱的柱容量,可用于分流進(jìn)樣,也可用于不分流進(jìn)樣,當(dāng)柱容量是主要考慮因素時(shí)(如痕量分析),選擇大口徑毛細(xì)管柱較為合適。
    3)液膜厚度的選擇
    液膜厚度影響柱子的保留特性和柱容量。厚度增加,保留也增加。
    0.1~0.2m:薄液膜厚度的毛細(xì)管柱比厚液膜的毛細(xì)管柱洗脫組分快,所需柱溫度低,且高溫下柱流失較小,適用高沸點(diǎn)的化合物的分析。
    0.25~0.5m:常用的液膜厚度。
    厚液膜:對(duì)分析低沸點(diǎn)的化合物較為有利。
    4)固定相的選擇
    不同的固定相對(duì)不同的分析物的影響不同,根據(jù)相似相溶原理,性質(zhì)越相近,固定相對(duì)其的流動(dòng)阻力越大,其保留時(shí)間越長.色譜柱就是通過這個(gè)原理將不同性質(zhì)的混合物相互分開的。





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  聚合物基質(zhì)色譜柱具有相當(dāng)強(qiáng)的硬度,有無孔和有孔兩種規(guī)格。該固定相中含有苯基官能團(tuán),可與待測(cè)物發(fā)生疏水相互作用。聚合物基質(zhì)色譜柱廣泛用于各種不同基質(zhì)中糖分子、糖醇和其他水溶性物質(zhì)的分離。Carbo-H可以用來分析有機(jī)酸及利巴韋林等物質(zhì),Carbo-Ca可以用來分離樹膠醛糖、阿糖醇等糖類。聚合物基質(zhì)色譜柱采用聚合物基質(zhì)填料,色譜柱化學(xué)穩(wěn)定性好,壽命長,分離效果隨時(shí)間變化小。能用堿性溶液進(jìn)行清洗再生。適用于蒸發(fā)光散射檢測(cè)器、電霧化檢測(cè)器以及LC/MS。
  正確的使用聚合物基質(zhì)色譜柱是極其重要的,并且對(duì)液相分析非常有幫助的。接下來的文章是一些使用、清洗和保存液相聚合物基質(zhì)色譜柱的指導(dǎo)。這些指導(dǎo)根據(jù)兩方面來分的,一方面是根據(jù)聚合物基質(zhì)色譜柱的基質(zhì)(硅膠,聚合物或者其他),另一方面是表面鍵和的化學(xué)固定相。
  聚合物基質(zhì)色譜柱采用純聚合物基材,因此具有的耐緘性(PH范圍2-13),適用于帶有芳香環(huán)以及不飽和化合物的分離/純化。 此類柱提供了廣范的溶劑的選擇,pH范圍可叢1-13。聚合物C18從親水的甲基丙烯酸酯鍵合C18官能團(tuán),利用親水的聚甲基丙烯酸酯載體鍵合ODS性能相似于硅膠鍵合ODS甲基丙烯酸酯在聚合前就用C18官能團(tuán)化,因此有較大的重現(xiàn)性沒有硅醇基和金屬雜質(zhì),有用的顆粒度為6,10,50μ在pH 1-13間穩(wěn)定。和所有的標(biāo)準(zhǔn)的反相溶劑都相容。
  聚合物基質(zhì)色譜柱在pH2~12范圍內(nèi)呈現(xiàn)出較高的化學(xué)穩(wěn)定性,使其可以在堿性條件下被使用。較寬的pH范圍還可以使用多堿性化合物在非帶電形式下得到分析,減少了二次相互作用發(fā)生進(jìn)而改善分析峰形。由于二次相互作用的降低,聚合物基質(zhì)色譜柱大大改善了對(duì)肽和蛋白質(zhì)的回收。

色譜柱的安裝

  (1)拆開柱包裝盒,確認(rèn)色譜柱的類型、 尺寸、出廠日期以及柱內(nèi)貯存的溶劑。

 ?。?)擰下柱兩端接頭的密封堵頭放回包裝盒供備用。

  (3)按柱管上標(biāo)示的流動(dòng)相流向,將色譜柱的入口端通過連接管與進(jìn)樣閥出口相連接(如條件允許,建議在柱前使用保護(hù)柱);柱的出口與檢測(cè)器連接。連接管是外徑為1.57mm、內(nèi)徑為0.1-0.3mm的不銹鋼管。連接管的兩端均有空心螺釘及密封用壓環(huán)。在接管時(shí)一定要設(shè)法降低柱外死體積。連接管通過空心螺釘、壓環(huán)后盡量用力插到底,然后順時(shí)針擰緊空心螺釘,直到擰不動(dòng)為止,再用扳手繼續(xù)順時(shí)針擰1/4-1/2圈,切記不要用力過大。如色譜柱通過流動(dòng)相加壓后有漏液現(xiàn)象,請(qǐng)用扳手繼續(xù)順時(shí)針擰1/4圈,直至不漏液為止。

色譜柱的儲(chǔ)存:

  1.防止緩沖溶液和水溶液流動(dòng)相產(chǎn)生微生物,做到流動(dòng)相用多少配多少,或在水流動(dòng)相中加200ppm的疊氮鈉以抑制細(xì)菌成長(一定當(dāng)心其毒性和潛在的爆炸性);或在流動(dòng)相中加20%的有機(jī)改性劑,也可抑制微生物生長,有機(jī)改性劑還有助于流動(dòng)相脫氣。

  2.盡可能將色譜柱貯存于100%有機(jī)溶劑(乙晴比較好)中,避免在緩沖溶液中保存。

  3.使用緩沖溶液后的色譜柱,應(yīng)用15~20倍柱體積的不含緩沖劑的同種水—有機(jī)溶劑流動(dòng)相沖洗色譜柱,后換成100%有機(jī)溶劑儲(chǔ)存。

  4.避免用純凈水沖洗鍵合致密的C18柱。

  5.將色譜柱的兩端用堵頭擰好,以免柱床填料干裂。



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