紫外分光光度計是一種常用的分光計產(chǎn)品,是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜研究的成分、結構和物質(zhì)間相互作用的有效手段,產(chǎn)品被廣泛用于多個領域中。
紫外分光光度計的操作要點:
啟動儀器之前,一定要把樣品室內(nèi)存放的防潮劑拿出,儀器進行正常運轉(zhuǎn)檢查的時候,千萬不能開啟樣品室蓋;要求比色皿當中的液體占總體積的66%-80%較佳,千萬不能讓液體太多,以致于液體外泄腐蝕儀器;正常檢測的時候,需要保證比色皿干凈,內(nèi)壁上液滴需要使用專業(yè)的紙進行擦拭,千萬不能使用手進行直接的擦拭,容易對使用人員的手造成傷害,相信沒有人希望這樣的事情發(fā)生。
在正常運轉(zhuǎn)的時候,嚴禁把液體溶劑放置于儀器的表層上,如果出現(xiàn)液體外泄的情況,一定要保證進行及時的清潔處理。當檢測完畢之后,需要及時將比色皿內(nèi)的液體處理掉,使用蒸餾水將其清理干凈,同時倒置進行晾干處理。最后需要將儀器的電源關閉,把防潮劑放入到樣品室內(nèi),做好防塵處理,等到管理人員同意方可離去。
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1、關閉儀器電源開關。
2、擰下2個3m/m螺絲,卸下光源燈室上蓋板。
3、用“板手”插入鎢鹵素燈架上的螺孔逆時針酌量旋松,向上拔出鎢鹵素燈。
4、插入新的鎢鹵素燈(到底)并少許進行固定。
5、將儀器波長調(diào)至 600nm,開啟儀器電源開關。
6、調(diào)節(jié)鎢燈上下位置少許或燈座的固定螺位置少許,使 T 值為最高并緊固。
7、使球面聚焦鏡射的黃色光斑正好照射于單色光器,入射狹縫的正中央即可。
8、固定鎢鹵素燈的兩個固定螺(酌量用力),重新裝好光源燈室上蓋板。
二、鎢鹵素燈的更換和調(diào)整流程
1、關閉儀器電源開關
2、擰下 2 個 F 3m /m 螺絲,卸下光源燈室上蓋板。
3、用小螺絲刀擰松氘燈的三根電線(認好高壓線)用絕緣尖嘴鉗取下三根線。
4、旋松(逆時針方向)氘燈架上夾緊螺絲少許向上拔出氘燈。
5、將儀器波長設定為 220nm
6、裝上新的氘燈
7、將氘燈的發(fā)射孔朝向濾色片中反光鏡一側(cè)。
8、使氘燈的發(fā)射孔與儀器底板間距調(diào)為約49mn。
9、正確連結氘燈的三根電線并固定擰緊。
10、開啟儀器電源開關
11、調(diào)節(jié)氘燈上下左右位置少許或氘燈固定架的整個位置少許,使當前 T 值為最高并緊固。
12、使球面聚集鏡射出的紫色光斑正好照射于單色光器入射狹縫的正中央即可。
13、將氘燈夾緊螺絲酌量擰緊。
14、重新裝好光源燈室上蓋板。
分光光度分析中經(jīng)常出現(xiàn)波動的問題,吸光度無法穩(wěn)定在一個恒定的數(shù)值上。這種情況常見于老式的721,722,7230等機型上,近幾年出的島津2550 系列,瓦里安的Carry系列,普析的1901系列等的新式儀器,儀器的波動一般比較小。如果出現(xiàn)這種情況,一般采用下面方式處理:
1. 分光光度計出現(xiàn)波動如何解決-首先確定待測溶液的穩(wěn)定性
之前就有版友出現(xiàn)過這種情況,說吸光度波動很大,隨時間的增加,吸光值減小/增大等的問題,先別懷疑儀器,假設儀器是穩(wěn)定的,驗證待測溶液是否穩(wěn)定。如 果溶液不穩(wěn)定,那就需要靜置一段時間,等穩(wěn)定了再測。這里我可以建議一點,就是做個簡單的試驗設計,以時間為橫坐標,以吸光度為縱坐標,看看吸光度隨時間 的變化曲線如何,等到穩(wěn)定以后,下次記住這個時間,以后就直接靜置這么長時間,直接測定了。
簡單做了一個圖,看看吸光度隨時間的變化曲線,由圖1可以看出,在0-11分鐘,顯色劑和組分還在反應,如果在這個時間段檢測,吸光度肯定不穩(wěn)定;在 11-13分鐘時,吸光值基本穩(wěn)定,可以上機檢測;在13分鐘以后,開始有點褪色了。所以,下次直接靜置11-分鐘后開始上機測定就可以了。
還有一點很重要,就是這種不穩(wěn)定的情況能不能重復,即有沒有重現(xiàn)性,如果沒有重現(xiàn)性,那只能說明是偶然誤差,可能由于電壓不穩(wěn)啊,震動等原因造成的??芍匦聹y定一次或多次取平均值即可。
分光光度計出現(xiàn)波動如何解決
2. 檢查是否操作不當
經(jīng)常做試驗的時候,有時候發(fā)現(xiàn)自己的數(shù)據(jù)不平行,俺就會反過來重頭檢查一下。首先檢測比色皿在上機的時候是否擦拭干凈。這個很重要,有時擦拭不干凈,會 造成0.010左右的吸光值的偏差,即使是同一溶液上兩次儀器,也會出現(xiàn)這種誤差,主要是由于比色皿沒有擦拭干凈的原因。至于比色皿需要配對使用(對于老 儀器),或采用扣除池空白的方式(對于有此功能的新儀器),俺就不在此啰嗦了。
對于拉桿式的儀器,要將拉桿復位。俺就鬧過一個笑話,印象很深刻的。一個顏色特別深的時候,上機發(fā)現(xiàn)吸光值為零。俺還檢查了很多方面,看前處理是否出了問 題,看波長是否在zui大吸收處,是不是儀器不穩(wěn)定,檢查了一大圈,都沒有問題啊,而且目視顏色很深啊。查來查去發(fā)現(xiàn),儀器光路對準第二個比色皿位置,而俺的 樣品溶液在*個比色皿位置上。哎,大家別笑話,真人真事,讓大家見笑了。這里就要建議大家養(yǎng)成良好的習慣,使用完畢后一定要將拉桿復位,如果儀器不是一 個人使用,別人可能習慣不好,自己在試驗的過程中一定要親自檢查一下。
分光光度計出現(xiàn)波動如何解決
3 . 電壓不穩(wěn)或光源不穩(wěn)
上面兩個方面都沒 有涉及儀器本身的問題,下面說說儀器方面。若果1.1.1和1.1.2您都做的很好,那有可能出現(xiàn)以下問題。如果您所在實驗室電壓不穩(wěn),也有可能造成儀器 不穩(wěn)定。據(jù)俺了解,儀器里面好像內(nèi)置了穩(wěn)壓系統(tǒng)。如果檢查出來是由于電壓不穩(wěn)定造成的,建議安裝穩(wěn)壓電源等裝置。這種情況好像比較少見啊。
光源問題是大家容易忽略的問題,首先看看氘燈和鎢燈的能量圖,如下:
圖2 氘燈和鎢燈的能量圖
建議大家新儀器備份一個能量圖,如果發(fā)現(xiàn)儀器不穩(wěn)定的話,可以做一個能量圖,和原來的能量圖比較,看看能量是否下降的很厲害,如果下降的很厲害,可能是光 源出問題了,建議更換光源燈。尤其是氘燈,壽命一般比鎢燈短,所以使用時更要注意,如只使用可見光區(qū),等儀器自檢完畢后,可利用軟件關閉氘燈,這樣可以節(jié) 省氘燈。如果在紫外區(qū),且長時間不用的話,也可以暫時關閉氘燈。對于721等老儀器,沒有氘燈使用計時等功能和能量掃描功能的儀器,可以自己設計一個氘燈 使用記錄,每次記錄氘燈使用的時間,等過了半衰期及時更換。
在更換光源的時候,首先建議讓儀器廠家的人來更管。如果條件不許的話,自己更換,一定要帶手套,裝上以后要對燈的位置進行調(diào)節(jié)。
分光光度計出現(xiàn)波動如何解決:
4. 檢測器問題
還有可能是檢測器的問題,老儀器一般都用光電管作為檢測器,新儀器一般都使用光電倍增管。無論那種,對檢測器的保護,對儀器的保養(yǎng)一定要做好。之前由一個 版友儀器壞了,就是由于長時間不用,里面電子元件受潮老化導致。所以,要定期的對儀器進行維護,及時更換干燥劑,保持儀器干燥。長時間不用,可定期開機, 這樣里面的電子元件本身會發(fā)熱,驅(qū)除潮氣。如果檢測器壞了,就要請廠家的專業(yè)人員來更換了。
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