酶標(biāo)儀(MicroplateReader)是對(duì)酶聯(lián)免疫檢測(EIA)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行讀取和分析的專業(yè)儀器,酶聯(lián)免疫反應(yīng)通過偶聯(lián)在抗原或抗體上的酶催化顯色底物進(jìn)行的,反應(yīng)結(jié)果以顏色顯示,通過顯色的深淺即吸光度值的大小就可以判斷標(biāo)本中待測抗體或抗原的濃度,廣泛地應(yīng)用在臨床檢驗(yàn)、生物學(xué)研究、農(nóng)業(yè)科學(xué)、食品和環(huán)境科學(xué)中,特別在近幾年中,由于大量的酶聯(lián)免疫檢測試劑盒的應(yīng)用,使得酶標(biāo)儀在生殖保健領(lǐng)域中應(yīng)用越來越廣泛,同時(shí)促進(jìn)了生殖健康技術(shù)水平提高。
目前國內(nèi)許多計(jì)生站系統(tǒng)開展了酶免檢測項(xiàng)目,如:乙肝五項(xiàng)、艾滋病檢測、優(yōu)生優(yōu)育系列檢測、激素檢測等。過去多數(shù)采用目測方法,報(bào)出的結(jié)果缺乏科學(xué)的依據(jù)。例如:某弓形蟲檢測試劑盒中,臨界值規(guī)定為:陰性對(duì)照品的OD值×2.5,通過目測無法判斷標(biāo)本孔的反應(yīng)顏色是否超過臨界值。肉眼進(jìn)行兩孔之間的顏色比較可能還行,但比較一孔的顏色是否超過另一孔顏色的2.5倍就不可能。
國內(nèi)多家權(quán)威機(jī)構(gòu),如衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心和計(jì)劃生育系統(tǒng)等多次強(qiáng)調(diào)酶標(biāo)儀的重要性,并要求酶聯(lián)免疫檢測試劑應(yīng)使用酶標(biāo)儀判讀,酶免試劑的質(zhì)控也應(yīng)使用酶標(biāo)儀,并提供酶標(biāo)儀測定的原始數(shù)據(jù),而各廠家的試劑盒說明書沒有是讓用目測的。同時(shí)酶免檢測的項(xiàng)目往往是一些實(shí)質(zhì)性的感染和病變(如:肝炎、艾滋病、優(yōu)生優(yōu)育等),判讀更要求嚴(yán)謹(jǐn),由誤診引起的糾紛很難處理。另外,住院手術(shù)病人術(shù)前的丙肝、艾滋等EIA試劑檢測是避免因輸血引起感染引發(fā)的醫(yī)療事故糾紛的必要手段,正逐漸被許多單位所采用。
酶標(biāo)儀的檢測工作原理是在特定波長下,檢測被測物的吸光值。光是電磁波,波長100nm~400nm稱為紫外光,400nm~780nm之間的光可被人眼觀察到,大子780nm稱為紅外光。人們只所以能夠看到色彩,是因?yàn)楣庹丈涞轿矬w上被物體反射回來。綠色植物之所以是綠色,是因?yàn)橹参镂樟斯庵械募t色光譜。
光通過被檢測物,前后的能量差異即是被檢測物吸收掉的能量,特定波長下,同一種被檢測物的濃度與被吸收的能量成定量關(guān)系。
檢測單位用OD值表示, OD是optical delnsity(光密度)的縮寫,表示被檢測物吸收掉的光密度, OD=1og(1/trans),其中trans為檢測物的透光值。根據(jù)Bouger-amberT-beer法則,OD值與光強(qiáng)度成下述關(guān)系:
E=OD=logΙ0/Ι其中E表示被吸收的光密度, Ι0 為在檢測物之前的光強(qiáng)度,Ι為從被檢測物出來的光強(qiáng)度。
OD值由下述公式計(jì)算:
E=OD=C×D×E
C為檢測物的濃度
D為檢測物的厚度
E為摩爾因子
在特定波長下測定每一種物質(zhì)都有其特定的波長,在此波長下,此物質(zhì)能夠吸收較多的光能量。如果選擇其它的波長段,就會(huì)造成檢測結(jié)果的不準(zhǔn)確。因此,在測定檢測物時(shí),我們選擇特定的波長進(jìn)行檢測,稱為測量波長。
但是每一種物質(zhì)對(duì)光能量還存在一定的非特異性吸收,為了消除這種非特異性吸收,我們再選取一個(gè)參照波長,以消除這個(gè)不準(zhǔn)確性。在參照波長下,檢測物光的吸收最小。檢測波長和參照波長的吸光值之差可以消除非特異性吸收。