高效液相色譜法有“三高一廣一快”的特點(diǎn)：
①高壓：流動(dòng)相為液體，流經(jīng)色譜柱時(shí)，受到的阻力較大，為了能迅速通過色譜柱，必須對(duì)載液加高壓。
②高效：分離效能高。可選擇固定相和流動(dòng)相以達(dá)到較佳分離效果，比工業(yè)精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。
③高靈敏度：紫外檢測(cè)器可達(dá)0.01ng，進(jìn)樣量在μL數(shù)量級(jí)。
④應(yīng)用范圍廣：百分之七十以上的有機(jī)化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點(diǎn)、大分子、強(qiáng)極性、熱穩(wěn)定性差化合物的分離分析，顯示出優(yōu)勢(shì)。
⑤分析速度快、載液流速快：較經(jīng)典液體色譜法速度快得多，通常分析一個(gè)樣品在15～30分鐘，有些樣品甚至在5分鐘內(nèi)即可完成，一般小于1小時(shí)。
此外高效液相色譜還有色譜柱可反復(fù)使用、樣品不被破壞、易回收等優(yōu)點(diǎn)，但也有缺點(diǎn)，與氣相色譜相比各有所長(zhǎng)，相互補(bǔ)充。高效液相色譜的缺點(diǎn)是有“柱外效應(yīng)”。在從進(jìn)樣到檢測(cè)器之間，除了柱子以外的任何死空間（進(jìn)樣器、柱接頭、連接管和檢測(cè)池等）中，如果流動(dòng)相的流型有變化，被分離物質(zhì)的任何擴(kuò)散和滯留都會(huì)顯著地導(dǎo)致色譜峰的加寬，柱效率降低。高效液相色譜檢測(cè)器的靈敏度不及氣相色譜。
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液相色譜柱、特別是高效液相色譜柱的填裝，需要有較高的技巧和熟練的技能。因此，有人甚至將“裝柱”看作是“藝術(shù)加技術(shù)”。但是，只要掌握了一些基本的規(guī)律和方法，任何實(shí)驗(yàn)室都可以填裝出具有較高柱性能的色譜柱。當(dāng)然，目前大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室多是購(gòu)買商品預(yù)填裝柱來滿足分離、分析之需。但是在一些有特殊需要的情況下，或?yàn)楣?jié)省經(jīng)費(fèi)，在實(shí)驗(yàn)室中自行填裝高效液相色譜柱還是可取的。
液相色譜柱填裝程序中應(yīng)該注意的問題：
?、俑邏翰僮鞯陌踩珕栴}。常發(fā)生的問題是柱子與勻漿罐連接不牢，造成加壓時(shí)柱頭被高壓沖下或柱子從勻漿罐上滑脫。此時(shí)，輕則填裝失敗，材料損失，重則造成人身傷害事故，一定要加以防范。除每次填裝前均須仔細(xì)確認(rèn)是否連接正確且牢靠外，可以還可加上由法蘭盤和長(zhǎng)螺桿組成的預(yù)防脫落裝置，以防萬(wàn)一。
?、谕ǔ?，先填裝的柱床較后填裝的柱床緊密。因此，當(dāng)使用時(shí)宜以相反的方向?yàn)橐?，即讓近勻漿罐一端作為使用時(shí)流動(dòng)相的出口，而填裝時(shí)的出口端則作為流動(dòng)相的入口。
?、坌轮邮褂们皯?yīng)以甲醇沖洗20-30min, 后，再改用流動(dòng)相平衡。
?、苄轮右诉x適宜的標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行評(píng)價(jià)并記錄，以備存查和比較。
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