電泳技術(shù)是分子生物學(xué)研究不可缺少的重要分析手段。電泳一般分為自由界面電泳和區(qū)帶電泳兩大類，自由界面電泳不需支持物，如等電聚焦電泳、等速電泳、密度梯度電泳及顯微電泳等，這類電泳目前已很少使用。而區(qū)帶電泳則需用各種類型的物質(zhì)作為支持物，常用的支持物有濾紙、醋酸纖維薄膜、非凝膠性支持物、凝膠性支持物及硅膠-G薄層等，分子生物學(xué)領(lǐng)域中常用的是瓊脂糖凝膠電泳。

　　下面簡(jiǎn)單介紹其使用方法及注意事項(xiàng)

　　1.首先用導(dǎo)線將電泳槽的兩個(gè)電極與電泳儀的直流輸出端聯(lián)接，注意極性不要接反。

　　2.電泳儀電源開(kāi)關(guān)調(diào)至關(guān)的位置，電壓旋鈕轉(zhuǎn)到最小，根據(jù)工作需要選擇穩(wěn)壓穩(wěn)流方式及電壓電流范圍。

　　3.接通電源，緩緩旋轉(zhuǎn)電壓調(diào)節(jié)鈕直到達(dá)到的所需電壓為止，設(shè)定電泳終止時(shí)間，此時(shí)電泳即開(kāi)始進(jìn)行。

　　4.工作完畢后，應(yīng)將各旋鈕、開(kāi)關(guān)旋至零位或關(guān)閉狀態(tài)，并撥出電泳插頭。

 

　　注意事項(xiàng)：

　　1.電泳儀通電進(jìn)入工作狀態(tài)后，禁止人體接觸電極、電泳物及其它可能帶電部分，也不能到電泳槽內(nèi)取放東西，如需要應(yīng)先斷電，以免觸電。同時(shí)要求儀器必須有良好接地端，以防漏電。

　　2.儀器通電后，不要臨時(shí)增加或撥除輸出導(dǎo)線插頭，以防短路現(xiàn)象發(fā)生，雖然儀器內(nèi)部附設(shè)有保險(xiǎn)絲，但短路現(xiàn)象仍有可能導(dǎo)致儀器損壞。

　　3.由于不同介質(zhì)支持物的電阻值不同，電泳時(shí)所通過(guò)的電流量也不同，其泳動(dòng)速度及泳至終點(diǎn)所需時(shí)間也不同，故不同介質(zhì)支持物的電泳不要同時(shí)在同一電泳儀上進(jìn)行。

　　4.在總電流不超過(guò)儀器額定電流時(shí)(最大電流范圍)，可以多槽關(guān)聯(lián)使用，但要注意不能超載，否則容易影響儀器壽命。

　　5.某些特殊情況下需檢查儀器電泳輸入情況時(shí)，允許在穩(wěn)壓狀態(tài)下空載開(kāi)機(jī)，但在穩(wěn)流狀態(tài)下必須先接好負(fù)載再開(kāi)機(jī)，否則電壓表指針將大幅度跳動(dòng)，容易造成不必要的人為機(jī)器損壞。

　　6.使用過(guò)程中發(fā)現(xiàn)異常現(xiàn)象，如較大噪音、放電或異常氣味，須立即切斷電源，進(jìn)行檢修，以免發(fā)生意外事故。

　　電泳儀的輸出為何達(dá)不到設(shè)定值？

　?、匐娪緝x的輸出狀態(tài)遵守“循歐姆定律”：電壓U=電流I×(電泳槽)電阻R相對(duì)不變的情況下，U、I、P(功率P=電流I×電壓U)中任意一個(gè)參數(shù)恒定，其他參數(shù)也隨之恒定；而任意一個(gè)參數(shù)變化，其他參數(shù)也隨之正比變化

　?、谌绻娪緝x的輸出電壓U達(dá)不到預(yù)置值，應(yīng)首先觀察I或P是否已經(jīng)恒定，或者已經(jīng)達(dá)到電泳儀所規(guī)定的最大I或P(JY電泳儀均有明確指示燈標(biāo)志)。如果尚未達(dá)到極限值，將已經(jīng)恒定I或P的設(shè)置調(diào)大(有必要的話至極限值)，才能夠提高電壓輸出；

　?、廴绻娪緝x的電流I達(dá)不到預(yù)置值，可調(diào)整電壓U或功率P；

　　④如果電泳儀的功率P達(dá)不到預(yù)置值，可調(diào)整電壓U或電流I。

　　所謂電泳，是指帶電粒子在電場(chǎng)中的運(yùn)動(dòng)，不同物質(zhì)由于所帶電荷及分子量的不同，因此在電場(chǎng)中運(yùn)動(dòng)速度不同，根據(jù)這一特征，應(yīng)用電泳法便可以對(duì)不同物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析，或?qū)⒁欢ɑ旌衔镞M(jìn)行組份分析或單個(gè)組份提取制備，這在臨床檢驗(yàn)或?qū)嶒?yàn)研究中具有極其重要的意義。電泳儀正是基于上述原理設(shè)計(jì)制造的。

　　

電泳儀 電泳儀的使用及輸出達(dá)不到設(shè)定值問(wèn)題處理_電泳儀 　　凝膠電泳儀通常用于分析用途，但也可以作為制備技術(shù)，在采用某些方法（如質(zhì)譜(MS)、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)、克隆技術(shù)、DNA測(cè)序或者免疫印跡）檢測(cè)之前部分提純分子。
　　
　　一、使用方法
　　
　　該技術(shù)操作簡(jiǎn)便快速，可以分辨用其它方法（如密度梯度離心法）所無(wú)法分離的DNA片段。當(dāng)用低濃度的熒光嵌入染料溴化乙啶(Ethidiumbromide,EB)染色,在紫外光下至少可以檢出1-10ng的DNA條帶,從而可以確定DNA片段在凝膠中的位置。此外,還可以從電泳后的凝膠中回收特定的DNA條帶,用于以后的克隆技術(shù)操作。
　　
　　二、產(chǎn)品應(yīng)用
　　
　　凝膠電泳被廣泛用于分子生物學(xué)、遺傳學(xué)和生物化學(xué)：1.大的DNA或者RNA分子通常利用瓊脂糖凝膠電泳（agarose gel electrophoresis）分離，也可以使用聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）。2.蛋白質(zhì)的凝膠電泳通常在加入十二烷基硫酸鈉的聚丙烯酰胺凝膠中進(jìn)行（SDS-PAGE），或者非變性凝膠電泳，或二維電泳。SDS-PAGE蛋白質(zhì)凝膠電泳圖。3.毛細(xì)管電泳。4.酶譜法（zymography）。5.變性梯度膠凝電泳（Denaturing Gradient Gel Electrophoresis，DGGE）。瓊脂糖和聚丙烯酰胺可以制成各種形狀、大小和孔隙度。瓊脂糖凝膠分離DNA片度大小范圍較廣,不同濃度瓊脂糖凝膠可分離長(zhǎng)度從200bp至近50kb的DNA片段。瓊脂糖通常用水平裝置在強(qiáng)度和方向恒定的電場(chǎng)下電泳。聚丙烯酰胺分離小片段DNA(5-500bp)效果較好,其分辯力極高,甚至相差1bp的DNA片段就能分開(kāi)。聚丙烯酰胺凝膠電泳很快,可容納相對(duì)大量的DNA,但制備和操作比瓊脂糖凝膠困難。聚丙烯酰胺凝膠采用垂直裝置進(jìn)行電泳。目前,一般實(shí)驗(yàn)室多用瓊脂糖水平平板凝膠電泳裝置進(jìn)行DNA電泳。
　　
　　瓊脂糖主要在DNA制備電泳中作為一種固體支持基質(zhì),其密度取決于瓊脂糖的濃度。在電場(chǎng)中,在中性pH值下帶負(fù)電荷的DNA向陽(yáng)極遷移,其遷移速率由下列多種因素決定:
　　
　　1、DNA的分子大小：線狀雙鏈DNA分子在一定濃度瓊脂糖凝膠中的遷移速率與DNA分子量對(duì)數(shù)成反比，分子越大則所受阻力越大，也越難于在凝膠孔隙中蠕行，因而遷移得越慢。
　　
　　2、瓊脂糖濃度
　　
　　一個(gè)給定大小的線狀DNA分子,其遷移速度在不同濃度的瓊脂糖凝膠中各不相同。DNA電泳遷移率的對(duì)數(shù)與凝膠濃度成線性關(guān)系。凝膠濃度的選擇取決于DNA分子的大小。分離小于0.5kb的DNA片段所需膠濃度是1.2-1.5%,分離大于10kb的DNA分子所需膠濃度為0.3-0.7%,DNA片段大小間于兩者之間則所需膠濃度為0.8-1.0%。
　　
　　3、DNA分子的構(gòu)象
　　
　　DNA分子處于不同構(gòu)象時(shí),它在電場(chǎng)中移動(dòng)距離不僅和分子量有關(guān),還和它本身構(gòu)象有關(guān)。相同分子量的線狀、開(kāi)環(huán)和超螺旋DNA在瓊脂糖凝膠中移動(dòng)速度是不一樣的,超螺旋DNA移動(dòng)zui快,而開(kāi)環(huán)雙鏈DNA移動(dòng)zui慢。如在電泳鑒定質(zhì)粒純度時(shí)發(fā)現(xiàn)凝膠上有數(shù)條DNA帶難以確定是質(zhì)粒DNA不同構(gòu)象引起還是因?yàn)楹衅渌鸇NA引起時(shí),可從瓊脂糖凝膠上將DNA帶逐個(gè)回收,用同一種限制性內(nèi)切酶分別水解,然后電泳,如在凝膠上出現(xiàn)相同的DNA圖譜,則為同一種DNA。
　　
　　三、維護(hù)與保養(yǎng)
　　
　　電泳儀通電進(jìn)入工作狀態(tài)后，禁止人體接觸電極、電泳儀電泳物及其它可能帶電部分，也不能到電泳儀電泳槽內(nèi)取放東西，如需要應(yīng)先斷電，以免觸電。同時(shí)要求電泳儀必須有良好接地端，以防漏電。
　　
　　電泳儀通電后，不要臨時(shí)增加或撥除輸出導(dǎo)線插頭，以防短路現(xiàn)象發(fā)生，雖然電泳儀內(nèi)部附設(shè)有保險(xiǎn)絲，但短路現(xiàn)象仍有可能導(dǎo)致電泳儀損壞。
　　
　　由于電泳儀不同介質(zhì)支持物的電阻值不同，電泳儀電泳時(shí)所通過(guò)的電流量也不同，其電泳儀泳動(dòng)速度及泳至終點(diǎn)所需時(shí)間也不同，故電泳儀不同介質(zhì)支持物的電泳不要同時(shí)在同一電泳儀上進(jìn)行。
　　
　　在總電流不超過(guò)電泳儀額定電流時(shí)(zui大電流范圍)，可以多槽關(guān)聯(lián)使用，但要注意不能超載，否則容易影響電泳儀壽命。
　　
　　某些特殊情況下需檢查電泳儀電泳輸入情況時(shí)，允許在穩(wěn)壓狀態(tài)下空載開(kāi)機(jī)，但在穩(wěn)流狀態(tài)下必須先接好負(fù)載再開(kāi)機(jī)，否則電壓表指針將大幅度跳動(dòng)，容易造成不必要的人為電泳儀損壞。
　　
　　使用過(guò)程中發(fā)現(xiàn)電泳儀異?，F(xiàn)象，如較大噪音、放電或異常氣味，須立即切斷電泳儀電源，進(jìn)行檢修，以免發(fā)生意外事故。