高效液相色譜儀分析樣品的種類繁多、物理形態(tài)廣泛、組成及其濃度復(fù)雜多變,對分析結(jié)果的干擾因素很多,為達(dá)到分析目的,樣品要進(jìn)行有效的制備。高效液相色譜儀分析樣品的制備包括預(yù)處理、提取、凈化和濃縮等過程。
一、預(yù)處理:
1、固體樣品:含水較低,粉碎過篩。含水量較高,取使用部分烘干后,粉碎過篩。
2、液體樣品:攪拌混合均勻。
3、特殊樣品:根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行特殊處理。
二、提?。?br/> 1、浸提法(固-液萃取法):將樣品浸泡在溶劑中,把固體樣品中的某些組分浸出。
2、萃取法(液-液萃取法):利用被提取組分在互不相溶的兩種溶劑中分配系數(shù)的不同實(shí)現(xiàn)分離。
三、凈化:
1、萃取法:適用于液體樣品,少量多次。
2、化學(xué)法:通過使雜質(zhì)或待測物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)而改變其溶解性,使其與原體系分離。
3、層析法:利用混合物中各組分理化性質(zhì)的不同,使各組分在支持物上的移動速度不同,而將各組分分離。
四、濃縮:
1、常壓濃縮:通過升高溫度,將溶劑由液態(tài)轉(zhuǎn)化成氣態(tài)被抽走,從而達(dá)到濃縮目的。適用于揮發(fā)性和沸點(diǎn)相對較低的樣品。
2、減壓濃縮:通過抽真空,使容器內(nèi)產(chǎn)生負(fù)壓,在不改變樣品化學(xué)性質(zhì)的前提下降低樣品的沸點(diǎn),使一些高溫下化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定或沸點(diǎn)高的溶劑在低溫下由液態(tài)轉(zhuǎn)化成氣態(tài)被抽走,從而達(dá)到濃縮目的。
3、冷凍干燥:冷凍的同時抽真空減壓,使溶劑升華。適用于生物活性樣品。
4、氮吹儀濃縮:采用氮?dú)鈱訜針悠愤M(jìn)行吹掃,使樣品迅速濃縮,達(dá)到快速分離純化的效果。適用于農(nóng)殘檢測和制藥行業(yè)等樣品的批量處理。
高效液相色譜儀可以完成二元高壓梯度洗脫,也可以拓展為制備系統(tǒng),采用高壓混合器連接兩個高壓恒流泵,利用RS232通訊,即可實(shí)現(xiàn)梯度分析;
便于用戶自由選擇與搭配,混合器材主要由不銹鋼、生物惰性PEEK等構(gòu)成,用途廣泛;
可廣泛應(yīng)用于研究開發(fā)、醫(yī)藥檢驗(yàn)、食品檢測、化工分析、環(huán)境監(jiān)測等眾多分析領(lǐng)域。
高效液相色譜儀分離原理:液-液分配(Liquid-liquid Partition Chromatography)及化學(xué)鍵合相色譜(Chemically Bonded Phase Chromatography) 流動相和固定相都是液體。
流動相與固定相之間應(yīng)互不相溶(極性不同,避免固定液流失),有一個明顯的分界面。
當(dāng)試樣進(jìn)入色譜柱,溶質(zhì)在兩相間進(jìn)行分配。達(dá)到平衡時,高效液相色譜儀報(bào)價(jià),服從于高效液相色譜計(jì)算公式;
6種定量計(jì)算方法:歸一法、修正歸一法、帶比例因子的修正歸一法、內(nèi)標(biāo)法、外標(biāo)法,高效液相色譜儀適用范圍,以及指數(shù)計(jì)算法。
高效液相色譜儀特點(diǎn):
1、梯度洗脫內(nèi)部軟件可自控制,編輯、存貯60個梯度方法,運(yùn)行復(fù)雜的梯度程序;
2、泵形式:串聯(lián)雙柱塞 浮動式密封圈;泵頭自沖洗功能,泵無須手動排空即可輸液“自吸式單向閥”技術(shù),可延長密封圈使用壽命;
3、光路系統(tǒng)采用精密定位結(jié)構(gòu)和獨(dú)特的散熱技術(shù),高效的光學(xué)系統(tǒng)和數(shù)字過濾;
4、程序化的溶劑類和壓縮因子,可自動補(bǔ)償;完整的預(yù)清洗功能,更于快速溶劑更換;
5、波長調(diào)節(jié)功能:既可由鍵盤面板控制也可由程序軟件設(shè)定,全封閉集成型光電檢測元件,無需任何機(jī)械部分調(diào)整即可選擇或改變波長;
6、光源運(yùn)行時間在線監(jiān)測并顯示,方便用戶確定光源壽命;
7、三條流量校正曲線以及特有的多點(diǎn)參數(shù)校正,保障了極高的流量準(zhǔn)確性;
8、梯度:高壓2-3元;梯度方式:高壓,梯度洗脫內(nèi)部軟件可自控制,可通過PC機(jī)及泵控制;
9、實(shí)時顯示樣品池和參比池能量,方便判斷光源和流通池狀態(tài);
10、紫外檢測器具有自動波長定位調(diào)整,自動調(diào)零,多量程輸出選擇;
11、智能化高,可實(shí)現(xiàn)網(wǎng)絡(luò)化平臺監(jiān)控,提高了你的QC效益;
12、自動化,讓你從繁鎖的分析操作中解放出更多的時間。
1、流動相的抽濾要求
色譜純試劑,二次蒸餾水,緩沖鹽一定要過濾。
2、吸濾頭
特殊情況下可拆下濾頭抽取以判斷其中是否堵塞;亦可用注射器吸取流動相通過吸濾頭打出以判斷其是否堵塞。若有堵塞情況可用異丙醇超聲波清洗;清洗不成功則需要更換。
3、單向閥
如遇到泵壓不穩(wěn)或流動相不能抽取,則可能是單向閥出現(xiàn)問題,卸下用異丙醇超聲波清洗,清洗時須按其安裝的反相放置在小燒杯中,切記不可與安裝方向倒置超洗!
4、泵頭
泵頭漏液或出現(xiàn)其它故障一般要申請維修(如漏液,或更換柱塞桿及其密封墊等)。
5、過濾片
當(dāng)色譜峰出現(xiàn)異常情況時,有可能是此部件被污染,拆下用異丙醇超洗或更換過濾墊片。
6、排液閥
此處不能完全密封或漏液時一般是其中的墊片污染或磨損,可卸下后取出其墊片用異丙醇超聲波清洗或更換墊圈。
7、手動進(jìn)樣器
平時應(yīng)注意用二次蒸餾水和甲醇在裝載狀態(tài)及進(jìn)樣分析狀態(tài)清洗;如出現(xiàn)漏液現(xiàn)象,原因極可能為轉(zhuǎn)子密封墊磨損或污染,一般須申請維修或更換配件。
8、流通池
在色譜峰不正常時可能是此部件被污染可拆卸后取出其中的墊片用異丙醇超洗(可根據(jù)說明書進(jìn)行操作或申請維修)。
9、工作站
出現(xiàn)死機(jī)可重啟計(jì)算機(jī);不正常運(yùn)行時,首先可更換電腦測試其硬件故障;或在本機(jī)上重新插撥接口、重新安裝軟件。