? 凝膠色譜屬于液相色譜,它是按被分析混合物不同組分分子大小的不同進(jìn)行分離的,多用于高聚物的分析。它以液體做流動(dòng)相,以多孔固體做固定相,其中孔是有一定尺寸限制的,而且大小不一。
? 它的分離過(guò)程是在裝有多孔固定相的色譜柱中進(jìn)行的。當(dāng)尺寸大小不同的分子通過(guò)色譜柱時(shí),可占據(jù)的窨體積也不同
對(duì)流動(dòng)相分子而言,填料孔的尺寸大得多,因些,流動(dòng)相可以自由擴(kuò)散出入;而大小不同的樣品分子則要滲透到不同的孔中,較大的分子只能進(jìn)入較大的孔中,較小的分子不僅能進(jìn)入大孔、中孔,還能進(jìn)入較小的孔。 醫(yī)學(xué)教 育網(wǎng)收集整理
因此,較小分子在柱內(nèi)流經(jīng)的路程和時(shí)間比大分子長(zhǎng)得多,這樣,當(dāng)不同尺寸的高聚物分子流經(jīng)多孔色譜柱時(shí),大分子先被淋出,而小分子后淋出,因而高聚物分子便按照尺寸大小分開(kāi)了,用檢測(cè)器對(duì)其分別進(jìn)行測(cè)量就可以獲得樣品的組分信息。
凝膠色譜儀由溶劑貯存器、輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)記錄系統(tǒng)以及一些附屬電子儀器所組成。其中檢測(cè)器又可以分為濃度檢測(cè)器和分子量檢測(cè)器。
總的來(lái)說(shuō),凝膠色譜技術(shù)非常廣泛的應(yīng)用于高聚物的分析,廣泛應(yīng)用于高分子材料、糖類(lèi)、脂肪烴類(lèi)的分離分析,尤其是聚合物生產(chǎn)及使用過(guò)程的監(jiān)測(cè)。
生產(chǎn)工藝
選擇什么樣的工藝流程會(huì)直接影響產(chǎn)品的分子量及其分布。因此分析不同工藝流程的分子量分布為選擇較佳的工藝提供依據(jù)。
聚合過(guò)程
在聚反應(yīng)過(guò)程中不斷取樣,可以通過(guò)凝膠色譜監(jiān)測(cè)來(lái)確定聚合條件對(duì)產(chǎn)物分子量分布的影響。
加工過(guò)程
聚合物在加工過(guò)程中由于受熱氧及機(jī)械作用而降解。用凝膠色譜研究擠出成型過(guò)程中高分子的降解,實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)單快速,可以細(xì)致地觀察不同擠出條件下試樣柱條的中心和表面的分子量及其分布的差別,這在凝膠色譜出現(xiàn)以前是不可能做到的。
使用過(guò)程
聚合物材料在使用過(guò)程中由于光、熱、氧的作用而逐漸老化,凝膠色譜不公可以檢測(cè)老化過(guò)程分子量的變化而且還可能為老化機(jī)理的研究提供數(shù)據(jù)。
產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)
一些高聚物的性能和其分子量分布有關(guān),因而通過(guò)測(cè)量分子量分布,可以對(duì)產(chǎn)品的質(zhì)量進(jìn)行檢驗(yàn)。
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薄層色譜又叫薄板層析,是色譜法中的一種,是快速分離和定性分析少量物質(zhì)的一種很重要的實(shí)驗(yàn)技術(shù),屬固—液吸附色譜;
它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點(diǎn),一方面適用于少量樣品(幾到幾微克,甚至0.01微克)的分離;
另一方面在制作薄層板時(shí),把吸附層加厚加大;
因此,又可用來(lái)精制樣品,此法特別適用于揮發(fā)性較小或較高溫度易發(fā)生變化而不能用氣相色譜分析的質(zhì)。
此外,薄層色譜法還可用來(lái)跟蹤有機(jī)反應(yīng)及進(jìn)行柱色譜之前的一種“預(yù)試”。
薄層色譜是在被洗滌干凈的玻板(10×3cm左右)上均勻的涂一層吸附劑或支持劑;
帶干燥、活化后將樣品溶液用管口平整的毛細(xì)管滴加于離薄層板一端約1cm處的起點(diǎn)線上;
涼干或吹干后置薄層板于盛有展開(kāi)劑的展開(kāi)槽內(nèi),浸入深度為0.5cm。
待展開(kāi)劑前沿離頂端約1cm附近時(shí),將色譜板取出,干燥后噴以顯色劑,或在紫外燈下顯色。
薄層色譜(Thin Layer Chromatography)常用TLC表示,又稱薄層層析,屬于固-液吸附色譜。
是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種微量、快速而簡(jiǎn)單的色譜法,它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點(diǎn)。
一方面適用于小量樣品(幾到幾十微克,甚至0.01μg)的分離;
另一方面若在制作薄層板時(shí),把吸附層加厚,將樣品點(diǎn)成一條線,則可分離多達(dá)500mg的樣品。
因此又可用來(lái)精制樣品。
故此法特別適用于揮發(fā)性較小或在較高溫度易發(fā)生變化而不能用氣相色譜分析的物資。
此外,在進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)時(shí),常利用薄層色譜觀察原料斑點(diǎn)的逐步消失來(lái)判斷反應(yīng)是否完成。
高效毛細(xì)管電泳色譜儀對(duì)進(jìn)樣技術(shù)要求很高,進(jìn)樣時(shí)應(yīng)注意以下事項(xiàng): 一、毛細(xì)管插入樣品溶液后,應(yīng)立即開(kāi)始進(jìn)樣操作,完成后迅速移至緩沖液中開(kāi)始電泳。否則會(huì)產(chǎn)生毛細(xì)作用和虹吸現(xiàn)象,引起誤差并使譜帶展寬。 二、電極不要和毛細(xì)管接觸,樣品貯器和緩沖液貯器液面的高度應(yīng)保持平衡。 三、進(jìn)樣區(qū)帶越小越好,否則會(huì)使柱效和分離度降低。故進(jìn)樣時(shí)間以短為宜。 四、溫度會(huì)影響進(jìn)樣量的恒定,因溫度直接影響粘度。 五、樣品溶液中的溶劑必須與緩沖液互溶,前者的離子強(qiáng)度應(yīng)低于后者。 六、防止溶液和緩沖液的蒸發(fā)、損耗。