高效液相色譜法（HPLC：High Performance Liquid Chromatography ）是70年代迅速發(fā)展起來的一種分離分析技術(shù)，是目前各種色譜模式中應(yīng)用廣泛的一個領(lǐng)域，據(jù)估計，世界上幾百萬種化合物中除20%宜用其相色譜分離分析外，其余80%的化合物，包括大分子化合物、熱不穩(wěn)定化合物以及有生物活性的化合物都可以用不同模式的HPLC進(jìn)行分離分析。
?自80年代以來，HPLC以成為國際分析化學(xué)界發(fā)展較快的一個分支。隨著高效液相色譜設(shè)備的不斷更新?lián)Q代，功能和分析手段的逐漸增加，高效液相色譜儀在生物化學(xué)、生物工程、醫(yī)藥研究、食品分析等各個領(lǐng)域中被廣泛應(yīng)用；是分析化學(xué)家、生物化學(xué)家等用以解決他們面臨的各種實際分離分析課題必不可缺少的工具。高效液相具有簡便、快速、分辨率高、檢測限低、重復(fù)性好，定量精度高等特點的同時，還必將會在提高檢測質(zhì)量和速度上有更大的發(fā)展前景。
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日常維護(hù)和保養(yǎng)
貯液器：清潔是保持流動相貯液器正常使用的關(guān)鍵，要盡可能使用HPLC級的溶劑和試劑含有緩沖鹽和非HPLC級的流動相一定要通過0.5μm的過濾器以除去其中的微粒物質(zhì)。改變流動相時應(yīng)防止交叉污染，陳舊的流動相和用久了的試劑瓶應(yīng)定期廢棄，防止生長微生物和組分改變。貯器內(nèi)壁定期清洗，里面的附件要經(jīng)常更換。
泵：泵的密封圈是最易磨損的部件，密封墊圈的損壞可引起系統(tǒng)的許多故障。有人建議3個月?lián)Q一次墊圈。但也不能一概而論，要看墊圈的材料質(zhì)量，使用壓力大小、保養(yǎng)以及緩沖液的情況而定。采取下列措施可以延長墊圈的壽命：
1 每天要把泵中的緩沖液體洗干凈，防止鹽沉積，泵要浸在無緩沖液的溶液或有機溶劑中；
2 用HPLC級試劑；
3 用燒結(jié)不銹鋼沉子。要注意防止因泵阻塞造成壓力過高而損壞柱塞桿或燒壞電機。
進(jìn)樣器：停機后要用溶劑沖洗干凈進(jìn)樣器內(nèi)殘留的樣品和緩沖鹽，防止無機鹽沉積和樣品微粒造成閥轉(zhuǎn)子面磨損或阻塞，嚴(yán)禁用氣相色譜那樣的尖針頭進(jìn)樣。
色譜柱：防止柱性能下降有以下幾方面的措施：
1 溶劑的化學(xué)腐蝕不能太強；
2 避免微粒在柱頭沉降；
3 泵上要裝壓力限制器，防止壓力過高沖擊大；
4 流動相PH>7時用大粒度同種填料作預(yù)柱；
5 柱頭加燒結(jié)片不銹鋼濾片，需要時加保護(hù)柱；
檢測器：要保持檢測器清潔，每天用后連同色譜柱柱一起沖洗。提倡不定期用強溶劑反向沖洗檢測池（拆開柱）。用脫過氣的流動相，防止空氣泡卡在池內(nèi)。檢測器燈有一定的壽命，不用時不要打開燈。
操作極限：每臺泵都有壓力上限，系統(tǒng)達(dá)到預(yù)定值時會自動停泵，這樣能保護(hù)柱和其他硬件。上限壓力設(shè)在20MPa以下，泵墊圈和進(jìn)樣閥耐用，但壓力上限設(shè)定過低會延長分析時間。根據(jù)檢驗設(shè)定壓力上限在15～20MPa為宜。新柱的壓力比較低，隨著使用時間加長而壓力上升，所以設(shè)定的壓力上限也應(yīng)變化。在梯度洗脫中應(yīng)考慮因流動相的變化而引起的壓力變化，避免上限壓力過低造成中途停泵。帶有微機的系統(tǒng)還需設(shè)定壓力下限，一般在0.5～1MPa，在貯器中流動相被抽干或嚴(yán)重滲漏時會自動停泵。有時下限壓力設(shè)在0也會自動停泵。
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