可見分光光度計(又名可見光度計、分光光度計)是可見光分光光度法是利用較新的單片機技術,開發(fā)出能夠進行定量測量(標準曲線測量,可對物質進行濃度直讀);OD值直接測量(吸光度、透過率和能量等直讀);動力學測試(測出物質濃度隨時間變化OD值的變化);光譜掃描(可以對某一種物質進行全波段掃描,分析物質的特征波長,判斷實驗過程的誤差);多波長測試(可以對物質同時進行多個波長的測試,分析物質的相關特性);還有可以進行DNA/蛋白質測試、總磷總氮測試、重金屬測試、農藥殘留測試、食品安全檢測、熱力發(fā)電金屬離子測試等等。
原理是利用物質的分子或離子對某一波長范圍的光的吸收作用,對物質進行定性分析,定量分析及結構分析,所依據的光譜是分子或離子吸收入射光中的特定波長的光而產生的吸收光譜。根據所吸收光的波長區(qū)不同,分為紫外分光光度法和可見光光度法,合稱為紫外可見分光光度法。
可見分光光度計廣泛應用于食品、藥品、電力、生物研究、教學科研、化學化工、質量監(jiān)督、水質環(huán)保和商檢等各大領域。V-1500PC型可見分光光度計,波長范圍:320nm-1100nm,能滿足不同物質的測試。
可見分光光度計基本使用方法:
1、按“GOTOλ”鍵,輸入設定波長;
2、四個比色皿,其中R位置放置參比試樣,其余三個放入待測試樣。將比色皿放入樣品池內的比色皿架中,蓋上樣品池蓋;
3、將參比試樣推入光路,按“ABS%”鍵,使儀器自動調零和置滿度;
4、然后將待測試樣推入光路,顯示試樣的吸光度值;
5、如果要想將待測試樣的數據打印出,只需按“START/STOP”鍵即可。
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分光光度計是一種常用的分析儀器,是通過測定被測物質在特定波長處或一定波長范圍內光的吸收度,對該物質進行定性和定量分析。分光光度計的原理是什么呢?今天我們就來具體介紹一下分光光度計的基本原理,希望可以幫助用戶更好的應用產品。
分光光度計采用一個可以產生多個波長的光源,通過系列分光裝置,從而產生特定波長的光源,光源透過測試的樣品后,部分光源被吸收,計算樣品的吸光值,從而轉化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
單色光輻射穿過被測物質溶液時,被該物質吸收的量與該物質的濃度和液層的厚度(光路長度)成正比。
物質對光的選擇性吸收波長,以及相應的吸收系數是該物質的物理常數。當已知某純物質在一定條件下的吸收系數后可用同樣條件將該供試品配成溶液,測定其吸收度,即可由上式計算出供試品中該物質的含量。在可見光區(qū),除某些物質對光有吸收外,很多物質本身并沒有吸收但可在一定條件下加入顯色試劑或經過處理使其顯色后再測定,故又稱比色分析。由于顯色時影響呈色深淺的因素較多,且常使用單色光純度較差的儀器,故測定時應用標準品或對照品同時操作。
目前,紫外可見分光光度計的應用主要是在定量分析方面。先從生命科學領域的應用來介紹。紫外可見分光光度計在生命科學中應用非常廣泛。最主要的是以下5個方面。
1.蛋白質分析工作中
紫外可見分光光度計在蛋白質的分析中,最主要的是作蛋白質含量檢測;一般是在蛋白質的吸收峰上作吸光度測定。因為蛋白質對紫外光的主要吸收波長為280nm,所以,采用光度測量模式,將儀器的波長GOTO到蛋白質的最大吸收峰波長280nm上,測試其吸光度大小,就可完成對蛋白質的定量檢測。
2.核酸分析工作中
紫外可見分光光度計在核酸分析中的應用,主要是用來對核酸的定量檢測;因為核酸的吸收峰在260nm。我們只要采用光度測量模式,將紫外可見分光光度計的波長GOTO到核酸的最大吸收峰260nm上,測試其吸光度大小就是了。
3.氨基酸分析工作中
紫外可見分光光度計在氨基酸分析中的應用,主要是用來對氨基酸的定量檢測。因為氨基酸對紫外光的主要吸收波長為230nm,所以,我們只要采用光度測量模式,將紫外可見分光光度計儀器的波長GOTO到氨基酸的最大吸收峰230nm上,就可測試其吸光度大小,從而計算出氨基酸的含量。但是,因為氨基酸分析時,一般是將它溶解在水中,而水在230nm附近有很多干擾吸收線,所以,在用紫外可見分光光度計對氨基酸分析檢測時,要注意防止干擾的問題。此外,還需注意:只有少數氨基酸有紫外吸收,多數氨基酸無紫外吸收或很弱,測定時要衍生化后再測。
4.糖類分析測試工作中
紫外可見分光光度計在糖的分析中,主要是作定量檢測。因為糖對紫外光的主要吸收波長為218nm,所以,對糖類進行分析時,只要采用光度測量模式,將紫外可見分光光度計儀器的波長GOTO到氨基酸的最大吸收峰218nm上,就可測試其吸光度大小,從而計算出糖的含量。
5.多糖分析測試工作中
紫外可見分光光度計在多糖的分析中,主要也是作定量檢測。因為多糖對紫外光的主要吸收波長為206nm,所以,我們只要采用光度測量模式,將紫外可見分光光度計儀器的波長GOTO到多糖的最大吸收峰206nm上,就可測試其吸光度大小,從而計算出多糖的含量。
但是多糖的分析難度很大。因為,在206nm處的時候,光源(氘燈)的能量已經很弱,儀器光學系統(tǒng)的能量輸出也很低,光電倍增管的靈敏度也很低,206nm左右的干擾也很大。所以,用紫外可見分光光度計作多糖的分析是很難的事,目前許多科學家正在研究中。
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