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選擇液相色譜儀的方法 液相色譜如何做好保養(yǎng)

時(shí)間:2020-07-03    來(lái)源:儀多多儀器網(wǎng)    作者:儀多多商城     
【導(dǎo)讀】與比重計(jì)相關(guān)儀器液相色譜儀是由檢測(cè)器、輸液泵、進(jìn)樣器、柱溫箱、混合器、色譜柱等部分組成。判斷液相色譜儀的指標(biāo)有噪音,漂移,最小檢測(cè)濃度,定性定量重復(fù)性等



    與比重計(jì)相關(guān)儀器液相色譜儀是由檢測(cè)器、輸液泵、進(jìn)樣器、柱溫箱、混合器、色譜柱等部分組成。判斷液相色譜儀的指標(biāo)有噪音,漂移,最小檢測(cè)濃度,定性定量重復(fù)性等。

    1、液相色譜儀噪音是指由液相色譜儀的電器元件、溫度波動(dòng)、電壓的線性脈沖以及其他液相色譜儀非溶質(zhì)作用產(chǎn)生的高頻噪聲和基線的無(wú)規(guī)則波動(dòng)。噪音的大小直接關(guān)系到液相色譜儀檢測(cè)器的檢測(cè)靈敏度,噪音越大,檢測(cè)的靈敏度就越低。

    2、液相色譜儀檢測(cè)器最小檢測(cè)度(也稱(chēng)檢測(cè)限)是考核液相色譜儀檢測(cè)器靈敏度的重要參數(shù)指標(biāo)。CL=2×Nd×C/H(CL:液相色譜儀最小檢測(cè)濃度Nd:噪音C:液相色譜儀樣品濃度最小檢測(cè)濃度H:樣品峰高)。

    3、液相色譜儀檢測(cè)器漂移是指儀器穩(wěn)定后一段時(shí)間內(nèi)基線漂離液相色譜儀基線原點(diǎn)的距離,通常用來(lái)衡量液相色譜儀穩(wěn)定快慢。高品質(zhì)的液相色譜儀能在較短的時(shí)間內(nèi)達(dá)到穩(wěn)定,從而在一定程度上提高了液相色譜儀分析效率。

    4、液相色譜儀定性、定量重復(fù)性主要是研判液相色譜儀穩(wěn)定性的指標(biāo),這對(duì)于分析液相色譜儀樣品來(lái)說(shuō)是非常重要的。好的液相色譜儀其穩(wěn)定性應(yīng)該是十分優(yōu)秀的,這就要求多次液相色譜儀進(jìn)樣保留時(shí)間及含量的一致性,這樣做出來(lái)的液相色譜儀檢測(cè)結(jié)果才能準(zhǔn)確使人信服。

    5、液相色譜儀操作方便性無(wú)論是對(duì)新手還是成熟的用戶(hù)都是很重要的。色譜儀自動(dòng)化程度越高操作越簡(jiǎn)單,越有利于提高液相色譜儀分析效率,同時(shí)也為以后液相色譜儀分析方法的拓展提供有力。






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    一、液相色譜儀峰分叉怎么回事?

  造成這種情況的原因一般是色譜柱被污染,或柱頭填料塌陷導(dǎo)致的。

  對(duì)于*種情況,先用純水反向沖洗柱子,然后換成甲醇沖洗,接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時(shí)間的長(zhǎng)短由樣品污染的情況而定),再換成甲醇沖洗,然后用純水沖洗,zui后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。如沖洗后依然出峰不佳,則考慮第二種情況。

  對(duì)于第二種情況,擰開(kāi)柱頭,檢查柱填料是否硬結(jié)或塌陷。去除硬結(jié)部分(污染的填料),裝入新填料,滴一滴甲醇,填料下陷,再填,用與柱內(nèi)徑相同的頂端平滑的不銹鋼桿壓緊,再填平,滴甲醇,再壓緊反復(fù)幾次,直至裝滿(mǎn)填平。柱頭用甲醇沖洗干凈,擦凈柱外壁的填料,擰緊柱頭,用純甲醇沖洗30分鐘以上。

  二、如何排除液相色譜儀氣泡溢出的故障?

  流動(dòng)相內(nèi)產(chǎn)生都無(wú)法清除不斷產(chǎn)生的氣泡,主要是因?yàn)檫^(guò)濾器長(zhǎng)期沉浸于乙酸銨等緩沖液內(nèi),過(guò)濾器內(nèi)部由于霉菌的生長(zhǎng)繁殖,形成菌團(tuán),阻塞了過(guò)濾器,緩沖液難以流暢地通過(guò)過(guò)濾器,空氣在泵的壓力作用下經(jīng)過(guò)濾器進(jìn)入流動(dòng)相。

  過(guò)濾器浸泡于5%硝酸溶液中,超聲清洗幾分鐘即可;亦可將過(guò)濾器浸泡于5%硝酸溶液中12~36小時(shí),輕輕震蕩幾次,再將過(guò)濾器用純水清洗幾次,打開(kāi)泄壓閥,打開(kāi)purge鍵清洗脫氣,如仍有氣泡不斷從過(guò)濾器冒出,繼續(xù)將過(guò)濾器浸泡于5%硝酸溶液中,如沒(méi)有氣泡不斷從過(guò)濾器中冒出,說(shuō)明過(guò)濾器內(nèi)部的霉菌菌團(tuán)已被硝酸破壞,流動(dòng)相可以流暢地通過(guò)過(guò)濾器。打開(kāi)泄壓閥,打開(kāi)泵,流速調(diào)至1.0~3.0ml/min,純水沖洗過(guò)濾器1小時(shí)左右。即可將過(guò)濾器清洗干凈。關(guān)閉泄壓閥,純甲醇沖洗半小時(shí)即可。

  三、自檢時(shí),為什么有時(shí)會(huì)出現(xiàn)“鎢燈能量低”的錯(cuò)誤?

  一般來(lái)說(shuō),原因是系統(tǒng)中有擋光物,光路偏離,鎢燈電源系統(tǒng)或鎢燈燈泡已壞。這時(shí)首先要檢查光度室是否有擋光物;打開(kāi)檢測(cè)器光源室蓋,檢查氘燈是否點(diǎn)亮;如果氘燈不亮,則關(guān)機(jī),更換新氘燈,換時(shí),需注意型號(hào);檢查氘燈保險(xiǎn)絲,看是否松動(dòng)、氧化、燒斷;如果故障,應(yīng)立即更換;再開(kāi)機(jī)重新自檢;若仍出現(xiàn)上述故障,則重新安裝軟件后再進(jìn)行自檢。

  四、出現(xiàn)壓力波動(dòng)大,流量不穩(wěn)定該怎么辦?

  造成這種情況的原因是系統(tǒng)中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物,使得兩者不能密封。處理工作中注意觀察流動(dòng)相的量,保證不銹鋼濾器沉入儲(chǔ)液器瓶底,避免吸入空氣,流動(dòng)相要充分脫氣。如為單向閥和閥座之間夾有異物,拆下單向閥,放入盛有丙酮的燒杯用超聲波清洗。

  五、液相色譜儀峰面積重復(fù)性不好怎么回事?

  主要原因可能有進(jìn)樣閥漏液、加樣針不到位或液量不足。針對(duì)*種情況,處理時(shí)應(yīng)對(duì)更換進(jìn)樣閥墊圈;對(duì)于第二種情況保證加樣針插到底,注射樣品溶液后須快速、平穩(wěn)地從LOAD狀態(tài)轉(zhuǎn)換到INJECT狀態(tài),以保證進(jìn)樣量的準(zhǔn)確。日常工作中,液相色譜儀的保養(yǎng)非常重要,如要注意不要讓空氣進(jìn)入輸液系統(tǒng)和高壓泵中,儲(chǔ)液器內(nèi)的溶液如長(zhǎng)時(shí)間未用應(yīng)清洗儲(chǔ)液器并更換溶液,每次用完色譜儀后緩沖液要用純水沖洗干凈,防止無(wú)機(jī)鹽析出或沉積;樣品的前處理也很重要,任何樣品都要盡可能地去除雜質(zhì),完全溶解,盡量減少對(duì)色譜柱的污染,以延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命,同時(shí)避免注射過(guò)濃的樣品溶液,以免殘留液在進(jìn)樣閥內(nèi)析出固體引起堵塞;色譜柱作好標(biāo)記,用于不同分析目的的色譜柱不要混用等。

  六、液相色譜柱壓升高的原因是什么?

  造成柱壓升高的原因很多。一般是由于柱床內(nèi)產(chǎn)生了異常的占位性物體,造成流體阻力加大所引起的。例如,緩沖液鹽分如(乙酸銨等)沉積于柱內(nèi),或樣品污染沉積。針對(duì)*種情況,處理時(shí)應(yīng)先用40~50℃的純水,低速正向沖洗柱子,待柱壓逐漸下降后,相應(yīng)提高流速?zèng)_洗,柱壓大幅度下降后,用常溫純水沖洗,之后用純甲醇沖洗柱子30分鐘;對(duì)于第二種情況,由樣品的沉積引起污染的C18柱,和純水反向沖洗柱子,然后換成甲醇沖洗,接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時(shí)間的長(zhǎng)短由樣品污染的情況而定),再用換成甲醇沖洗,然后用純水沖洗,zui后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。

高效液相色譜儀的清洗與保養(yǎng)

    高效液相色譜儀色譜柱在色譜分析系統(tǒng)中主要起著分離檢測(cè)物質(zhì)的作用,如同色譜系統(tǒng)的心臟,同時(shí)也是易損耗品。什么情況下會(huì)導(dǎo)致液相色譜柱柱效降低甚至“失效”。

 

    1、篩板堵塞

    色譜柱入口篩板堵塞是常見(jiàn)的問(wèn)題之一,會(huì)導(dǎo)致柱壓升高、色譜峰拖尾、塔板數(shù)降低等問(wèn)題。通常分析樣品中微粒雜質(zhì)最右可能堵塞色譜柱入口,因此分析時(shí),需要先過(guò)濾或者離心,乳濁或渾濁樣品應(yīng)以0.25?m濾膜處理,也可用針頭過(guò)濾器過(guò)濾。進(jìn)樣器與泵密封墊的磨損也會(huì)帶入微粒,在進(jìn)樣閥與色譜柱之間使用0.25?m或0.45?m的在線過(guò)濾器,通常可以避免這類(lèi)問(wèn)題

    2、強(qiáng)保留樣品組分

    強(qiáng)吸附性的樣品組分吸附在柱頭填料上,能?chē)?yán)重地影響色譜柱壽命。像生物組織或體液的提取物、天然產(chǎn)物等復(fù)雜樣品,極易造成柱頭的污染。相對(duì)較純的樣品,一般不會(huì)出現(xiàn)這一問(wèn)題。色譜柱應(yīng)用中,色譜峰嚴(yán)重拖尾或分裂往往是強(qiáng)保留污染物在柱頭吸附的體現(xiàn)。

    3、色譜柱裝填不良

    裝填不良的色譜柱,在短時(shí)間應(yīng)用后,填充床的壓縮通常使柱頭處產(chǎn)生塌陷,導(dǎo)致柱效突然降低。色譜柱的初始評(píng)價(jià)指標(biāo),如塔板數(shù)、不對(duì)稱(chēng)因子等往往不能很好地表征色譜柱床層的穩(wěn)定性,這種情緒只能在實(shí)際應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)。

    4、壓力因素

    液相色譜儀色譜柱使用過(guò)程中的驟然壓力波動(dòng)、機(jī)械撞擊或溫度驟然變化都會(huì)對(duì)色譜柱床層產(chǎn)生影響,導(dǎo)致峰形變差和柱效降低。進(jìn)樣過(guò)程中,進(jìn)樣閥轉(zhuǎn)動(dòng)太慢可引起壓力波動(dòng),使色譜柱床產(chǎn)生裂隙,在柱切換時(shí)也存在同樣的問(wèn)題。使用填充良好的色譜柱,在較低柱壓下操作,可大大減少由壓力波動(dòng)造成的色譜柱損壞。

    有些色譜柱廠家建議在使用液相色譜柱時(shí)加入保護(hù)柱,保護(hù)柱是收集、阻斷來(lái)自進(jìn)樣器的機(jī)械和化學(xué)雜質(zhì),以保護(hù)和延長(zhǎng)分析柱的使用壽命。

    柱子的再生

    色譜柱屬于色譜分析的常用消耗品,它是有壽命的;但它壽命的長(zhǎng)短與我們的樣品處理程度、有無(wú)加保護(hù)柱以及清洗是否恰當(dāng)和徹底緊密相關(guān)!當(dāng)柱子在使用一段時(shí)間以后,它的柱壓可能升高,柱效可能降低,這時(shí)如果我們對(duì)柱子進(jìn)行再生,它的壽命也許會(huì)得到一定的延長(zhǎng)。

    柱子使用

    1、首先要確認(rèn)您所要分析的樣品流動(dòng)相的pH范圍是否在您的柱子的pH范圍之內(nèi),以免損壞柱子硅膠!

    2、接下來(lái)就是用你做樣品的流動(dòng)相去平衡柱子,如果您的流動(dòng)相中含有緩沖鹽溶液,在平衡柱子之前務(wù)必要先用5%的甲醇(乙腈)/水去過(guò)渡10倍柱體積(150x4.6mm柱子約為30ml,250x4.6mm柱子約為45ml;下同)以上,再用帶鹽的流動(dòng)相去平衡柱子足夠的時(shí)間(直到基線非常平穩(wěn)為止),之后方可進(jìn)樣分析。

    3、無(wú)論您分析何種樣品,都會(huì)由于各種原因樣品中總有部分雜質(zhì),因此建議您在進(jìn)樣前在柱子前端加接保護(hù)柱以保護(hù)您那昂貴的分析柱,或者用0.2um或 0.45um針頭過(guò)濾器過(guò)濾樣品后方進(jìn)樣分析!

標(biāo)簽: 高效液相色譜儀
高效液相色譜儀 高效液相色譜儀的清洗與保養(yǎng)_高效液相色譜儀

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